Goldeneye？DNA身份鉴定系统26Y试剂盒的法医学验证

目的：对Goldeneye？DNA身份鉴定系统26Y试剂盒的法医学参数进行验证和分析。方法根据DNA分析方法科学工作组（Scientific Working Group on DNA Analysis Methods,SWGDAM）对试剂盒的法医学验证要求,从PCR扩增体系的测试、重复性、准确性、灵敏度等多个角度对该试剂盒进行检测评估。应用该试剂盒对华东地区517名汉族健康无关个体进行Y-STR基因座分型检测,检测单倍型分布状况及频率信息,并评估该试剂盒的法医学参数。结果该试剂盒对6.25μL扩增体系、DNA量低至125 pg时仍然可以得到准确的分型结果。特异性检测发现该试剂盒对常见的动物DNA和微生物DNA无有效的扩增结果。男性混合样本（1∶19和19∶1）中,较少样本的等位基因检出率可以达到70%以上;在男女混合样本中,女性DNA背景的存在不影响试剂盒的灵敏度。结论 Goldeneye？DNA身份鉴定系统26Y试剂盒灵敏度高、特异性好,且可以应用于混合物的检测。试剂盒所包含的26个Y-STR基因座多态性良好,可满足法医学实际应用。     

多套试剂盒在亲权鉴定特殊案例中的应用

目的分析山东汉族人群21个常染色体STR基因座的遗传多态性,同时对用Goldeneye~ DNA身份鉴定系统25A和20A检测存在基因突变或等位基因丢失的案例进行分析。方法用Goldeneye~ DNA身份鉴定系统25A和22NC对山东汉族人群273个无关个体的40个常染色体STR基因座进行分型,对其中21个STR基因座的遗传多态性进行分析。同时对6个存在基因突变的案例增加检测Goldeneye~ DNA身份鉴定系统22NC、20Y、17X。另外3个存在等位基因丢失的案例,用Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus PCR扩增试剂盒验证并测序分析。结果获得山东汉族人群21个常染色体STR基因座的遗传学参数。增加到40个常染色体STR基因座:5个存在基因突变的案例可达到鉴定要求,X-STR或Y-STR分型结果一致;另外1个可能基因突变的二联体案例,共有6个基因座的基因分型在被检父找不到生物学来源,两人的Y-STR基因分型相同,说明来自同一父系,但通过常染色体分型排除父子关系。2个在D18S51基因座存在等位基因丢失的案例,经基因测序分析,在相应的引物结合区被检母和孩子存在碱基的突变或丢失;另1个被检母和孩子在D13S317基因座存在等位基因丢失的案例,通过Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus PCR扩增试剂盒检测得到确认。结论山东汉族人群21个常染色体STR基因座有较高的遗传多态性,可用于日常的亲权鉴定案例。对部分存在基因突变的二联体案例,Goldeneye~ DNA身份鉴定系统25A无法满足鉴定要求,应适当增加常染色体STR基因座的检测个数。对于存在等位基因丢失的案例,改用不同公司的试剂盒或进行基因测序可以解决。     

Y-STR遗传标记在大家系中的突变

目的调查大家系中Y-STR基因座在减数分裂等位基因传递过程中的突变现象。方法收集一个林姓父系家系的163个男性个体口腔拭子样本,采用AGCU Y24荧光检测试剂盒(AGCU Y24体系)进行22个Y-STR遗传标记分型。AGCU Y24体系包含YfilerTM复合扩增试剂盒(Yfiler体系)的全部16个YSTR遗传标记。比较该家系内男性个体两两之间的Y-STR分型差异。结果该林姓家系163个男性个体在Yfiler和AGCU Y24体系分别获得20和30种单倍型,男性个体两两之间单倍型差异率分别为0.9105和0.922 7,平均遗传标记差异数目分别为6.582 1个和9.824 8个。男性个体两两之间的单倍型差异率随着减数分裂次数增多而增加。结论 Y-STR突变会使同一父系男性个体的Y-STR基因分型产生差异,随着减数分裂次数增多差异增加。     

