从蚊子血中检测人DNA

目的 从叮咬人后的蚊子体内血中得到被叮咬者的DNA分型。方法 Chelex100法提取叮咬人后的蚊子血DNA，PowerPlex16试剂盒和Identifiler试剂盒扩增DNA。结果 蚊子血中可成功检测出被叮咬人的DNA基因型。结论 可从蚊子血中检测到被叮咬人的DNA数据，结果稳定性好。两种试剂盒的联合应用，可大大提高检测的准确率和可靠性，对实际检案具有很大帮助。     

Goldeneye？DNA身份鉴定系统26Y试剂盒的法医学验证

目的：对Goldeneye？DNA身份鉴定系统26Y试剂盒的法医学参数进行验证和分析。方法根据DNA分析方法科学工作组（Scientific Working Group on DNA Analysis Methods,SWGDAM）对试剂盒的法医学验证要求,从PCR扩增体系的测试、重复性、准确性、灵敏度等多个角度对该试剂盒进行检测评估。应用该试剂盒对华东地区517名汉族健康无关个体进行Y-STR基因座分型检测,检测单倍型分布状况及频率信息,并评估该试剂盒的法医学参数。结果该试剂盒对6.25μL扩增体系、DNA量低至125 pg时仍然可以得到准确的分型结果。特异性检测发现该试剂盒对常见的动物DNA和微生物DNA无有效的扩增结果。男性混合样本（1∶19和19∶1）中,较少样本的等位基因检出率可以达到70%以上;在男女混合样本中,女性DNA背景的存在不影响试剂盒的灵敏度。结论 Goldeneye？DNA身份鉴定系统26Y试剂盒灵敏度高、特异性好,且可以应用于混合物的检测。试剂盒所包含的26个Y-STR基因座多态性良好,可满足法医学实际应用。     

D12S391基因座检出四等位基因1例

正1案例1.1简要案情1例父子关系鉴定中采集被鉴定人的末梢血进行检测,发现被检父D12S391基因座STR分型为20,21,22,23,后单独采集被检父带毛囊的毛发样本进行验证。1.2DNA检验采用Chelex-100法提取样本基因组DNA。采用Goldeneye誖20A试剂盒[基点认知技术(北京)有限公司]对被鉴定人血样进行扩增,后用EX22试剂盒(无     

D20S161和D8S384两个基因座在法医学中的应用

评估D2 0S16 1和D8S384两个基因座在法医学中的应用价值。用自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒 ,对人血、人精液、人唾液、动物血、人血与动物血的混合检材和人血痕、人精液斑、人唾液斑、动物血痕、人血与动物血的混合斑痕检材 ,以及陈旧血痕检材进行检测分型 ,并用这两个基因座PCR引物序列与DNA数据库进行联网对比分析。自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血、人精液、人唾液、人血与动物血的混合检材分型 ,而动物血没有PCR产物 ;自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血痕、人精斑、人唾液斑和人血与动物血的混合斑痕检材正确分型 ,而动物血痕没有PCR产物 ;斑痕检材分型结果与对应体液检材分型结果无差异 ;5 0份陈旧血痕检材全部获得阳性分型结果。DNA数据库联网比较提示 ,D2 0S16 1和D8S384基因座引物除了能与各自的模板序列发生特异性扩增外 ,理论上不能与DNA数据库中 6 0 6 36 4种已知序列产生PCR产物。D2 0S16 1和D8S384两个基因座具有高度的种属特异性 ,抗污染能力强 ,不易受降解的影响 ,是解决法医现场生物检材个人识别和亲子鉴定的理想手段     

DNA Typer~(TM)15 plus直扩试剂盒在DNA数据库建设中的应用

目的测试DNA TyperTM15 plus直扩试剂盒的技术性能指标,评价其在DNA数据库建设中的应用价值。方法采用DNA TyperTM15 plus试剂盒,并使用IdentifilerTM和DNA TyperTM15试剂盒进行比较,设定不同体系和引物量、不同退火温度和循环次数以进行方法验证;设定不同模板量标准品、不同比例混合样本,取猪、狗、兔等动物的血液样品,血痕、骨骼、唾液斑等常见检材样本以及不同建库样本,以验证试剂盒灵敏度、特异性、稳定性以及混合样本、常见检材及建库样本的检测能力。结果直扩试剂盒分型结果准确,重复性好,灵敏度可达0.125ng,不同批次间试剂检测结果稳定,对不同检材有很好的适应性。10μL扩增体系时FTA卡和加强型血液采集卡取样直径应为0.5mm,而血滤纸、血液采集卡样本和经典型血液采集卡取样直径应为1.0mm。结论 DNA TyperTM15 plus直扩试剂盒的性能可以满足DNA数据库建设及检案的需要,可在相关实验中选择使用。     

