PCR-SSP法检验HLA-DRB基因多态性的法医学应用

HLA是迄今发现的最复杂的人类遗传标记，具有高度多态性。由于用传统的淋巴细胞毒试验检验HLA分型，对检材要求很高，因此很难应用于法医学领域中。随着分子生物学技术的迅猛发展，HLA分型已深入到基因水平。国内陆续研究报道了应用PCR一特异性寡核着酸探针（SSOP）及PCR-单链构象多态性（SSCP）对HLAⅡ类抗原的DQ－A及DQ－B等位基因进行分型，使HLA在法医学中的应用成为现实。本文应用1992年瑞典Olerup和Zetterquist首创的PCR-序列特异引物（PCR-SSP）方法对HLA－DRB基因分型在法医学中的应用进行了初探，认为在法医…     

中国北方汉族人群HLA-DQα基因型及其等位基因频率的分布

应用PCR和等位基因特异性寡该苷酸（ASO）探针杂交技术对中国北方汉族人群的HLA－DQα基因进行分型。在246例无关个体中观察到4种等位基因组成的10种基因型。等位基因频率分布在10．0～31．9％之间。基因型的分布符合Hardy－Weinberg定律。DP值为0．8669。对6个家系49个个体的调查表明，HLA－DQα基因按孟德尔方式遗传。不同人群HLA－DQα的DP值比较，中国人群高于其它人群。     

HLA-DQα和PM位点扩增分型技术在法医物证学上的应用

目的：对HLA－DQα和PM位点进行多态性研究并应用于实际检案。方法：用PCR结合反相杂交技术进行扩增并分型。结果：获得HLA－DQα和PM位点的基因频率分布数据。结论：上述位点具有高度多态性，累积个体鉴别能力（DP值）达99．95％，是法医学亲权鉴定和个体识别领域非常有价值的遗传标记系统。     

PM+HLADQA1位点扩增分型技术的应用

多标记系统（polymarker、PM）位点检测技术包括有低密度脂蛋白的受体（LDLR）、血型糖蛋白A（GYPA）、血红蛋白G球蛋白（HBGG）、型特异性成分（GC）及D７S８等５个位点,分别位于第１９、４、１１、４、７号染色体上。HLADQA１位点位于HLAⅡ类基因HLA－DQ亚区中的DQA１基因座,在其第三个外显子中存在一个等位基因变异区,该区经克隆和序列分析已确定有８个等位基因。PM系统和HLADQA１可用PCR反向斑点印迹杂交技术进行检测,由PE公司生产的PM＋HLADQA１试剂盒正是采取以上PM与HLADQA１位点联合扩增技术使在同…     

p33.4位点扩增片段长度多态性及其法医学应用的研究

以聚合酶链反应（PCR）、聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳和银染法对中国100名无关个体小卫星区域p33．4位点的扩增片段长度多态性（Amp－FLPs）进行了研究，检出了8个等位基因。通过BIOTRAC系统进行数据处理．各等位基因重复单位的数目分别为7、10到15，其中在13～14之间发现一差值不足一个重复单位长度的罕见等位基因。片段长度分布于603～1115bP之间，基因频率分布于0.5～33．5％间，杂合度为64％，DP值为84．5％。对5个家庭25名相关个体进行分析，符合孟德尔遗传定律；对同一个体不同组织的DNA进行P33.4位点的分型研究表明，该技术适宜于法医物证检验。此外，本研究以Chelex处理不同检材制备DNA模板用于扩增，率先建立了比常规方法更快、更简便、更为实用的检验方法。     

