牦牛舌抗菌肽基因cDNA的克隆及其在生殖系统中的表达

为了解牦牛舌抗菌肽(LAP)基因序列的特征及其在生殖系统中的表达情况,采用RT-PCR法从牦牛睾丸、附睾组织中扩增LAP基因,重组到pMD19-TSimple载体中,进行了测序和序列分析,并应用RT-PCR检测了雌性牦牛生殖系统(卵巢、输卵管、子宫、阴道等组织)中LAPmRNA的表达。结果显示,克隆的LAP基因包含一195bp的完整开放阅读框(ORF),与牛LAP基因相似性达97.9%,该ORF编码的64个氨基酸含有β-防御素特征性结构,即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基;LAP在牦牛生殖系统上皮组织中均有表达。推测LAP在牦牛生殖系统的先天免疫中具有重要作用。     

雌性骆驼生殖组织β-防御素-1基因的克隆及其组织表达量的检测

从雌性骆驼输卵管、子宫、子宫颈、阴道组织中提取总RNA,根据已发表的骆驼β-防御素-1基因的cDNA序列设计合成引物,采用RT-PCR扩增出了骆驼β-防御素-1基因;将扩增产物克隆于pBlueselectT载体后进行了序列分析。以β-肌动蛋白(β-actin)基因作为内参,对扩增的β-防御素-1基因进行琼脂糖凝胶电泳后,应用凝胶成像分析系统,推断出了不同组织中β-防御素-1基因的表达量。结果,从雌性骆驼生殖各组织上皮均获得了203 bp的β-防御素-1基因的扩增片段,且β-防御素-1基因在雌性骆驼生殖道各组织内的表达量不同。结果表明,β-防御素-1在雌性骆驼生殖组织的先天免疫中起重要作用。     

SPAG11基因在雄性牦牛生殖器官中表达的检测

为了检测精子相关抗原11(sperm-associated antigen 11,SPAG11)基因在雄性牦牛生殖器官中的表达谱并分析其组织表达特性,从牦牛附睾头总RNA中RT-PCR扩增SPAG11基因(SPAG11C、D、E、U、V和W),半定量RT-PCR分析SPAG11mRNA在牦牛生殖器官中的表达水平。采用合成的SPAG11E多肽制备牦牛SPAG11E多克隆抗体,免疫组织化学检测SPAG11E蛋白在睾丸和附睾中的表达及定位情况。结果显示,SPAG11C、U、V和W基因在睾丸和附睾相对低表达,而SPAG11D和E基因相对高表达;SPAG11C和U基因在输精管相对低表达,而SPAG11E相对高表达;除SPAG11D在卵巢相对低表达外,SPAG11基因在其他雌性生殖器官均不表达。免疫组织化学结果显示,SPAG11E蛋白在睾丸的精子细胞和附睾内壁精子头部表达。结果表明,SPAG11基因的表达具有组织特异性,提示它在牦牛睾丸和附睾中可能发挥重要的免疫功能和生殖功能。     

高原地区成年藏绵羊和小尾寒羊附睾组织中eNOS的差异表达研究

采用免疫组化SP法结合IPP统计分析法,比较高原地区成年藏绵羊和小尾寒羊附睾组织中eNOS的定位及分布特征。结果显示,eNOS在藏绵羊及小尾寒羊附睾各部分间质及血管壁均有表达,藏绵羊管腔上皮未见表达,而在小尾寒羊主要定位于附睾各部分管腔上皮。平均光密度值统计表明,eNOS在藏绵羊附睾尾部显著高于附睾头和附睾体(P0.05),小尾寒羊附睾体eNOS的表达显著高于藏绵羊(P0.05)。本研究提示在高原低氧环境中eNOS参与血管舒缩调节附睾局部微循环对氧的摄取;eNOS在小尾寒羊附睾管腔上皮的强表达可能是附睾微环境低氧应激反应的一个方面,它在高原地区动物附睾的调节机制有待于进一步研究。     

L-PGDS基因在大鼠睾丸与附睾中的表达

选用 2月龄SD大鼠睾丸与附睾总RNA为模板 ,运用RT PCR和蛋白质印迹技术探讨了Lipocalin型前列腺素D合成酶 (L PGDS)基因在大鼠睾丸与附睾头、附睾体和附睾尾中的表达及其差异。结果表明 ,L PGDS基因在大鼠睾丸中没有表达 ,在附睾中有较强表达 ,附睾头表达量最高 ,附睾体次之 ,附睾尾最低 ,表达量存在差异。提示 ,L PGDS在精子成熟过程中起着一定的作用。     