疑似Amelogenin等位基因丢失的检测与分析12例

目的观察并分析亲权鉴定案件中Amelogenin等位基因丢失的案例,探讨Amelogenin等位基因丢失的类型、机制以及对性别鉴定的影响和应对方法。方法选择经Si Fa STRTM 23plex DNA身份鉴定系统检测,女性出现Amelogenin X的峰面积与相邻杂合子峰面积一致或低于相邻纯合子峰面积的1/2,男性出现Amelogenin X丢失的样本,进行X-STR分型及Amelogenin X测序,同时对出现Amelogenin Y丢失的男性样本,检测Y-STR分型及Y染色体性别决定区(sex-determining region of Y,SRY)进行验证。统计Amelogenin等位基因丢失的类型及丢失率,分析出现变异的机制及影响。结果 1例男性Amelogenin X等位基因丢失,经测序证实为引物结合区突变;4例女性疑似Amelogenin X等位基因丢失,经测序证实出现引物结合区突变的仅为1例。7例男性出现Amelogenin Y丢失,其中SRY阳性5例,SRY阴性2例。5例SRY阳性案件中4例可检出部分Y-STR分型,1例未检出Y-STR分型,2例SRY阴性案件均未检出Y-STR分型。Amelogenin等位基因丢失率约为0.029%。结论 Amelogenin X丢失不影响性别判定,Amelogenin Y丢失可能对性别造成误判,需要检测Y-STR或SRY来明确性别,对于未检出Y-STR分型且SRY检测为阴性的"男性",建议进行染色体核型分析及性别分化相关基因检测以进一步明确性别。     

Y染色体多拷贝短串联重复序列及其法医学应用研究进展

Y染色体为男性所特有、呈父系遗传,Y染色体上短串联重复序列(short tandem repeat on Y chromosome,Y-STR)在法医学实践中有特殊的作用,诸如父系家族的亲权鉴定,混合斑男性成分的检测,不同男性个体混合物的分析、追溯父系迁移历史及重构同一父系家族等方向都具有独特的应用价值。然而,Y染色体上存在较多的重复回文区域,位于该区域的部分Y-STR基因座具有2个或以上拷贝,称为多拷贝Y-STR基因座,如DYS385a/b、DYS389Ⅰ/Ⅱ等。除了具有Y-STR基因座所具有的一般特征外,多拷贝Y-STR基因座还具有其独特的遗传特点。本文就多拷贝Y-STR基因座的法医学应用及研究进展进行综合评述。     

辽南地区汉族人群19个Y-STR基因座的遗传多态性

正Y染色体具有男性特有、父系遗传的特征,在法医DNA分析的实际检案中有着独特作用。本研究调查辽南地区1313名汉族男性无关个体19个Y-STR基因座的遗传多态性,对其在法医学中的应用价值进行探讨。1材料与方法 1 313份辽南地区(大连、营口地区)汉族男性无关个体血样。采用GoldeneyeTMDNA 20Y身份鉴定系统[基点认知技术(北京)有限公司],扩增程序操作按     

河北秦皇岛地区汉族人群16个Y-STR基因座遗传多态性

本文对中国秦皇岛地区汉族216名健康无关男性个体进行16个Y-STR基因座复核扩增荧光检测。采用Chelex-100法提取样本DNA,用Life公司Y-filer反应试剂盒进行扩增及检测,结果在16个Y-STR基因座共检出216个单倍型,累计GD值达0.998 968,适合于单亲鉴定、混合样本的个体识别和Y-STR家系排查。     

福建畲族人群26个Y-STR基因座遗传多态性及其法医学应用

目的对Goldeneye TM DNA身份鉴定系统26Y试剂盒在畲族人群中的法医学应用进行研究。方法应用毛细管电泳分型技术,对53名福建地区畲族男性无关个体的26个Y-STR基因座进行检测,获得基因型分布状况,计算等位基因频率及单倍型多样性等群体遗传学参数,并对福建畲族与其他民族群体遗传关系进行分析。结果 53名无关个体中的26个Y-STR基因座共观察到126个等位基因,等位基因频率为0.010 1~0.886 8。26个Y-STR基因座的GD值为0.211 2~0.846 2,有19个基因座的GD值大于0.5。共观察到47种单倍型。根据R ST构建的遗传距离矩阵显示福建畲族与闽南汉族之间遗传距离最近,其次是南方汉族,与北方民族的遗传距离相对较远。结论 Goldeneye TM DNA身份鉴定系统26Y试剂盒所包含的26个Y-STR基因座在福建畲族中多态性较好,在特殊案件中可作为良好的补充体系,具有法医学应用价值。     

