细粒棘球绦虫排泄分泌抗原的研究──六钩蚴排泄分泌抗原的反应原性

本实验应用体外培养方法制备细粒棘球绦虫六钩幼排泄分泌（ＥＳ）抗原，应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）首次对六钧蚴ＥＳ抗原的反应原性进行了初步分析。以５μｇ／ｍｌ包被反应板分别与已知阳性、阴性血清；人工感染血清，免疫血清，疫区屠宰绵羊血清；肝片吸虫、细颈囊尾蚴以及边虫感染的绵羊血清反应，结果表明六钩蚴ＥＳ抗原具有较好的反应原性。ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００层析对抗原有一定的纯化作用。纯化六钧蚴ＥＳ抗原可望用于绵羊棘球蚴病的免疫诊断。     

以包涵体形式表达的猪带绦虫六钩蚴重组抗原的复性与纯化

应用比浊法、可溶性蛋白百分比、夹心ＥＬＩＳＡ及变性与非变性ＳＤＳＰＡＧＥ等方法来评价猪带绦虫六钩蚴重组抗原的不同复性条件。透析法复性,透析液为含２ｍｏｌ／Ｌ尿素,１６０μｍｏｌ／ＬＰＥＧ４０００,１．０ｍｍｏｌ／Ｌ０．１ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨＧＳＳＧ的ｐＨ９．０的ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液,蛋白浓度为２～５ｍｇ／ｍＬ,以静置缓慢透析为佳,上述条件任意缺一或快速透析,则免疫活性下降,二聚体、多聚体明显增加;稀释法复性,复性液为上述透析液,蛋白浓度０．１ｍｇ／ｍＬ,以分步缓慢稀释为佳。透析法复性与稀释法复性最佳条件的实验结果无显著差别。透析法复性的重组蛋白进行Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６ＦＦ分子筛凝胶层析,出现２个主峰,收集有免疫活性的第１峰进行ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析,用含５０ｇ／ＬＮａＣｌ、ｐＨ９．０的ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液洗脱,亦出现２个主峰,收集有免疫活性的第１峰。ＳＤＳＰＡＧＥ显示该峰为单一蛋白条带,蛋白纯度大于９０％。夹心ＥＬＩＳＡ检测免疫活性,每１ｍｇ蛋白的效价大于６×１０５。     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（ＤｏｔＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１∶４００,ＳＰＡ胶体金探针的工作浓度为１∶８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点。用ＤｏｔＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（ＤｏｔＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管、肺、肾病料,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％;对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,ＩＢＶ阳性检出率分别为３４．５％和３１．０％,阳性符合率为９３．３％（Ｐ＞０．０５）。     

棘球蚴囊液抗原A和B在酶联免疫吸附试验中的应用比较

用醋酸缓冲液和４０％饱和硫酸铵连续沉淀法从绵羊棘球蚴囊液（ＳＨＣＦ）中得到部分纯化抗原（ＳＰＰＣＦ），并从中分离了抗原Ａ和抗原Ｂ，分别用单克隆抗体反向间接血凝试验（Ｍ－ＲＰＨＡ）、单克隆抗体双扩散试验（Ｍ－ＤＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行了鉴别，表明自制的三株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）均识别ＳＨＣＦ、ＳＰＰＣＦ及抗原Ｂ，而不识别抗原Ａ；用ＥＬＩＳＡ对阳、阴性血清检测，ＳＰＰＣＦ、抗原Ａ和抗原Ｂ的阳性检出率分别为８３．３３％、８３．３３％和７５％，阴性符合率分别为７２．２２％、８６．１１％和７５％，表明抗原Ａ的敏感性和特异性均优于ＳＰＰＣＦ和抗原Ｂ。     

猪囊尾蚴体外培养及中药合剂对囊尾蚴的杀灭作用

猪囊尾蚴病是严重危害人体健康和养猪业发展的重要人畜共患病。医学和兽医科学工作者为防治人的猪带绦虫病和猪的囊尾病进行了大量的研究，已取得一定进展，本试验旨在探索囊尾蚴体外孵育的最佳条件，验证中药合剂ＯＬＳ的药理作用。１材料与方法１．１猪囊尾蚴采自东北农...     

猪囊虫特异抗原的提取和应用的研究

将细颈囊尾蚴和棘球蚴的粗抗原超免家兔,从抗两种粗抗原的兔血清中提取γ球蛋白与CNBr活化的Sepharose 4B偶联制成免疫吸附柱进行亲和层析,排除猪囊虫粗抗原中与细颈囊尾坳和棘球蚴的共同抗原,得到纯化的猪囊虫特异抗原SACC。用SACC进行斑点试验(DIA)诊断猪囊虫病,结果表明,SACC不仅具有较强的特异性(99.62％),而且其敏感性(98.30％)与粗抗原的敏感性(98.86％)比较也没有明显降低。经免疫电泳分析也证明SACC是猪囊虫的特异性抗原。     

