中国部分地区赛马肠道寄生虫感染情况的调查

为了解我国赛马肠道寄生虫感染情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法对我国15个城市的共621份新鲜赛马粪便样本进行检查。结果显示:208份样品呈肠道寄生虫虫卵/卵囊阳性,总感染率为33.49%。检出5种肠道寄生虫:以圆线虫为主要感染种类,感染率为29.79%;马副蛔虫的感染率次之,为4.83%;球虫、隐孢子虫和裸头绦虫的感染率分别为0.81%、0.32%和0.32%。不同采样地点赛马肠道寄生虫感染率统计学差异极显著(P0.01);不同年龄段和不同性别赛马肠道寄生虫感染率无统计学差异(P0.05)。调查结果表明,应加强赛马肠道寄生虫监测工作,合理用药,避免产生耐药性。     

广东部分地区乳牛肠道寄生虫感染情况的调查

为了解广东省奶牛肠道寄生虫感染情况,采用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖漂浮法对广东省部分地区10个奶牛场共1 440份乳牛粪便样品进行显微镜检测,之后对隐孢子虫、十二指肠贾第虫和毕氏肠微孢子虫进行PCR鉴定。镜检结果显示:10个奶牛场寄生虫总感染率为47.64%(686/1 440),共检测出9类肠道寄生虫即球虫、十二指肠贾第虫、隐孢子虫、阿米巴原虫、圆线虫、鞭虫、贝氏莫尼茨绦虫、吸虫和纤毛虫,其中优势感染种类为球虫与阿米巴原虫,感染率分别为24.86%和24.65%;另外,不同年龄段乳牛寄生虫感染率及感染种类均有差异,断奶后犊牛感染率最高(62.29%),犊牛感染的寄生虫优势种类为球虫而育成牛和成年牛为阿米巴原虫。PCR检测结果显示:隐孢子虫、十二指肠贾第虫和毕氏肠微孢子虫的感染率分别为4.38%、2.20%和8.19%。此次调查结果表明,广东省部分地区奶牛肠道寄生虫感染比较普遍,同时也存在人兽共患病原隐孢子虫、十二指肠贾第虫和微孢子虫的感染,因此应加强该地区奶牛的饲养管理和肠道寄生虫的防控。     

河南省绵羊隐孢子虫病的流行病学调查

为获得河南省绵羊隐孢子虫的流行病学资料,应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对河南省4个地区的5个羊场共1701份绵羊粪样进行了检测,并对绵羊隐孢子虫感染的风险因素进行了评估.结果表明,查出隐孢子虫阳性样品80份,总阳性率为4.70%,3周龄羔羊和产后3周母羊的感染率最高,分别为41.18%和6.29%.根据隐孢子虫卵囊的形态学数值分析结果,将发现于绵羊的隐孢子虫卵囊初步鉴定为微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫.同时发现绵羊隐孢子虫感染存在年龄差异,但未见明显的季节性变化.     

甘肃省部分地区藏羊肠道寄生虫感染情况调查

为了解甘肃省部分地区藏羊肠道寄生虫的感染情况,共采集甘肃玛曲县和碌曲县2个地区177份新鲜粪便样本,采用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法对样品进行显微镜检测,然后对隐孢子虫、十二指肠贾第虫和毕氏肠微孢子虫进行PCR检测。结果显示:共检测出8种寄生虫,总感染率为94.35%(167/177)。阿米巴原虫和艾美耳球虫为优势虫种,感染率分别为35.59%(63/177)和84.75%(150/177),其他肠道寄生虫如:毛尾线虫(鞭虫)、圆线虫和贝氏莫尼茨绦虫的感染率分别为6.78%(12/177)、22.60%(40/177)和4.52%(8/177)。显微镜检测结果显示:隐孢子虫和十二指肠贾第虫的感染率分别为1.69%(3/177)和0.56%(1/177),然而PCR检测结果显示隐孢子虫、十二指肠贾第虫和毕氏肠微孢子虫的感染率分别为4.52%(8/177)、1.69%(3/177)和34.46%(61/177)。此外,混合感染现象较为严重,存在2~7种寄生虫感染情况,且玛曲县和碌曲县均以2种寄生虫混合感染最为普遍,总感染率达到38.42%(68/177),高于其他混合感染情况。本次调查研究表明,甘肃地区藏羊肠道寄生虫感染情况普遍存在,藏羊的肠道寄生虫防控和饲养管理方面有待进一步加强。     