生物素掺入反向杂交法在法医学中应用的研究

建立了一套快速、准确检测人类 HLA－ DQA基因的反向杂交检测技术,可准确判定 HLA－ DQA基因位点的 6个等位基因即 0101、 0102、 0103、 0201、 0301、 0401。调查了中国北方汉族人群中 200例无关个体的 HLA－ DQA基因频率及基因型的频率分布,杂合度 (H)为 0.75,个体识别能力 (DP)为 0.928。采用生物素直接掺入 PCR扩增的方法, 1ng的 DNA样品即可准确判型。对血液、血斑、精斑、精液与阴道液的混合斑、肌肉组织等检材进行检测,效果良好。在刑事案件及亲子关系鉴定中应用,准确地判定了检材的 HLA－ DQA基因型,为侦察破案提供了科学依据。将此项技术商品化,完成了试剂盒的研制。     

短串联重复位点ACTBP2(SE33)的扩增片段长度多态性研究

应用变性聚丙烯酸胺凝胶电泳（dn－PAGE）结合银染色技术对短串联重复（STR）位点ACTBP2（SE33）的扩增片段长度多态性（Amp－FLPs）进行了研究。在210名无关中国个体中观察到了25个等位基因，等位基因频率分布在0．007～0．093之间。基因型的分布符合Hardy－Weinberg定律，个体识别能力（DP）值为0．99，杂合度（H）为98．7％。七个家系分析的结果表明，该位点的遗传符合孟德尔遗传法则，未观察到变异。对几种常见的法医物证检材的分析表明，该分型系统对DNA降解放为严重的检村适用性强，而且灵敏度高（0．5ng），适合于法医学实际应用。     

三个STR位点复合扩增多态性及法医学应用

STR（shorttandemrepeat），即短串重复序列，广泛存在于人类基因组中，平均每15kb就存在一个STR位点，为法医个体识别和亲子鉴定提供了丰富的遗传标记[1,2]。复合扩增多个多态片段长度不重叠STR位点，可以节约检材，提高单次PCR扩增的信息量。现将我们对三个STR位点（HHUMCSFIPO[AGAT]a，HUMT－POX[AATG]a，HUMTH01[AATG]a）复合扩增分型的研究以及在法医学中应用报道如下。材料和方法一、实验材料无关个体血样取自北京地区汉族个体，家系取自北京郊区两家庭，血痕、混合斑、毛发等为实验室积累，同一个体不同组织脏器…     

STR复合扩增及荧光检测技术在个体识别中的应用

目的 :使用 310型遗传分析仪对D3S1358等 10个位点进行基因型检测并应用于法医物证学个体识别案件。方法 :用PCR复合扩增结合四色荧光检测技术对样本DNA进行基因分型。结果 :常见物证检材可成功地得到检验。结论 :这些位点适用于法医物证学个体识别。     

印记基因KCNQ1的遗传多态性及在亲权鉴定中的应用

目的为了调查印记基因KCNQ1的STR位点在中国汉族人群中的遗传多态性，利用亲源印记等位基因（parentally imprinting allele，PIA）分型法确定孩子的等位基因亲代来源，为亲权鉴定提供新的侯选STR位点。方法应用Chelex法提取153例佳木斯地区汉族健康无血缘关系个体DNA，用QIAamp Blood Kit（Qiagen）法提取3个家庭10个个体DNA，PCR扩增，凝胶电泳分型，ABIPRISM^TM 3730XL DNA测序仪测序；甲基化敏感性限制性内切酶消化孩子基因组DNA，PCR扩增，确定孩子等位基因的亲代来源。结果发现在中国佳木斯地区汉族人群中KCNQ1基因的STR有7个等位基因，多态信息含量为0．662，且KCNQ1基因的STR位点呈父源印记。结论印记基因KCNQ1的STR位点有很好的多态性，可为亲权鉴定提供新的侯选遗传标记，其亲源特异性甲基化标记有望应用于单亲鉴定中。     