猪囊尾蚴病免疫原的分子生物学研究进展

猪带绦虫有成虫、虫卵、六钩蚴、囊尾蚴不同形式的发育阶段和寄生状态 ,不同的虫体形式以独特的组织结构和生命活动规律满足其寄生在相应宿主体内的需要[1 ,2 ] 。研究发现 ,六钩蚴与囊尾蚴在虫体组成成分、生化指标以及代谢 (分泌 )产物等方面都有差异。SDS PAGE和免疫印迹研究表明 ,六钩蚴的抗原成分非常复杂 ,不仅有共同抗原、阶段发育特异性抗原 ,而且在入侵宿主定植在肌肉组织后 ,表面抗原随虫体的发育而发生阶段性的改变 ,并且抗原变异的发生往往比免疫应答更为迅速 ,从而使宿主产生的抗体失去保护性。在生化指标及代谢关键酶方面 …     

猪囊虫病的防治

猪囊虫病是由寄生于人小肠内的猪带绦虫的幼虫———猪囊尾蚴引起的一种人畜共患寄生虫病。该病在我国许多省（市、自治区）有分布，东北、华北、西北各省、市及安徽、江苏、湖南、河南等省北部为高发区，呈地方性流行；广西、云南、贵州、福建、广东等省的部分县（市）也呈区域性流行，而且感染率很高，其他省、区则多为散发。人患猪带绦虫病主要是吃了未加工熟的含有猪囊虫的猪肉或沾有猪囊虫的食物而感染；猪感染猪囊虫是由于吃了猪带绦虫的孕节或虫卵，也就是吃了患猪带绦虫病人粪便污染的饲料、牧草、饮水等，猪带绦虫的孕节或虫卵经消…     

酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１∶１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的工作浓度为１∶２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳性率为４７．１％；北京地区乙猪场的血清４３份，阳性率为４１．８％     

用间接血凝试验检测猪传染性胸膜肺炎

经戊二醛化鞣酸化处理的绵羊红细胞用胸膜肺炎嗜血杆菌（ ＨＰ） 抗原致敏,以间接血凝试验（ＩＨＡ） 检测猪传染性胸膜肺炎病猪血清抗体。致敏红细胞抗原的最佳浓度为１００ ～１５０ μｇ／ ｍ Ｌ,超免疫血清的抗体效价达１∶５１２ ～１∶１０２４ ,对人工感染１４ ｄ 的猪血清阳性检出率达８０ ％ ,与猪瘟、猪肺疫、猪喘气病、猪萎缩性鼻炎阳性血清无交叉反应     

猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的克隆与序列分析

利用RT-PCR技术,从猪带绦虫六钩蚴中成功地克隆了TSOL16基因。序列分析表明,猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的开放阅读框(ORF)为402 bp,编码134个氨基酸,与报道的T.ovisTO16基因同源性为95.9%,推导的氨基酸序列同源性为92.6%。同时利用生物信息学和分子生物学软件对TSOL16基因编码的蛋白进行结构预测。结果表明该蛋白为一结构松散的球状蛋白。     

猪带绦虫六钩蚴和未成熟期囊尾蚴生化指标的变化

本试验检测了六钩蚴和猪体内发育至30日的囊尾蚴的18项生化指标.结果显示,在六钩蚴阶段有部分生化指标未能检测到,而在猪体内发育30日的囊尾蚴则全部检测到,提示在六钩蚴阶段虫体处于休眠状态,由六钩蚴到未成熟期囊尾蚴是各个生化代谢通路的激活过程.     

猪水泡病病毒抗独特型抗体的研究─—Ab_2的制备与鉴定

用猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）中和单抗（Ａｂ_１）２Ｂ_６和４Ｈ_９免疫家兔，制备出ＳＶＤＶ兔抗独特型抗体（Ａｂ_２），经亲和层析纯化，用ＥＬＩＳＡ鉴定性质。结果表明，所制各的Ａｂ_２能竞争抑制Ａｂ_１与ＳＶＤＶ抗原结合，同时，Ａｂ_２与Ａｂ_１的结合可被病毒抗原阻断，表明所制备的Ａｂ_２具有ＳＶＤＶ抗原内影像关系。     

硫酸安普霉素可溶性粉对人工感染大肠埃希氏菌断奶仔猪的治疗试验

安普霉素（Ａｐｒａｍｙｃｉｎ）是美国礼来公司于６０年代开发的一种氨基糖苷类抗生素,对畜禽的肠道疾病和败血症有防治作用,并可用于饲料添加,有促进增重效果。本试验利用我国自行研制的安普霉素可溶性粉对人工感染大肠埃希氏菌Ｏ１４９的断乳仔猪进行了治疗试验。１　材料与方法１．１　试验材料１．１．１　药品　硫酸安普霉素可溶性粉：由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所研制,每１ｋｇ粉剂含安普霉素４００．０ｇ（４亿ＩＵ）。硫酸新霉素可溶性粉剂：为宜昌兽药厂生产的新维宝５０,从市场购入。１．１．２　试验动物和饲料…     