FOB试剂条排除血迹污染在DNA检验中的应用

正法医DNA日常检验中需要对物证表面无血迹区域进行脱落细胞DNA检验。但该类物证血迹区域周边常常附着微量血点会掩盖脱落细胞DNA,影响检测结果。金标抗人血红蛋白(FOB)试剂条是通过把胶体金的显色作用和免疫层析原理相结合而研制的血液检测工具,灵敏度较高~([1]),法医领域常用于血液种属检验。本文通过验证Identifiler Plus试剂盒能否检出FOB试剂条检测结果为阴性的血样     

AmpF(l)STR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒快速直接PCR扩增初探

目的 探索可应用于法医实践的快速直接PCR扩增方法,以缩短扩增时间,提高STR分型速率.方法 联合运用AmpF(l)STR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒与TaKaRa快速PCR检测试剂构建快速直接PCR体系,以FTA血卡为模板,采用优化后的扩增程序在快速PCR仪上进行扩增,分型结果与常规直接扩增方法相比较.结果 AmpF(l)fSTR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒与TaKaRa的快速PCR检测试剂针对血卡的联合扩增,所得STR分型结果与常规方法一致,扩增用时由常规直接扩增所需的175 min缩短为55 min.结论 采用快速直接PCR方法进行扩增,可得到与常规直接扩增一致的DNA分型,扩增时间明显缩短,DNA分型速率大幅提高.     

X-STR在精斑混合检材检验中的法医学应用

目的应用X和Y染色体STR分析含有相同父系祖先个体DNA的混合检材。方法用差异裂解法提取混合检材基因组DNA,用PowerPlex 21试剂盒、GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统27Y试剂盒、SureID?PathFinder扩增荧光检测试剂盒和GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统17X试剂盒检测混合检材。结果根据X-STR和Y-STR单倍型成功鉴别具有相同父系祖先的嫌疑人,确定混合检材中存在4个男性个体DNA。结论 X-STR可以应用于检验精斑混合检材,结合Y-STR数据可区分相同父系男性个体,并辅助判断混合检材中男性个体的数量。     

差异提取试剂盒在混合斑DNA提取中的应用

目的评估差异提取试剂盒对混合斑样本中的精子和上皮细胞DNA分离提取的有效性。方法采用差异提取试剂盒,选择性裂解精细胞和上皮细胞,结合磁珠法分别对人为控制条件下制备的模拟混合样本和案件中的混合斑检材进行精细胞DNA和上皮细胞DNA的分离提取。对所提取的DNA进行定量分析和STR分型。结果该试剂盒能从精子和上皮细胞不同比例的混合斑中提取出高纯度的精细胞和上皮细胞DNA。结论该差异提取试剂盒适用于性侵害案件中混合斑检材的DNA提取。     

抗污染扩增试剂在法医物证检验中的应用

客观、准确的法医遗传检验结果是作出准确鉴定意见的基础。随着检验设备、扩增检测试剂检验灵敏度日益增加,防控实验室污染、样品污染的压力与日俱增,其中PCR扩增产物对检测结果的污染最难防控。本文测试一款抗污染扩增试剂盒NH-18A,该试剂盒包含16个常染色体STR基因座,1个性别识别基因座（Amel）和一个Y染色体插入缺失基因座（Indel）,NH-18A通过STR复合扩增可得到含有尿嘧啶碱基的DNA片段,该类型的DNA片段在50℃时可被尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG）高效水解,每次新一轮PCR扩增前增加一步50℃保温孵育可以彻底消除既往扩增产物对结果的污染威胁。经实验验证,NH-18A具有优异的抗扩增产物污染能力,且替换碱基扩增不改变DNA分型结果,检测灵敏度和DNA产物片段稳定性不降低,后续电泳分析不受影响。利用此试剂盒可以有效消除扩增产物对鉴定结果的污染。