鸡β-防御素-8 cDNA在大肠杆菌中的融合表达

为了评价鸡β-防御素的功能与基因工程化生产的可能性,从已构建的重组载体pGEM-T Easy-gal-8中克隆gal-8成熟肽cDNA,将该cDNA插入原核表达载体pGEX-6P-1中,构建表达质粒pGEX-6P-1-gal-8,然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中.挑取阳性克隆菌用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果检测显示,融合表达的GST-gal-8蛋白大小约30 ku,经灰度扫描显示该融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的119 mg/L.用固定化的谷胱甘肽亲和层析柱进行蛋白纯化,融合蛋白经Prescission蛋白酶酶切并纯化获得了完整的gal-8成熟多肽.抑菌活性试验显示,表达的gal-8成熟肽对黄色微球菌有一定的抑菌活性.     

禽致病性大肠杆菌强毒力岛摄铁功能与致病性关系的研究

采用PCR法检测强毒力岛主要结构基因irp1、irp2、fyuA在禽致病性大肠杆菌中的分布;铬苯胺醇法检测铁载体的合成;SDS-PAGE法检测耶尔森菌摄铁蛋白HMWP1和HMWP2的表达,以半数致死量试验测定禽致病性大肠杆菌致病性与强毒力岛摄铁功能的关系。结果表明,7株禽致病性大肠杆菌强毒力岛irp1、irp2和fyuA基因的检出率为100%;铬苯胺醇平板上都能产生橙色透明晕圈;缺铁条件下,能够表达与耶尔森菌相同的摄铁蛋白HMWP1和HMWP2且半数致死量试验验证禽致病性大肠杆菌的毒力与强毒力岛摄铁功能呈正相关。证实禽致病性大肠杆菌中强毒力岛的摄铁功能与其致病性有密切的联系。     

阪崎克罗诺杆菌RPA-LF检测方法的建立

以阪崎克罗诺杆菌特异性基因16SrRNA和外膜蛋白基因ompA为靶序列,设计适用于重组酶聚合酶扩增-侧流层析技术(RPA-LF)的引物和探针,并优化反应条件.结果表明,RPA反应可在25～45℃进行,10～20 min即可完成.优化条件后,RPA-LF总反应时间仅为20 min,包括RPA在39℃反应15 min,RP...     

鸡β防御素2成熟肽基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性分析

为构建基因重组酵母菌株表达鸡β防御素2(Gal-2)并研究其抗菌活性,将鸡β防御素2成熟肽基因克隆到pPIC9K中,获得重组分泌表达质粒pPIC9K-Gal-2并用电转化法转入酵母菌GS115,筛选出阳性克隆后用甲醇诱导,表达上清经Tricine-SDS-PAGE和抑菌试验检测,最后通过禽致病性大肠杆菌CVCC1565感染雏鸡,研究表达上清的预防效果。结果表明,重组分泌表达质粒pPIC9K-Gal-2构建成功,Tricine-SDS-PAGE检测到分子质量在5.8ku左右的目的条带,表达上清能抑制包括2种禽致病菌在内的多种细菌的生长;在禽致病性大肠杆菌感染雏鸡的试验中,注射不同浓度的Gal-2表达上清组与空酵母表达上清组、PBS对照组相比,死亡率均极显著降低(P<0.01),表达上清显示了较好的预防效果。该研究成功构建了表达鸡β防御素2的毕赤酵母菌株,为鸡防御素作为新型饲料添加剂的研发提供了基础。     

密码子优化前后AvBD2成熟肽基因的表达水平及其抑菌活性的比较

根据大肠杆菌的密码子偏好性,将编码AvBD2成熟肽的基因原片段Na-AvBD2优化为片段Op-AvBD2,将2条片段分别转化至大肠杆菌中重组表达,表达产物经GST树脂纯化后,对二者的表达水平和抗菌活性进行了比较。结果,融合蛋白rOp-AvBD2的表达量比rNa-AvBD2高2倍。而两者对大肠杆菌(CM-CC44102)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、鸡白痢沙门氏菌(CVCC533)和粪肠球菌(ATCC29212)的抑菌活性及对鸡白痢沙门氏菌(CVCC533)和粪肠球菌(ATCC29212)菌体超微结构的破坏程度无显著差异。结果提示AvBD2在预防和治疗细菌感染中具有替代抗生素的潜在应用价值,而密码子优化将成为通过基因工程生产AvBDs的可行途径。     

组胺和细菌内毒素引起山羊弥漫性血管内凝血的研究

本试验通过给山羊颈静脉注射细菌内毒素和组胺，检测血浆凝血酶原时间（ＰＴ）、乙醇胶试验（ＥＧＴ）、鱼精蛋白副凝试验（ＰＰＰ）和血小板计数、探讨细菌内毒素和组胺对山羊血液凝固系统的影响。实验结果表明：给山羊静脉注入内毒素和组胺后能迅速导致机体弥漫性血管内凝血（ＤＩＣ）的形成。     

乳牛盲肠左方变位临床观察

奶牛盲肠左方变位至今尚未见报道过。安徽农学院牧场一头黑白花奶牛于1991年9月发生盲肠左方变位,现将诊治情况报告如下。(一)病史与症状1991年6月26日,挤奶员放牛入舍时发现患牛不吃不喝、不倒沫,精神异常,烦燥不安,不断回头望腹,后肢频频踢腹,时而前冲扒到食槽中,时而突然倒地四肢划动,有时磨牙痛苦呻吟,肚腹胀满,右侧比左侧明显。     

山莨菪碱治疗危重病畜的效果观察

山莨菪碱自1965年应用临床以来,对抢救多科危重病症收到明显疗效。现就几年来应用山莨菪碱对各种原因引起的危重病例的治疗情况,整理分析如下。 (一)病例 1985年3月～1987年6月间,界首县砖集兽医站收治因各种原因引起的不同类型危重病畜共46例,其中包括瘤胃酸中毒、犊牛腹泻、出血性肠炎、产道峡窄性难产、子宫内膜炎、子宫脱并发直肠脱、猪食盐中毒、有机磷中毒、甘薯黑斑病中毒、急性肺水肿。 (二)临床指标 危重病畜表现可视粘膜苍白或发绀,耳、鼻、四肢末梢厥冷,皮温不