西藏部分地区放牧家畜肠道寄生虫感染情况的调查

西藏地区养殖业目前仍以放牧为主,肠道寄生虫病仍是危害养殖业发展的一个重要因素。为了解西藏地区放牧家畜肠道寄生虫的感染情况,通过卢戈氏碘液法、饱和蔗糖漂浮法对采自林芝、山南、日喀则地区的9种放牧家畜2256份粪便样品进行检查。结果共检测出10种肠道寄生虫,总感染率为88.56%(1998/2256);优势感染种类为球虫,感染率为62.99%;而其它种类寄生虫的感染率分别为:十二指肠贾第虫为0.13%、隐孢子虫为0.75%、圆线虫为42.82%、鞭虫为5.01%、吸虫为0.71%、绦虫为2.79%、阿米巴原虫为44.81%、蛔虫为2.84%、结肠小袋纤毛虫为1.20%。2~5种寄生虫混合感染占比为52.79%,其中以2种寄生虫混合感染率占比最高,高达34.40%。上述结果表明,上述西藏三个地区放牧家畜肠道寄生虫感染普遍,同时也感染隐孢子虫、十二指肠贾第虫和结肠小袋纤毛虫等人兽共患原虫,因此有必要加强西藏地区放牧家畜肠道寄生虫病防治防控工作。     

广西奶牛隐孢子虫病的流行病学调查

为了调查广西奶牛隐孢子虫病的流行情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对广西9个奶牛场和4个奶牛个体养殖户的1 612头份粪样进行隐孢子虫卵囊的检测,并以基于18SrRNA基因的PCR-RFLP技术对分离的隐孢子虫卵囊进行种类鉴定。结果显示,7个奶牛场发现存在隐孢子虫感染,隐孢子虫阳性粪样为189头份,总感染率为11.72%(189/1 612)。在感染的年龄段上,1～6月龄犊牛的隐孢子虫感染率为21.3%,显著高于7～12月龄的青年牛(9.6%)和大于1岁龄的成年牛(3.8%)(P<0.01)。感染季节以冬季感染较高,但与夏季感染结果相比差异不显著(P>0.05)。PCR-RFLP分析显示,分离的7个隐孢子虫株均为安氏隐孢子虫。调查表明,广西奶牛隐孢子虫虫株以安氏隐孢子虫为主,感染率与河南、江苏、安徽、吉林等省份相似。     

广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省 10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查 ,并按大致 10 %的采样率采集了 10 87头乳牛的新鲜粪便 ,以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊 ,其中检出卵囊的阳性牛 92头 ,阳性率为 8.4 6 % ;有 7个场检出隐孢子虫卵囊 ,场阳性率为 70 %。这 7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是 10 .0 0 %、7.19%、6 .6 7%、9.80 %、6 .72 %、12 .76 %和 6 .72 %。调查发现 ,乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系 ,而且可能与气候有关 ;所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫 (Cryptosporidiummuris)。     

郑州地区犬隐孢子虫病流行病学调查及动物感染试验

用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对采自犬养殖场、郑州郊区宠物市场、实验动物房、宠物医院以及郑州郊县农村的309份犬粪便样品进行了隐孢子虫感染情况调查,同时用幼犬和SCID小鼠进行了人工感染试验。结果显示,隐孢子虫平均感染率为2.59%(8/309);犬养殖场、郑州郊县农村和实验动物房犬的隐孢子虫感染率分别为0.56%(1/179)、10.53%(2/19)、16.67%(5/30),而宠物市场、宠物医院的被调查犬未发现隐孢子虫感染。所查到的8份隐孢子虫阳性样品有6份来自1~3月龄的幼犬,表明幼犬更容易感染隐孢子虫。动物感染试验表明,犬源隐孢子虫不感染SCID小鼠和2月龄非免疫抑制幼犬,但能感染免疫抑制幼犬。组织切片用HE染色观察的结果显示,犬源隐孢子虫主要寄生在幼犬的十二指肠和空肠。根据卵囊形态大小和动物感染试验结果,将从犬分离的隐孢子虫初步鉴定为犬隐孢子虫。     