饮水染镉对雄性大鼠精子发生的影响

通过对性成熟及性未成熟雄性大鼠进行慢性饮水染镉,探究了镉对大鼠精子发生的影响,为镉对雄性大鼠生殖毒性作用及其机理的研究奠定理论基础。将30只雄性SD大鼠(性成熟)随机等分成5组,分别饮用镉的质量浓度为0、25、50、100和200mg/L的饮水,试验期为56d;将15只雄性SD大鼠(性未成熟)随机等分成3组,分别饮用镉的质量浓度为0、50和200mg/L的饮水,试验期为105d。试验期结束后观察大鼠的附睾尾重、附睾尾中精子活力、精子活率、精子密度、精子形态等指标的变化情况。结果显示,对于性成熟大鼠,100mg/L镉剂量组与对照组相比,上述指标显著下降(P0.05),200mg/L镉剂量组与100mg/L镉剂量组相比,上述指标极显著下降(P0.01);100mg/L镉剂量组的精子畸形率与对照组相比,呈极显著增加(P0.01)。对于性未成熟大鼠,50mg/L镉剂量组与对照组相比,上述指标显著下降(P0.05),200mg/L镉剂量组与50mg/L镉剂量组相比,上述指标极显著下降(P0.01);50mg/L镉剂量组的精子畸形率与对照组相比,极显著升高(P0.01)。结果表明,慢性饮水染镉对动物精子的发生具有毒性作用,可明显影响雄性动物的生育功能,且存在剂量效应和时间效应关系。     

双酚A对雄性小鼠睾丸发育和生殖激素分泌水平的影响

为研究不同剂量的双酚A(BPA)对雄性小鼠生殖系统的损伤作用,将25g左右的雄性小鼠40只随机分成对照组、BPA(10、50、100mg/kg)染毒组,每组10只,连续7d对小鼠腹腔注射BPA,对照组注射等量的橄榄油,1次/d,染毒结束后摘取并称量大鼠睾丸、附睾质量并计算脏器指数;光镜检测睾丸病理学改变;酶联免疫法检测血中睾丸酮、黄体生成素水平。结果显示,与对照组相比,小鼠睾丸重量、附睾重量及其脏器指数显著降低(P0.05,P0.01);双酚A组中的曲细精管部分支持细胞与生精细胞分离,生精细胞松散,无规律,各层细胞发生紊乱;随染毒剂量的增加,小鼠血清中睾丸酮和黄体生成素的含量逐渐降低,50mg/kg和100mg/kg两个剂量组睾丸酮和黄体生成素的浓度与对照组相比差异极显著(P0.01)。结果表明BPA可引起雄性小鼠生殖系统的损伤。     

内源性绵羊肺腺瘤病毒生殖生物学的研究进展

从内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)的基因结构特点、染色体中的分布、在绵羊肺腺瘤发生过程中的作用、孕体植入前的作用、对胎盘形成的影响等方面综述了enJSRV生殖生物学作用的最新研究进展,为哺乳动物内源性逆转录病毒生殖生物学领域的研究提供了新的思路.     

比格犬β-防御素cBD1基因的原核表达与鉴定

为获得比格犬β-防御素cBD1基因的表达产物,根据GenBank中登录的犬β-防御素基因cBD1(canis familiarisβ-defensin-like peptide 1)的序列设计引物,提取比格犬睾丸组织总RNA,利用PCR扩增cBD1基因,然后将其克隆至pET-32a(+)载体,构建原核表达质粒pET-32a-cBD1,通过PCR、酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了约28ku的表达产物,与预期大小的β-防御素cBD1的分子质量相一致。Westernblot分析表明,表达产物与抗His标签鼠单克隆抗体发生反应,显示重组蛋白获得了表达。结果表明,成功表达的cBD1为新型抗菌制剂的研制奠定了试验基础。     

GCNF在牦牛睾丸不同发育阶段中的表达与定位

生殖细胞核因子(GCNF)是核受体超家族的一员。相关研究发现,GCNF在睾丸和卵巢中高表达,可能在配子减数分裂中发挥作用。为探究GCNF在牦牛睾丸中的表达与定位,采集牦牛不同发育阶段(幼年、成年、老年)的睾丸组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测GCNF基因在组织中的相对表达量;采用Western-blot(WB)检测GCNF蛋白在不同年龄阶段睾丸中的表达水平;免疫组织化学方法分析GCNF在牦牛睾丸分布特征。qRT-PCR和WB检测结果显示,GCNF在牦牛睾丸不同年龄阶段均有表达,且表达存在差异性。幼年期GCNF在基因水平和蛋白水平表达量最高且显著高于成年期和老年期;老年期显著高于成年期,成年期表达量最低。免疫组织化学结果显示:在睾丸不同发育阶段GCNF的表达定位无明显差异,主要在生精细胞和圆形精子细胞中表达,间质细胞和支持细胞中也有少量表达。上述研究结果表明,GCNF可能参与精子的发生及分化变形,这为牦牛生殖生育研究提供了理论基础和新的依据。     

