分泌抗肝片吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用纯化的肝片吸虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选和３次克隆化培养后获得３株分泌抗肝片吸虫单克隆抗体的杂支瘤细胞（３Ａ＿６、３Ｂ＿８、３Ｄ＿５）。３株杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体经ＥＬＩＳＡ检测均属ＩｇＧ＿１亚类，上述杂交瘤细胞经反复冻存、复苏和连续传代培养，证实其分泌抗体的性质稳定。     

分泌抗细粒棘球蚴囊液抗原McAb杂交瘤细胞株的建立

用羊肝囊液纯化抗原免疫BALB/c鼠,取鼠脾细胞与SP2/o骨髓瘤细胞融合,经筛选及克隆化培养,获得3株分泌McAb的杂交瘤细胞株1D_3、3H_(11)和9E_(11)。3株McAb均属IgG_1亚类,能与人源和羊源的细粒棘球蚴囊液抗原反应,不与细颈囊尾蚴、肝片吸虫、脑包虫或弓形虫抗原反应。腹水中抗体的IHA最高效价可达2~(-13)。杂交瘤细胞经冻存、复苏和连续传代培养,分泌抗体性质稳定。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔接种和１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选出８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株、ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应。经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＧ２ａ；ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０￣３～１０￣５之间。     

抗兔轮状病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用小鼠骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）与经兔轮状病毒（ＬａＲＶ）免疫的ＢＡＬＢ／ｃ。系小鼠脾细胞进行融合，融合成功率为２２％。经间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）筛速杂交瘤细胞，阳性率为２９％左右。对其中６株强阳性的杂交瘤细胞进行了亚克隆，获得高产亚克隆杂交名细胞，用ＢＡＬＢ／ｃ小鼠生产了腹水，鉴定后选取２株强阳性高效阶的杂交瘤细胞，以ＥＬＩＳＡ阻断试验检验其分泌抗体的特异性，以直接ＥＬＩＳＡ测其敏感性，用琼脂双扩散试验鉴定类和亚类型别。结果１Ｂ＿３为ＩｇＧ，，２Ｂ＿４为ＩｇＧ＿（２ｂ）。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

三种绦虫蚴囊液抗原的SDS-PAGE分析

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对绵羊棘球蚴囊液和原头节抗原分析结果表明，前者共有多肽带１９条，其中６６和５９ｋｕ多肽带为主带；后者共有多肽带２９条，缺乏主带成分。这两种抗原在多肽组成和含量方面差异明显。绵羊细颈囊尾蚴囊液和脑多头蚴囊液抗原的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，前者共有多肽带１５条，其中主带成分为６６，５９，４０和１２．５ｋｕ多肽带；后者共有多肽带１３条，其中６６，４０和１２．５ｋｕ多肽带为主带。三种绦虫蚴囊液抗原之间的共有成分为９４，６６，５９，４３和４０ｋｕ多肽带。棘球蚴囊液的４２，３４．５，３３和２４．５ｋｕ多肽带组分也为细颈囊尾蚴所共有，而５５，５２，４１，３９，３８．５，１４ｋｕ以及１条分子质量小于１０ｋｕ的多肽带为棘球蚴囊液的特异性组分     

分泌抗鸡病毒性关节炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用鸡病毒性关节炎病毒（ＲｅｏＶ）免疫８ＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ＿２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下融合，用ＥＬＩＳＡ法检测和筛选，以有限稀译法克隆３次，获得４株分泌抗ＲｅｏＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，在传代期间能稳定地分泌ＭｃＡｂ。用杂交瘤细胞注射ＥＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水，其ＥＬＩＳＡ抗体效阶达４０００～８０００，在－７０℃条件下保存半年，其抗体效价不变。特异性分析结果表明，该ＭｃＡｂ只特异地与ＲｅｏＶ发生反应，而不与ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＢＤＶ发生反应。     