HLA—A基因座分步PCR—SSP分型研究

目的使HLA基因分型能应用于法医常见检材的个人识别。方法 建立检测HLA—A基因座的分步PCR—SSP方法。先用一对HLA—A基因座特异的引物作第一次扩增,以所得产物为模板,分别用对HLA—A30、A31、A33特异的3对引物作第二次扩增,二次扩增的产物经电泳判型。结果 1130例血清分型为HLA—A30、A31、A33的血痕,其PCR—SSP分型和血清分型的不符合率为29％;室温保存2年的精斑、唾液斑,保存18年的血痕第一次扩增均获得满意的结果。结论法医亲子鉴定和个人识别宜用基因分型替代血清分型。HLA—A基因座分步PCR—SSP基因分型适用于法医检材。     

亲子鉴定DNA分型亲权指数的简化计算法

PCR扩增DNA片段长度多态性位点，如AmP－FLP、PCR－STR分型技术，在亲子鉴定中应用日益增加。由于被选择应用的DNA位点均具高杂合度、高非父排除率，以及PCR技术取材广泛、灵敏度高等特点，PCR－DNA分型有。逐步取代常规血型检测的趋势。PCR－DNA分型结果表明，杂合子个体呈2条片段，纯合于及条片段，等位基因为共显性遗传，位点均具有不连续基因频率分布。所以，亲权指数计算并不复杂。本文依据单位点DNA分型特发，根据Esse。M6ller计算理论，提出一套简明亲权指数计算公式。同时对父子单亲亲子鉴定的亲权指数计算公式也作…     

PCR法对HLA-DQ_α基因的分型及其在性犯罪鉴定中的应用

本文应用 PCR 法及 ASO 探针斑点杂交技术,对100例无关个体血液 DNA 及10例性犯罪案件混合斑中精子 DNA 进行了 HLA-DQα基因的扩增及其 DNA 分型。结果正常人0.1～0.3μgDNA 就能满足 DQα基因扩增的需要。在100例个体中可以观察到由4种等位基因组成的10种 DQα基因型。10例不同条件的混合斑中精子 DNA 经30～60次扩增后与 ASO 探针杂交均能准确地判定 DQα基因型。HLA-DQα是个体识别能力较强的遗传标志。本文为性犯罪中精子来源的个体识别提供了一个新方法,具有一定的实用价值。     

用PCR-SSP法分析中国辽宁汉族HLA-DRBI基因多态性

应用PCR－SSP方法对辽宁地区159名无关个体进行HLA－DRB1位点基因分型，检出8组等位基因（扩增片段大小为100bp），基因频率范围在0．02201～0．23899。36种可能基因型中检出33种。经x2检验符合Hardy－Weinberg平衡定律。本地区汉族群体的期望杂合度为85％，观察杂合度为83％。个人鉴别机率（DP）为0．94非父排除率（EPP）为66％。本法具有简单、快速、结果可靠的特点，不仅适用于法医学亲子鉴定和个人识别、移植配型，亦可用于相关疾病及人类遗传学研究。     

HLA-A位点DNA分型及其法医学应用

应用聚合酶链反应0寡核苷酸探针（PCR－SSO）斑点杂交技术，对222名辽宁地区汉族人群无关个体进行HLA－A基因检测，研究中国辽宁地区汉族群体的HLA－A座位基因分布状况。共检出HLA－A等位基因24个，其中以等位基因HLA－A0201最为常见，频率为0．2635；依次是2402101和1101，等位基因频率分别为0．1847和0．1262.理论杂合度为87％，个人鉴别机率为92％，非父排除率为73．3％。在中国辽宁汉族中检出73种基因型，对观察值和期望值进行X2检验，符合Hardy－Weinberg平衡定律（x2＝6．28，df＝9，0．5＜P＜0．75）。家系分析结果表明按照孟德尔方式遗传。提出的中国辽宁汉族HLA－A等位基因的遗传基因情况，可用于法医学个人识别和亲子鉴定。人类学，HLA相关疾病，及器官移植研究。     