四类遗传标记的检测用于混合精斑的个人识别

目的探讨综合应用常染色体STR与Y-STR、X-STR、mtDNA高变区Ⅰ序列检测四类遗传标记,提高两男性混合精液样品的个人识别率。方法使用商品化试剂盒检测混合精液样品的常染色体与X、Y染色体STR,应用单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)法分离两男性混合精液样品的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)高变区Ⅰ序列,并进行序列分析。结果混合精液样品比例超过1:10(高组分所占比例继续增加而低组分所占比例继续减少)时可以确定高拷贝者的全部四类遗传标记系统的分型。比例接近时,通过与嫌疑人检测结果的比较可获得排除或基本认定的意见。结论四类遗传标记系统的联合检测有助于提高两男性混合精液样品的个人识别率。     

DNATyper~(TM) Y29试剂盒的性能确证

目的评价DNATyper~(TM)Y29试剂盒法医学应用价值。方法该试剂盒是五色荧光标记,包含29个Y-STR基因座,可以用于5色电泳测序仪,适用于Y-STR案件检验和数据库建设工作。该试剂盒包含AmpFlSTR~?Yfiler~?ki的17个Y-STR基因座以及另外的12个Y-STR基因座。本文通过不同反应体积、退火温度和循环次数对该体系进行方法验证,并且从灵敏度、准确性、种属特异性、混合样本、男性特异性、批次间试剂稳定性、不同检材的适应性与一致性等方面对其进行测试。结果该试剂盒分型结果准确、灵敏度高(最低检测模板可达62.5 pg);在1600:1的高浓度女性背景条件下,仍可以获得男性完整分型,具有良好的男性特异性;男性混合样本中,1:3-3:1的混合范围内,可以获得完整分型;此外,试剂盒还具有良好的种属特异性测试、一致性和稳定性。结论上述结果表明该试剂盒可用于法庭科学实际案件检验与Y-STR DNA数据库建设。     

中国Y-STR数据库建设相关问题探讨

Y染色体是男性所特有的父系遗传染色体,Y染色体上的STR基因座已经大量应用于实际案件。本文总结了Y-STR的特性以及选择适合中国人群的Y-STR基因座所需要考虑的问题,展望了Y-STR在家系排查、亲缘搜索、来源人群推断、混合样本检验、亲缘关系鉴定等方面的应用前景,并探讨了Y-STR试剂盒研发、验证,Y-STR突变率,搜索软件等方面的问题,提出了相应的建议。     

联合Y-STR库及ITO法破获13年命案积案1例

正Y-STR基因座位于Y染色体的非重组区,是连锁遗传,可进行未知个体识别、父系鉴定、从混合斑中检验未知男性以及验证无Amel(amelogenin)基因座的男性等,所以Y-STR在法医学领域的应用具有重大意义[1,2]。本案利用Y-STR数据库,锁定了男性家系,结合亲缘关系计算,最终确定了犯罪嫌疑人,为案件的顺利侦破发挥了关键作用。     

金华地区汉族人群27个Y-STR基因座的遗传多态性

Y染色体为男性特有,在减数分裂过程中,其非重组区不会与X染色体发生重组交换,因此,位于非重组区的Y-STR具有父系遗传和单倍型连锁遗传等特征。Y-STR在某些方面拥有常染色体不可比拟的优势,如在排查家系、混合斑鉴定等方面的检验分析中,都具有较高的应用价值[1]。本研究调查了27个Y-STR基因座在金华地区汉族群体中的遗传多态性,为法医学鉴定、父系溯源、Y-STR数据库建设及群体遗传学研究提供了基础数据。     

Y-STR家系排查及数据库建设问题

<正>人类Y染色体是男性特有,呈父系遗传,Y特异区在减数分裂时不参与重组,所以同一家族中男性个体的Y-STR分型结果理论上完全一致(突变除外),因此Y染色体DNA分析在人类遗传学中有重要的作用。如父系亲权认定、通过男性家系追溯人类迁徙模式及家系研究等,尤其是Y-STR家系排查法[1]在刑事侦查中具有独特的作用,所以建立区域性的Y染色体数据库势在必行。1案例资料     