西咪替丁对鸡细胞和体液免疫功能的作用

观察了西咪替丁和左旋咪唑对鸡细胞和体液免疫功能的作用。对２８ 日龄鸡每天分别按２ ．５ 、１０ ．０ 、１００ ．０ 和４００ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重西咪替丁或２ ．５ 、１０ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重左旋咪唑饮水给药，连用３ ｄ 后再分别肌肉注射绵羊红细胞（ＳＲＢＣ） 和牛血清白蛋白（ＢＳＡ） 或布鲁氏菌（ＢＡ） 抗原。测定外周血淋巴细胞转化率和ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 淋巴细胞比值；测定血清ＳＲＢＣ、ＢＳＡ、ＢＡ 抗体效价和血清补体总活性。结果表明，西咪替丁能明显增强鸡外周血Ｔ 淋巴细胞功能，但对Ｂ 淋巴细胞无明显影响；明显升高血清ＳＲＢＣ、ＢＳＡ、ＢＡ 抗体效价；１０ ．０ ～４００ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重西咪替丁能明显升高ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 淋巴细胞比值和血清总补体活性。西咪替丁与左旋咪唑相比具有非常类似的作用。     

马立克氏病毒单克隆抗体的制备及应用

用ＭＤ＿（１１）／７５ｃ，ＳＢ＿１，ＨＶＴ＿（ＦＣ１２６）三个马立克氏病毒株分别免疫Ｂａｌ／ｃ小鼠，获得１０株分泌抗马立克氏病毒（ＭＤＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＦＭ＿３、ＦＭ＿（１７）、ＦＭ＿（２４）、ＦＭ＿（２８）、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（４５）、ＦＭ＿（６２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５４）、ＦＭ＿（１５９）．这些单克隆抗体都具有免疫萤光反应特性，其腹水抗体的ＦＡ效价为１０￣３～１０￣５，其中ＦＭ＿３、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（１５９）等单抗具有ＥＬＩＳＡ特性，腹水抗体效价为１０￣３～１０￣５。ＦＭ＿（１５０）识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿３、ＦＭ＿１７识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５７）识别血清Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４５）识别血清Ｉ和Ⅱ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（２４）识别血清Ⅱ型和Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４２）能识别三个血清型ＭＤＶ。这些单克隆抗体可用于ＭＤ早期诊断，和疫苗质量的监测。     

细粒棘球绦虫排泄分泌抗原的研究──六钩蚴排泄分泌抗原的反应原性

本实验应用体外培养方法制备细粒棘球绦虫六钩幼排泄分泌（ＥＳ）抗原，应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）首次对六钧蚴ＥＳ抗原的反应原性进行了初步分析。以５μｇ／ｍｌ包被反应板分别与已知阳性、阴性血清；人工感染血清，免疫血清，疫区屠宰绵羊血清；肝片吸虫、细颈囊尾蚴以及边虫感染的绵羊血清反应，结果表明六钩蚴ＥＳ抗原具有较好的反应原性。ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００层析对抗原有一定的纯化作用。纯化六钧蚴ＥＳ抗原可望用于绵羊棘球蚴病的免疫诊断。     

表达大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合蛋白基因工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达大肠杆茵耐热性肠毒素１（ＳＴ＿１）－β－半乳糖苷酶融合蛋白基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）经轧鼠灌胃试验证实没有毒性反应。采用超声波粉碎法裂解菌体，再辅以氢氧化铝胶制冬抗原，免疫接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠，获得抗融合蛋白抗体，乳鼠灌胃中和试验结果表明，该抗体能中和天然ＳＴ＿１肠毒素活性，具有较好的免疫保护作用。以该菌株免疫的雌性ＥＡＬＢ／ｃ鼠产下的乳鼠吮吸初乳后，能够抵抗１个鼠活性单位ＳＴ＿１肠毒素的攻击。Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）工程菌株可作为预防大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的侯选菌株。     

以包涵体形式表达的猪带绦虫六钩蚴重组抗原的复性与纯化

应用比浊法、可溶性蛋白百分比、夹心ＥＬＩＳＡ及变性与非变性ＳＤＳＰＡＧＥ等方法来评价猪带绦虫六钩蚴重组抗原的不同复性条件。透析法复性,透析液为含２ｍｏｌ／Ｌ尿素,１６０μｍｏｌ／ＬＰＥＧ４０００,１．０ｍｍｏｌ／Ｌ０．１ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨＧＳＳＧ的ｐＨ９．０的ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液,蛋白浓度为２～５ｍｇ／ｍＬ,以静置缓慢透析为佳,上述条件任意缺一或快速透析,则免疫活性下降,二聚体、多聚体明显增加;稀释法复性,复性液为上述透析液,蛋白浓度０．１ｍｇ／ｍＬ,以分步缓慢稀释为佳。透析法复性与稀释法复性最佳条件的实验结果无显著差别。透析法复性的重组蛋白进行Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６ＦＦ分子筛凝胶层析,出现２个主峰,收集有免疫活性的第１峰进行ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析,用含５０ｇ／ＬＮａＣｌ、ｐＨ９．０的ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液洗脱,亦出现２个主峰,收集有免疫活性的第１峰。ＳＤＳＰＡＧＥ显示该峰为单一蛋白条带,蛋白纯度大于９０％。夹心ＥＬＩＳＡ检测免疫活性,每１ｍｇ蛋白的效价大于６×１０５。     