贵阳动物园动物隐孢子虫的调查与虫种鉴定

为了解贵阳动物园圈养野生动物隐孢子虫的感染流行情况,以骆驼、黑熊、斑马、袋鼠、猕猴、长臂猿、大象等野生动物的新鲜粪便为样品(n=84),采用饱和蔗糖溶液漂浮法收集隐孢子虫的卵囊并提取D N A,以18S r R NA为目标基因靶点设计特异性引物,并采用巢式PCR扩增目的基因,后经10 g/L琼脂糖凝胶电泳,对检测结果为阳性的PCR产物进行序列分析并建立系统发育树。结果表明,共有13份隐孢子虫阳性样品,其中骆驼7份,感染率为70.00%,感染虫种为安氏隐孢子虫;斑马1份,感染率为10.00%,感染虫种为安氏隐孢子虫;长臂猿5份,感染率为23.81%,感染虫种为微小隐孢子虫、人隐孢子虫及小鼠隐孢子虫。本次调查发现该园野生动物隐孢子虫具有较高的总体感染率(15.50%)和鉴定出4种人兽共患隐孢子虫虫种,具有较重要的公共卫生意义。本研究首次报道了我国斑马感染隐孢子虫。     

西藏部分地区马属动物肠道寄生虫的流行病学调查及毕氏肠微孢子虫的基因型鉴定

为获悉西藏地区马属动物肠道寄生虫的感染情况,采集西藏4个地区马属动物粪便样品111份,采用卢戈氏碘液法和饱和蔗糖溶液漂浮法,检测到6种寄生虫,感染率分别为:圆线虫82.88%(92/111)、球虫10.81%(12/111)、阿米巴原虫17.12%(19/111)、马副蛔虫12.61%(14/111)、鞭虫2.70%(3/111)和结肠小袋纤毛虫4.50%(5/111),检测到的寄生虫总体感染率为88.29%(98/111)。另对所有样品基于毕氏肠微孢子虫ITS位点进行巢式PCR扩增,检测到毕氏肠微孢子虫的感染率为6.31%(7/111),共鉴定出3种基因型:1个已知基因型Ebp C(5/7)以及2个新基因型,分别命名为XZM1(1/7)和XZM2(1/7)。结果表明,西藏马属动物肠道寄生虫感染情况严重,尤其是圆线虫的感染率较高,检测到毕氏肠微孢子虫的3种基因型,系统发育分析中基因型XZM1归类于具有一定人兽共患风险的第2群,基因型Ebp C和XZM2属于具有高度人兽共患风险的第1群,证实该地区马属动物是毕氏肠微孢子虫的储存宿主,且在其传播过程中扮演着重要的角色。     

微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫SYBR Green real time PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的隐孢子虫小亚基rRNA基因序列设计1对引物,并以标准基因组DNA为模板,初步建立了检测乳牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫的SYBR Green real time PCR方法,并对乳牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫阳性样品和上海40份乳牛粪便进行了检测.结果表明,此次建立的real timePCR对微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫均能扩增出曲线,且其他寄生虫(鸡贝氏隐孢子虫、刚地弓形虫、犬新孢子虫)和大肠杆菌均未检测到;标准基因组DNA的检测阈值达到5个拷贝,牛粪中卵囊的最低检测量为每克粪便5个卵囊,乳牛粪便阳性率为15%(6/40).表明,建立的荧光定量PCR快速、特异、敏感,可用于乳牛隐孢子虫病的流行病学调查.     