蒙古绵羊输卵管上皮细胞β-防御素mRNA相对表达水平的实时荧光定量PCR检测

为了检测培养的蒙古绵羊输卵管上皮细胞内sBD-1 mRNA表达水平,运用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术进行了相对定量测定.首先,建立蒙古绵羊输卵管上皮细胞培养体系作为体外试验模型,提取细胞总RNA,根据GenBank中羊β-防御素基因序列,设计合成引物,进行实时荧光定量PCR.以β-Actin基因为内参基因,对sBD-1 mRNA进行均一化处理,利用荧光阈值(C2值)计算sBD+1 mRNA的相对表达量.经测序分析,扩增产物为β-防御素.结果显示,SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术可以测定蒙古绵羊β-防御素mRNA表达水平的相对含量.     

硫酸乙酰肝素的组成及其对病毒感染的影响

硫酸乙酰肝素(HS)是一类由多个二糖重复单元组成的线性硫酸化异构多糖,广泛存在于哺乳动物细胞表面和细胞外基质中。HS大分子通过相互作用识别并结合呈正电荷特性的病毒粒子,增强其对宿主细胞的感染能力,因此HS可作为病毒感染靶细胞的特异性受体。已有研究证实,HS参与口蹄疫病毒(FMDV)等多种病毒的吸附和入胞过程,在病毒感染中发挥重要作用。本文概述了HS的组成及其对病毒感染的影响,以期为HS的研究提供参考。     

鸡β防御素2成熟肽基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性分析

为构建基因重组酵母菌株表达鸡β防御素2(Gal-2)并研究其抗菌活性,将鸡β防御素2成熟肽基因克隆到pPIC9K中,获得重组分泌表达质粒pPIC9K-Gal-2并用电转化法转入酵母菌GS115,筛选出阳性克隆后用甲醇诱导,表达上清经Tricine-SDS-PAGE和抑菌试验检测,最后通过禽致病性大肠杆菌CVCC1565感染雏鸡,研究表达上清的预防效果。结果表明,重组分泌表达质粒pPIC9K-Gal-2构建成功,Tricine-SDS-PAGE检测到分子质量在5.8ku左右的目的条带,表达上清能抑制包括2种禽致病菌在内的多种细菌的生长;在禽致病性大肠杆菌感染雏鸡的试验中,注射不同浓度的Gal-2表达上清组与空酵母表达上清组、PBS对照组相比,死亡率均极显著降低(P<0.01),表达上清显示了较好的预防效果。该研究成功构建了表达鸡β防御素2的毕赤酵母菌株,为鸡防御素作为新型饲料添加剂的研发提供了基础。     

脑红蛋白在双峰驼视网膜中的表达研究

为了探讨双峰驼视网膜全层中脑红蛋白(NGB)的分布特征,选择健康成年双峰驼,利用免疫组化SP法染色,观察NGB在双峰驼视网膜各层中的表达情况。结果显示,NGB在除视网膜外核层之外的其他区域均有表达,且存在表达强度的差异,其主要分布在节细胞及双极细胞的细胞质、光感受器细胞及色素上皮细胞中。以上结果表明,NGB几乎分布于视网膜全层,提示在极端生存环境适应性中,NGB对维持视网膜中的氧稳态及参与光损伤修复机制过程中可能具有非常重要的生理意义。NGB在双峰驼光感受器外节段中的阳性表达,丰富了NGB在哺乳动物视网膜中分布的形态学资料,并且对其功能研究提供了有价值的线索。     

KiSS-1基因在黄牛精子发生中的表达

为探讨亲吻素在黄牛精子发生中的生理功能,并为家畜生殖生理学研究提供参考,运用免疫组织化学SABC染色法并采用Image Pro-Plus 6.0软件,对成年黄牛睾丸中KiSS-1的表达及分布特征进行了研究。结果显示,在成年黄牛睾丸的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、早期精子细胞及间质细胞中均发现KiSS-1阳性反应产物,其各阳性细胞积分光密度(IOD)值的大小顺序为IOD初级精母细胞>IOD间质细胞>IOD次级精母细胞>IOD精原细胞>IOD早期精子细胞,而阳性产物在晚期精子细胞、精子和支持细胞及睾丸间质血管上未被发现;在部分间质细胞周围可见大量的KiSS-1免疫阳性反应产物,而在其他阳性细胞周围未见此现象。结果证实,KiSS-1基因在黄牛精子发生中发挥着重要作用,尤其在精原细胞的有丝分裂和精母细胞的减数分裂中可能发挥着非常重要的作用,而且间质细胞具有向睾丸微环境中分泌KiSS-1的功能。     