鸡病毒性关节炎JN－1株疫苗的免疫研究

将鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｊ－１株经一系列培养和蚀斑克隆，筛选出一株蚀斑大小为２．７～３．１ｍｍ的克隆株（ＪＮ－１株）。该株分别以１０￣（５·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）足掌皮下注射和１０￣（４·７２５）～１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射１日龄肉鸡，以５×１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射肉用种鸡，均不产生任何临床症状和病理变化；在敏感雏鸡体内传代５次和鸡胚细胞内传代１０次，无毒力返强现象。雏鸡的最低免疫剂量为１０￣（３·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０），抗体持续时间达９个月以上。用ＪＮ－１株免疫１日龄肉用雏鸡后７、１４、２１和２８天分别用强毒于足掌皮下攻击，临床保护率分别为２／１０、９／１０、１０／１０、１０／１０，病理保护率分别０／１０、７／１０、９／１０、１０／１０。抗体应答反应和特异性淋巴细胞转化试验证明，ＪＮ－１株的免疫作用是由细胞免疫和体液免疫共同完成。体外中和病毒试验显示，ＪＮ－１株抗血清能中和Ｊ－１、Ｓ＿（１１３３）、ＦＤＯ和Ｈ＿（９３０７）株。在５个有疫情的肉用种鸡场共免疫２８０００余只仔鸡和种鸡，免疫后再无ＡＶＡ疫情发生。     

银加强胶体金技术检测牛副结核病IgG_1抗体的研究

建立了胶体金标记羊抗兔ＩｇＧ检测牛副结核病ＩｇＧ１抗体的银加强胶体金技术（ＳＥＣＧＡ）,其抗原包被浓度为２０μｇ／ｍＬ,被检血清稀释度为１∶１６０,被检血清、兔抗牛ＩｇＧ１、金标羊抗兔ＩｇＧ的作用时间分别为１０,２０和６０ｍｉｎ;封闭液的浓度、作用时间和作用温度分别为含２０ｇ／Ｌ明胶ｐＨ７．４的０．０１ｍｏｌ／ＬＴＢＳ,３０ｍｉｎ和３７℃;被检血清、兔抗牛ＩｇＧ１和金标羊抗兔作用之后用洗涤液洗涤时间和次数分别为每次５ｍｉｎ３次,每次５ｍｉｎ２次,每次５ｍｉｎ１次;显影时间为１５ｍｉｎ,定影时间为２ｍｉｎ;凡着色很深、呈均匀一致的灰黑色斑点,且与背景反差强者为强阳性;着色淡,与背景反差小者为弱阳性;不着色者为阴性。用本法检测３９６份疫区牛血清中抗副结核分枝杆菌ＰＰ抗原ＩｇＧ１抗体,其结果对粪便培养阳性牛的检出率为９２．３％;对粪便培养阴性牛的检出率为４．０％;经可靠的检验方法验证,本法的可信度至少达９６．０％（４４／４６）。     

注射亚硒酸钠对仔猪免疫功能的影响

对２０日龄仔猪用猪瘟弱毒疫苗免疫，同时分别颈部皮下注射亚硒酸钠（Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３）３ｍｇ或６ｍｇ，并设免疫不注射Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３的对照组。分别在试验前和２５，３２，３９，４６和５３日龄采血，检测全血Ｓｅ、血液学指标、淋巴细胞转化率、α－醋酸萘酯酶（ＡＮＡＥ）活性、免疫球蛋白水平和猪瘟抗体水平。结果表明，注射Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３可有效的提高仔猪哺乳期内的血Ｓｅ水平，且补Ｓｅ量越大，血Ｓｅ水平越高；Ｓｅ对仔猪红细胞、血红蛋白含量及红细胞压积没有影响；Ｓｅ对ＡＮＡＥ￣＋细胞含量影响不大；补Ｓｅ虽然没有改变２０日龄前后血清ＩｇＧ水平下降的趋势，但试验ＩｇＧ含量明显高于对照组；补Ｓｅ可显著提高猪瘟抗体水平，因此进行猪瘟疫苗免疫的同时补Ｓｅ，可有效提高猪瘟疫苗的免疫效果。     

鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活苗的研究─—疫苗制造安全性与免疫效力试验

用分离自甘肃兰州和天水的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ｌ＿２株和Ｔｓ株，以对倍的蜂胶水乳剂为佐剂，制备鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活疫苗。用该苗０．５ｍｌ接种５日龄或７日龄雏鸡，免疫后２１天ＡＧＰ抗体阳性率可达５０％～６０％，免疫后２８天，ＡＧＰ抗体阳性率可达１００％。用该苗１ｍｌ免疫产蛋鸡，免疫后２１天ＡＧＰ卵黄抗体效价可达１：６４以上。     

鸡减蛋综合征蜂胶佐剂灭活苗免疫期的试验研究

用三批减蛋综合征（ＥＤＳ）蜂胶佐剂灭活苗（９４０９１２、９４１０２４、９４１１２１）分别免疫成年产蛋母鸡，定期采血，连续检测ＨＩ抗体动态变化，这三批苗６个月的平均ＨＩ抗体滴度分别为７．７、８和７．７（Ｌｏｇ＿２）；用鸭胚做ＥＤＳＶ血清中和试验，其保护率均为１００％（５／５，５／５，５／５）；用ＥＤＳ２０６油苗和ＥＤＳ白油苗同时分别免疫蛋鸡，做平行对比ＨＩ抗体检测，其６个月的平均ＨＩ抗体效价分别为７．７和７（Ｌｏｇ＿２）。说明ＥＤＳ蜂胶苗的免疫期不短于ＥＤＳ油苗的。     

多头绦虫抗原特性的研究——绵羊免疫后及感染后的抗体消长规律

用多头绦虫原头节、囊壁、囊液层析纯化抗原及原头节排泄分泌（ＥＳ）抗原对绵羊免疫及攻击感染多头绦虫虫卵后的血清进行ＥＬＩＳＡ检测，观察了血清抗体的消长规律。结果表明，绵羊在感染虫卵后第１周即可检测出血清抗体，感染后３～５周抗体效价达到峰值，一直持续到试验结束；免疫组绵羊在免疫３次后，血清抗体效价迅速升高，第３次免疫后１～２周达到峰值，且抗体水平明显高于虫卵感染组，在攻击虫卵后抗体效价开始下降，但直到试验结束时抗体效价仍维持在较高水平。原头节可溶性抗原免疫组和原头节ＥＳ抗原免疫组血清抗体总体水平要高于囊壁和囊液抗原免疫组，原头节ＥＳ抗原和原头节层析纯化抗原的敏感性、特异性要高于囊壁和囊液层析抗原。试验表明，以上４种抗原可用于ＥＬＩＳＡ检测绵羊免疫及感染后的抗体应答反应。     

绵羊肺炎霉形体单克隆抗体的研制及初步应用

用绵羊肺炎霉形体（ＭＯ）抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，融合其脾细胞和ＳＰ２／Ｏ骨髓瘤细胞，筛选出６株分泌抗ＭＯ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系。用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ做特异性分析，该ＭｃＡｂ只特异地与ＭＯ抗原发生反应，而不与猪肺炎霉形体、山羊无乳症霉形体抗原发生反应。用检测ＭＯ抗体的间接ＥＬＩＳＡ与ＩＨＡ比较检测绵羊血清中抗ＭＯ抗体，前者的阳性检出率较后者高７．１４个百分点     

鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定

天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病，经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ ＧＩＢ） ，并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 株，ＨＡ 效价为２１２，ＥＩＤ５０ 为１０ －６．８１／０ ．２ ｍ Ｌ。病毒干扰试验中，ＩＢＶＪＢ９７０２ ＋ ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ 效价为２４～６ ，ＬａＳｏｔａ 接种鸡胚ＨＡ 效价为２１０～１１ ；用ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 病毒液１∶１０ 稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ１２０ 弱毒疫苗免疫雏鸡，发病８／１０ ，死亡３／１０ 。