用PCR-SSCP法进行亲子鉴定及个体识别

HLA－DR位点是一个具有高度遗传多态性的基因位点。到目前为止已发现其具有68个等位基因，此外还有7个假性基因。从国内外DRll基因频率调查来看，各基因频率的分布比较均衡。因此通过检测HLA－DRB基因位点进行亲子鉴定能获得较高的父权排除率，进行个体识别时能达到较高的个体识别率。以往用RFI，P（限制性片段长度多态性）或SSO（序列特异性寡核着酸）方法进行HI，A－DRB基因的定型所需时间较多，而且不能同时对其假性基因进行分析。根据单链构象多态性（polymerasechainreaction－singlestrandconformatlonPoly－mornhism，PC…     

HLA DRB基因SSO分型方法的研究

按照第11届国际组织相容性抗原研讨会（IHW）工作会议HLAⅡ类PCR－SSO分型标准和美国国立骨髓供者计划组织（NMDP）对HLADRB基因分型要求,设计合成一对引物,可同时扩增HLA-DRB1＋B3＋B4＋BSDNA片段,长度为256bp,设计合成不同片段大小探针27种,可检出DRB座位上DRB1的39种等位基因,DRB3的3种等位基因,DRB4的1种等位基因和DRB5的3种等位基因。     

D8S1179位点扩增不平衡

短串联重复（shorttandemrepeat，STR）是目前法医学上个体识别中应用最广泛的遗传标记。STR的分型多数采用扩增片段长度多态性（amplifiedfragmentlengthpolymorphism，Amp－FLP）分型技术。由于各种原因，不同的STR等位基因的PCR扩增效率并不总是相等，使杂合子个体的两个等位基因间可能出现扩增不平衡的现象。本文报道４例D８S１１７９位点扩增不平衡的现象。１材料与方法１．１标本来源４个血样本的DNA用酚／氯法提取。１．２D８S１１７９位点的分型１．２．１聚丙烯酰胺凝胶银染法检测引物按照STRBase（http：／／www．cstl…     

基于等位基因特异性PCR原理建立的SNP分型新方法

目的建立一种新方法,对多个单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)位点进行分型。方法基于等位基因特异性PCR原理,采用荧光标记复合扩增和毛细管电泳技术,根据PCR片段长度差异进行分型。选择SNP位点共11个,每个SNP位点设计两条长度不同、3’末端分别与SNP两个等位基因碱基配对的上游引物,同时为了增加特异性,在两条等位基因上游引物的3’末端第3或第4位碱基人为引入错配。在距离上游引物100～300bp范围内的合适位置,设计下游共用引物,并进行荧光标记。所有位点经过复合扩增后,PCR产物经ABIPrismTM310型遗传分析仪电泳分离,确定每个SNP的基因型。结果每个SNP位点纯合子为单一产物峰,杂合子则为长度不同的两个产物峰。不同的SNP位点扩增产物长度不同,根据产物长度和产物峰的数量进行SNP分型,一次完成11个SNP位点分型,其结果与直接测序完全一致。结论荧光标记复合扩增片段长度差异等位基因特异性PCR法是一种简单快速而有效的SNP分型新方法。     

中国汉族人群 8个 STR位点荧光标记同步检测及其频率分布

目的 对血液等微量生物学检材进行 8个 STR多态性位点及一个性别鉴定位点的复合检测 ,并调查了 350名中国汉族无关个体上述基因位点等位基因分布情况。方法 所选位点为 vWA、 TH01、 TPOX、 CSF1PO、 D5S818、 D13S317、 D7S820、 D16S539及性别鉴定位点 Amelogenin,应用荧光染料标记引物,利用 PE－ 377 DNA片段分析仪对扩增产物进行基因分型。结果 共检出 63个等位基因及两个性别决定基因 ,总鉴别机率（ TDP）值达 99.999 999 98％,对法医学常见极微量生物学检材的检测获得成功, DNA模板需要量为 0.5～ 1.0ng,通过家系调查,证明上述位点遗传稳定,符合孟德尔遗传规律。结论 上述 8个 STR多态性位点具备了个体认定能力 ,是对微量生物学检材进行个体识别鉴定的理想方法。