FSH受体在雌性山羊肠系膜后神经节中的分布

为了探讨卵泡刺激素(FSH)是否可以通过影响腹腔肠系膜后神经节的活动调节雌性山羊的生殖活动,采用免疫组织化学染色法研究了雌性山羊肠系膜后神经节中FSH受体的分布特点。结果显示,在肠系膜后神经节中,FSH受体免疫阳性产物在雌性山羊肠系膜后神经节中分布广泛,神经细胞、支持细胞、施万细胞以及过路纤维中均有分布,但主要分布在神经细胞中;在神经细胞中,FSH受体免疫阳性产物主要存在于细胞膜和细胞质中,而细胞核中分布较少,呈弱阳性。表明雌性山羊肠系膜后神经节神经元对FSH具有反应性,提示FSH可能通过肠系膜后神经节发出的交感节后神经这一途径调节生殖系统的机能活动。     

雏鸭锰缺乏症的调查研究

锰是家畜生长和生殖必不可少的一种微量元素,它具有影响生长、发育、繁殖及某些内分泌、骨骼的生长和结构、造血过程、脂肪代谢等广泛的生物学作用和生理功能。所以鸟类对缺锰比哺乳动物更为敏感,因为鸟类对锰的需要量远远大于哺乳动物。而目前家禽通用的日粮中锰一般不足,易引起锰缺乏症。 近年来国内外对家禽锰缺乏症虽有报道,但对雏鸭锰缺乏症的系统报告较少。本文就咸阳某鸭场雏鸭锰缺乏症的调查研究结果作以初步报道。     

高原鼠兔实验动物化研究--雄性高原鼠兔在上海地区的若干繁殖特性观测

对高原鼠兔(Ochotona curzoniae)在上海地区的若干繁殖特性观察结果表明,鼠兔的精子畸形率为11.64%,影响了其在上海低海拔地区的繁殖;非繁殖季节应用外源生殖激素对诱导雄性鼠兔的睾丸发育亦有一定的效果.     

犬MG53基因的克隆与表达

为进一步研究犬MG53在机体内的分布情况及其生物活性,本研究设计特异性引物进行犬MG53目的基因的克隆,并将其连接至p MAL-C5X表达载体中,利用大肠杆菌表达系统进行表达。结果显示,克隆得到由1 435个核苷酸构成的犬MG53基因;获得MG53蛋白与麦芽糖结合蛋白标签(MBP)融合表达的可溶性重组蛋白,大小约为95 ku。通过结构及生物学功能预测发现,该蛋白易降解,具有RING、B-Box、Coiledcoil及SPRY-PRY四个功能结构域,并分布有半胱胺(Cysteamine)、2-氨基乙硫醇(2-Amino-1-Ethanethiol)、硫代乙醇胺(Thioethanolamine)、2,3-Deshydrolanthionine、Zn2+及Mg2+等分子结合位点,具有蛋白结合能力。上述结果表明,犬MG53与人、家兔、小鼠、大鼠MG53的结构相似,并可能具有参与泛素化、骨骼肌细胞修复等重要的生物学功能。     

HSP27在黄体期牦牛主要生殖器官中表达差异的研究

为了探讨正常生理条件下牦牛热休克蛋白27(HSP27)在黄体期牦牛主要生殖器官中的表达差异,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测了HSP27基因在黄体期牦牛卵巢、输卵管和子宫中的相对表达量,用Western-blot和免疫组织化学SP法研究了HSP27蛋白在黄体期牦牛卵巢、输卵管和子宫中的表达量和组织内分布。RT-qPCR分析表明,HSP27基因在黄体期牦牛卵巢、输卵管和子宫中均有表达,其中卵巢中的表达量分别是输卵管和子宫组织的1.03倍和4.63倍。免疫组织化学结果表明,牦牛卵泡膜内层、颗粒层、输卵管黏膜上皮、子宫内膜上皮和子宫腺中均有HSP27阳性表达。Western-blot和免疫组织化学结果表明,HSP27蛋白在黄体期牦牛各主要生殖器官组织中表达差异极显著(P0.01),其中在卵巢中表达量最高,在子宫中表达量最低。本试验结果表明,HSP27在黄体期牦牛的各个主要生殖器官中存在表达差异,这为进一步研究HSP27在哺乳动物生殖过程中发挥的作用提供了理论依据。