我国规模化肉牛场牛病毒性腹泻-粘膜病流行状况监测

从山东、河南和河北省的６个规模化肉牛场随机采肉牛血清８９份，直肠粪拭子１６５份，分别用微量细胞中和试验和双抗体夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒检测牛病毒性腹泻粘膜病（ＢＶＤＭＤ）的抗体和抗原。诊断结果：ＢＶＤＭＤ中和抗体阳性率为４６．２％～６５．０％；ＢＶＤＭＤ病毒抗原阳性检出率为５．１％～７７．２％。从而证实我国中原地区肉牛群中存在有ＢＶＤＭＤ。     

绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究

选１２只自然感染绵羊慢病毒（ＯｖＬＶ）的成年新疆美利奴羊，用琼脂凝胶免疫扩散（ＡＧＩＤ）试验连续检查血清中ＯｖＬＶ沉淀抗体，发现抗体应答的类型发生转换，即只出现对病毒核心蛋白抗原（如ｐ２５）的抗体（外线）、出现对病毒包膜糖蛋白（ｇｐ１３５）的抗体（内线），同时出现对ｐ２５和ｇｐ１３５二者的抗体（双线）互相转换。从试验羊的多个器官中分离到３株ＯｖＬＶ，分别命名为ＯｖＬＶＮＸＪ５５，ＮＸＪ７３和ＮＸＪ０４１８株，其ＴＣＩＤ５０／ｍＬ值依次为１×１０－５．６，１×１０－５．４和１×１０－４．５。剖检的６例均有淋巴细胞性乳腺炎，其中２例同时有淋巴滤泡形成，病变率为１００％。肺无淋巴细胞性间质性肺炎病变，２例肺内有淋巴滤泡形成。脑、滑膜无ＯｖＬＶ感染的特异性病变。所有试验羊未发生任何与ＯｖＬＶ感染有关的临床症状。结果表明，乳腺是对ＯｖＬＶ最敏感的靶器官，ＯｖＬＶ北疆株为弱毒株，新疆美利奴羊是对ＯｖＬＶ的低敏性品种。     

口蹄疫病毒12S抗原免疫学性质的研究

用口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）Ａ型１２Ｓ基础免疫，Ｏ型１２Ｓ加强免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，筛迭，得到了一组群特异性单抗。用ＲＰＨＩ，ＡＧＤ，ＥＬＩＳＡ及阻断式和竞争式ＥＬＩＳＡ分析这组单抗得出以下结论：１２Ｓ抗原至少存在一个１２Ｓ独有的型间交叉的群特异性抗原表位，该表位是非中和性抗原表位，免疫原性较低；这组群特异性单抗可与ＦＭＤＶＯ，Ａ，Ｃ，Ａｓｉａ－１型１２Ｓ发生不同程度的反应，表明该表位存在于ＦＭＤＶＯ，Ａ，Ｃ，Ａｓｉａ－１型１２Ｓ上，但不同血清型的１２Ｓ表位构成存在细微的差别     

绵羊肺炎霉形体单克隆抗体的研制及初步应用

用绵羊肺炎霉形体（ＭＯ）抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，融合其脾细胞和ＳＰ２／Ｏ骨髓瘤细胞，筛选出６株分泌抗ＭＯ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系。用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ做特异性分析，该ＭｃＡｂ只特异地与ＭＯ抗原发生反应，而不与猪肺炎霉形体、山羊无乳症霉形体抗原发生反应。用检测ＭＯ抗体的间接ＥＬＩＳＡ与ＩＨＡ比较检测绵羊血清中抗ＭＯ抗体，前者的阳性检出率较后者高７．１４个百分点     

重组日本血吸虫中国大陆株28ku GST免疫刺激复合物对小白鼠的免疫试验

将体外重组的日本血吸虫中国大陆株２８ｋｕ谷胱甘肽Ｓ转移酶（ｒＳｊ２８ＧＳＴ）与免疫刺激复合物（ＩＳＣＯＭ）结合制备了ｒＳｊ２８ＧＳＴＩＳＣＯＭ。用含８５μｇｒＳｊ２８ＧＳＴ的ｒＳｊ２８ＧＳＴＩＳＣＯＭ及１００μｇｒＳｊ２８ＧＳＴ分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小白鼠,用常规ＥＬＩＳＡ检测体液免疫水平,以日本血吸虫中国大陆株尾蚴攻击后的减虫率表示免疫保护力。结果ｒＳｊ２８ＧＳＴＩＳＣＯＭ免疫组的减虫率为２５．５％,其荷虫数和空白对照组荷虫数相比有显著差异,而ｒＳｊ２８ＧＳＴ免疫组的减虫率仅为１５．２％,与空白对照组相比差异不显著;ＥＬＩＳＡ检测结果,ｒＳｊ２８ＧＳＴＩＳＣＯＭ免疫组比ｒＳｊ２８ＧＳＴ免疫组不仅抗体水平高,而且持续时间长     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在酶标抗体（ＨＲＰ－Ｆ＿（２３））稀释液中加入４％（ｗ／ｖ）聚乙二醇（ＰＥＧ）６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬ１５Ａ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ＿（４９０）值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法具有实际应用价值。ＰＢＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有普遍意义。