不同溶液对隐孢子虫卵囊的漂浮效果

隐孢子虫病是一种全球性的人畜共患病。它能感染人,也能感染哺乳类、鸟类及爬虫类动物,成为人和多种动物腹泻和呼吸道疾病的重要病原。在隐孢子虫的生活史中,有一个重要的外生性发育阶段的虫体——卵囊,因此在诊断隐孢子虫病时,可以用漂浮法来检查人和动物粪便中的卵囊。文献中已报道的隐孢子虫卵囊漂浮法有饱和盐水和饱和蔗糖溶液漂浮法。漂浮液的选择适当与否直接影响诊断效果。为此,我们选择了不同的漂浮液作对比试验,以求寻找出最佳的隐孢子虫卵囊的漂浮方法。     

上海地区鸡鸭隐孢子虫病调查及人工感染试验

１９９２～１９９４年对上海地区５个鸡场、２个鸭场分别检查粪样７００份和４５０份，隐孢子虫阳性率鸡为２７％，鸭为５８％；不同日龄和不同季节其感染率存在着明显差异。经观察和测定，隐孢子虫卵囊多呈椭圆形或圆形，囊壁光滑，无微孔和极粒；内有４个月牙形子孢子，呈纵向排列；残体呈圆形且大小不等；其卵囊大小鸡的为５．４８μｍ×４．３４μｍ，鸭的为５．４７μｍ×４．５０μｍ。人工感染试验中，鸡在感染后第３ｄ排出卵囊，第６～１３ｄ达到高峰，第４０ｄ排出停止；鸭在感染后第２ｄ排出卵囊，第８～１２ｄ达到高峰，第２０ｄ排出停止，经鉴定该虫体为贝氏隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｂａｉ－ｌｅｙｉ）。     

南京地区犊牛隐孢子虫感染情况调查

以南京地区3个奶牛场的55头6月龄以内的犊牛为调查对象,在16头犊牛的粪便中查到隐孢子虫卵囊,平均感染率为29.1%(16/55).A、B 2个奶牛场犊牛的感染率(分别是40.0%和35.7%)高于C场犊牛的感染率(19.2%),但3个奶牛场感染率的统计学差异不显著(P＞0,05).各奶牛场1～3月龄犊牛隐孢子虫的感染强度和感染率均比4～6月龄犊牛高(P<0.05).     

河南省部分地区乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

为进一步掌握乳牛隐孢子虫病在河南省的流行动态,从河南省郑州、开封、济源和鹤壁4个地区9个奶牛场采集12月龄以内的乳牛粪便样品582份,用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行检测.结果显示,隐孢子虫总感染率为26.12%(152/582).其中,断乳前犊牛(5日龄至2月龄)隐孢子虫感染率为30.91%(51/165),断乳后犊牛(3～12月龄)感染率为24.22%(101/417).依据形态数值初步鉴定为2种隐孢子虫,即微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫.微小隐孢子虫在断乳前犊牛阳性样品中的比率为50.98%(26/51),在断乳后乳牛阳性样品中的比率为9.90%(10/101).另外,饲养方式(断乳前犊牛单独隔离饲养和未隔离饲养)对断乳前犊牛2种隐孢子虫的感染率有显著影响.     

宁夏鸡隐孢子虫病调查及人工感染试验

１９９４年８月至１９９６年１０月，对宁夏回族自治区银南、银北、固原３地区１２县（市）５４个鸡场共计４５９０４只鸡进行了隐孢子虫感染情况抽样调查。结果，隐孢子虫阳性率达３６．８１％（２１２／５７６），其中蛋用鸡阳性率为３７．５３％（１４０／３７３），肉用鸡阳性率为３６．２３％（５０／１３８），差异不显著（Ｐ＞０．０５）；银南、银北、固原三地区阳性率分别为５４．５５％（６／１１），４１．９４％（１９５／４６５）和１１．００％（１１／１００），银南地区感染率显著高于固原地区（Ｐ＜０．０１）。用从自然感染鸡中收集的隐孢子虫卵囊人工感染雏鸡９批次，感染鸡排卵潜伏期３～１３ｄ，平均７ｄ；排卵持续期１４～３４ｄ，平均２４ｄ；其症状与自然病例相似。通过卵囊形态学鉴定，认为宁夏鸡感染的隐孢子虫属贝氏隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｏｐｏｒｉｄｉｕｍｂａｉｌｅｙｉ）。     