荧光复合扩增4个Y染色体STR的单倍型及其法医学应用

目的建立一套Y染色体STR的双色荧光复合扩增系统,调查4个Y-STR基因座单倍型分布情况及其在混合斑物证检验中的法医学应用前景。方法荧光标记引物复合扩增Y-GATA-A10、DYS531、DYS557和DYS448四个Y染色体特异性STR基因座,并用ABⅠ310遗传分析仪对扩增产物进行检测、分型。结果在成都汉族120名无关男性个体中,四个基因座分别检出5、5、8、7个等位基因,共检出78种单倍型,单倍型基因多样性为0.9881。对3例本教研室不能用常规常染色体STR对男性成份作出同一认定的混合斑检材,该系统成功的作出了与嫌疑人血液Y-STR基因型一致的鉴定结论。结论建立的Y-STR荧光标记复合扩增系统具有很高的识别能力,对建立Y染色体STR数据库,研究群体遗传学和进行法医学混合斑物证鉴定有重要意义。     

新疆维吾尔族群体16个Y-STR基因座遗传多态性

正常男性具有Y染色体并遵循父系伴性遗传规律,Y-STR遗传标记在法医学个体识别鉴定中有独特的应用价值。本文对新疆维吾尔族群体288名无关男性个体16个Y-STR基因座遗传多态性进行调查,为该群体的法医学实践提供基础数据。     

国产Goldeneye~(TM) 20A试剂盒性能指标验证

目的测试国产GoldeneyeTM20A试剂盒技术性能指标,评估其法医学应用能力。方法从方法学验证、准确性、峰值均衡性、灵敏度、批次间试剂及稳定性测试、耐受性、不同检材的适应性与一致性、种属特异性、混合样本等9个方面对GoldeneyeTM20A试剂盒进行测试。结果阳性DNA样本分型正确,内标和等位基因分型标准物符合要求;等位基因间的均衡性≥83%,同一荧光标记基因座间的均衡性≥55%,不同标记物间的均衡性≥52%;0.125ng DNA阳性样本可检出全部STR基因座分型,不同批次间和反复冻融后试剂盒测试可以获得正确分型,对降解检材和混有抑制剂的样本等具有一定的耐受性,能对案件中多种检材进行分型且分型结果一致,具有一定的种属特异性和混合DNA样本检测能力。结论国产GoldeneyeTM 20A试剂盒可用于法庭科学实际检案与建库。     

广东河源汉族人群17个Y-STR基因座遗传多态性

<正>父系遗传的Y染色体STR基因座多态性分析技术已广泛应用于犯罪现场生物检材的鉴定、父权鉴定、群体遗传学和人类学等领域。本文对广东省河源市龙川县277个男性个体17个Y-STR基因座的遗传多态性进行调查,为法医学研究及本地区检案提供基础数据。1材料与方法1.1样本来源根据知情同意原则,在河源龙川4个镇街中随机抽取汉族健康男性口腔拭子样本,共计277份。     

24个Y-STR基因座等位基因频率的群体差异分析

目的调查华东地区汉族无关个体24个Y-STR基因座的群体遗传学多态性,比较华东汉族和广东汉族人群间的群体差异性。方法应用GFS 24Y STR荧光检测试剂盒,对华东地区268名汉族无关个体24个Y-STR基因座进行群体遗传学分析。比较华东汉族和广东汉族人群的等位基因频率,进行群体差异分析。结果华东地区268名汉族无关个体24个Y-STR基因座共检出235个等位基因,267种单倍型,GD值范围为0.564 9~0.966 8。华东汉族和广东汉族人群在DYS622、DYS552、DYS443等12个基因座的等位基因间的差异有统计学意义。结论 GFS 24Y STR荧光检测试剂盒中的Y-STR基因座具有良好的遗传多态性,可应用于父系亲缘关系鉴定。     

淮海战役士兵遗骸的Y染色体遗传类型鉴定

目的鉴定淮海战役士兵遗骸的Y染色体遗传类型,为寻找其父系亲属提供线索。方法采用古DNA的方法提取遗骸DNA,使用Yfiler试剂盒进行17个Y-STR基因座的复合扩增,推测样本的单倍群,并根据最新Y染色体谱系树挑选Y-SNP位点进行精细分型,再基于Y-SNP和Y-STR数据进行共享单倍型分析,获得与遗骸遗传关系最近的现代个体信息。结果 8份男性样本中的17个Y-STR基因座总共观察到8种Y-STR单倍型,进一步Y-SNP分析得出6种Y-SNP单倍群,分别是O2a1-M95+、O1a1-P203+、O3*-M122+/M234-、D1-M15+、C3*-ST和R1a1-M17+。结论本次对淮海战役士兵遗骸进行的Y染色体遗传类型鉴定对于推断陈年检材的地理来源具有一定的借鉴价值。