乳牛源隐孢子虫种类的PCR-RFLP和分子种系发育分析鉴定

应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对从浙江省杭州市整体搬迁至河南省郑州市1个月的某奶牛场隐孢子虫的感染情况进行了调查.共检查624份粪样,隐孢子虫总阳性率为2.24%(14/624).根据其形态结构等特征初步鉴定其为安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni,感染率为2.08%)和牛隐孢子虫(C.boris,感染率为0.16%).对这些分离株进行的小鼠感染试验结果表明,分离的C.andersoni不感染SCID小鼠、正常的及免疫抑制的昆明系小鼠.利用套式PCR成功扩增出12个隐孢子虫分离株的18SrRNA.Ssp Ⅰ和Vsp Ⅰ酶切分析显示,牛源隐孢子虫与骆驼源C.andersoni的酶切图谱相同;系统发育分析结果显示,12个乳牛源隐孢子虫分离株均为C.andersoni.     

云南猪场隐孢子虫分子流行病学调查及种类鉴定

作为一种人兽共患的肠道原虫,隐孢子虫可感染包括猪在内的多种家畜和人类,但对云南省猪的隐孢子虫感染情况尚缺乏系统研究。为获悉云南省猪场隐孢子虫的感染情况及其虫种类型,本研究采集来自于云南四个代表性猪场的129份新鲜粪样,采用巢式PCR扩增猪隐孢子虫的18S rRNA基因序列,然后通过序列比对分析和构建进化树,解析隐孢子虫的种属关系;对不同地区及动物年龄的感染率进行风险因素分析。结果,有17个样本确定为隐孢子虫感染阳性,总体感染率为13.18%(17/129),其中16例为成猪隐孢子虫,1例为猪隐孢子虫;风险因素分析显示,感染率在不同地区及不同的年龄段之间均有极显著的差异(P0.01)。本研究首次在云南省猪体内发现猪隐孢子虫虫种,研究结果为云南省猪隐孢子虫病的防控提供了基本数据。     

河南省鹌鹑隐孢子虫病的流行病学调查

为进一步掌握河南省鹌鹑隐孢子虫病的流行状况,于2006年9月至2007年8月对河南省鹌鹑养殖量较大的5个地市47个鹌鹑养殖场(户)进行了调查.共采集1 818份粪样,经饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法检查,隐孢子虫感染率为13.15%(239/1 818).根据形态学特征,将分离到的2种隐孢子虫鉴定为贝氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫.调查结果表明,河南省不同品种鹌鹑之间隐孢子虫的感染率差异不显著,但鹌鹑隐孢子虫的感染率具有一定的地区、季节及年龄差异.     

湖南省部分地区禽隐孢子虫感染情况调查

从湖南省长沙、益阳、常德3市6个鸡场的436只鸡,2个鸭场的160只鸭,2个鸽场的32只鸽,1个鹌鹑场的30只鹌鹑采粪样检查.结果,3个市的鸡和鸭均有隐孢子虫感染,感染率分别为4.59%和3.75%.其中2～18周龄鸡的感染率为7.14%,25～60周龄鸡的感染率为1.51%;AA鸡、伊莎鸡和艾维茵鸡的感染率分别为5.56%、5.21%和3.33%.罗曼鸡、长沙黄鸡为阴性.鸽和鹌鹑未查到隐孢子虫.剖检20只隐孢子虫阳性鸡,取盲肠、腔上囊、小肠前段和中段、气管粘膜涂片镜检,感染隐孢子虫的标本分别占所检标本数为85.00%、40.00%、45.00%和0.