基于rbcL序列的大麻鉴定

目的评估叶绿体DNA rbc L序列作为遗传标记鉴定大麻的可行性。方法检测62份大麻、10份啤酒花及10份葎草DNA的rbc L序列,并从Gen Bank数据库中下载96条大麻科rbc L序列。应用MEGA X软件进行序列比对,计算种内及种间Kimura-2-Parameter(K2P)遗传距离并构建系统聚类树。结果本次大麻及葎草属样本测序所得rbc L序列长度分别为617 bp和649 bp,且在所测大麻样本中检测到2种单倍型。BLAST相似性检索结果显示,测序所得序列与Gen Bank数据库中大麻rbc L序列相似性最高为100%。遗传距离分析结果显示,大麻种内不同样本间的最大遗传距离(0.004 9)小于大麻与大麻科其他物种间的最小遗传距离(0.012 9)。从中介网络图和系统聚类分析中可以看出,大麻与大麻科其他物种位于不同分支。结论 rbc L序列可以作为鉴定大麻的DNA条形码,联合rbc L序列的比对分析和系统聚类分析有望成为法医学大麻种属鉴定可靠、便捷的检测手段。     

面颅的种族差异性研究

目的探索面颅在中国黄种人与欧洲白种人种族鉴定方面的差异性。方法通过对150例中国黄种人和欧洲白种人样本(各75例)面颅骨的观测、分析,选取与种族变化关系密切的51项观测指标进行观测,使用SPSS16.0软件对观测数据逐级进行统计学分析、处理,建立判别方程。从研究样本外随机抽取白种人和黄种人各10例标本进行盲测。结果筛选出7项测量结果相对稳定、种族差异较大指标建立全指标、逐步和多指标判别函数方程共5对,综合判别率在73.2%~89.8%。盲测正确率在75%~95%,结果令人满意,说明判别方程稳定、可靠,对种族鉴别的应用性较好。结论本研究所建立的种族判别方程可应用于中国黄种人与欧洲白种人的种族鉴定。     

中国黄种人与白种人脑颅骨特征差异初探

目的建立利用脑颅骨特征推断黄种人和白种人种族的判别方程,并评价其法医学意义。方法收集141例成年人脑颅骨样本,其中黄种人60例,白种人81例。选取脑颅骨10项特征指标,对125例样本进行测量,运用SPSS16.0软件对指标数据进行t检验和Fisher判别分析,建立判别方程。并使用16例样本对方程的判别正确率进行盲测。结果本文选择的10项脑颅骨特征指标变量均具有显著性种族差异(P0.05);建立了5组单项指标和4组多项指标进行种族推断的判别方程,综合判别率为74.4%~94.4%;随机选取16例样本的盲测结果,正确率为81.3%~100%。结论脑颅骨具有种族差异性,本文建立的判别方程可在黄种人和白种人的种族推断中选用。     

AFLP技术鉴别罂粟、虞美人和大麻种属差异的初步研究

目的探讨采用AFLP技术检测植物DNA,鉴别罂粟、虞美人和大麻植物种属间差异的方法。方法收集罂粟根、茎、叶、花、果以及虞美人和大麻叶检材,用AxyPrep DNA试剂盒提DNA,经EcoRI/MseI酶切,人工接头及PCR预扩增,用E-ACA/M-CAG、E-ACT/M-CTC、E-ACC/M-CTA、E-ACC/M-CTG、E-AGC/M-CTT、E-AGG/M-CTA6对标记了荧光的选择性引物进行PCR扩增,其产物在的CEQ8000遗传分析仪上检测。结果6对引物分别在罂粟、大麻和虞美人样本中检出27~46、5~20、4~31条扩增片段,种属间存在明显差异;同一罂粟根、茎、叶、花和果的DNA检测结果相同。结论罂粟、虞美人和大麻3种植物的AFLP分析结果显示出的差异性,同一植株不同部位DNA AFLP结果的同一性,有可能用于检测未知植物检材的种属来源。     

中国黄种人与白种人脑颅骨特征差异初探

目的建立利用脑颅骨特征推断黄种人和白种人种族的判别方程,并评价其法医学意义。方法收集141例成年人脑颅骨样本,其中黄种人60例,白种人81例。选取脑颅骨lO项特征指标,对125例样本进行测量,运用SPSS16．0软件对指标数据进行t检验和Fisher判别分析,建立判别方程。并使用16例样本对方程的判别正确率进行盲测。结果本文选择的10项脑颅骨特征指标变量均具有显著性种族差异（P〈0．05）;建立了5组单项指标和4组多项指标进行种族推断的判别方程,综合判别率为74．4％～94．4％;随机选取16例样本的盲测结果,正确率为81．3％-100％。结论脑颅骨具有种族差异性,本文建立的判别方程可在黄种人和白种人的种族推断中选用。     

抗人SMCY抗原胶体金试纸条的研制

目的建立一种快速检测SMCY抗原的方法。方法采用胶体金免疫层析技术双抗体夹心检测法,在金标垫上包被胶体金标记的SMCY兔多抗,制成胶体金试纸条,用于检测12份猪、牛、狗、鸡和小鼠等动物血清以及50份人血清。结果制作的胶体金试纸条检测人和常见动物血清具有明显的种属特异性,能够区分男女血清。结论该方法可尝试用于鉴别男女血清,并具有一定种属特异性,其为法医学快速鉴别人类样本性别提供了研究方向。     

大麻的DNA分析检验技术

本文简要回顾了大麻的一些常规检验方法,并重点综述了大麻植物的DNA分析检验技术,包括随机扩增多态性DNA(RAPD)、测序扩增区段(SCAR)、短串联重复序列(STR)、扩增片段长度多态性(AFLP)、单核苷酸多态性(SNP)等DNA分子标记检测法。并且对这几种技术的应用范围及前景做了简要分析,以期为实践工作提供基础理论帮助。     

应用Dot-ELISA测定组织碎块的血型

本文用 Dot-ELISA 测定组织碎块的血型取得了良好成果。52份已知血型的组织标本经138次检测,每次都能得出正确的结果。10份检材的盲测结果也完全正确。本法对检材的最低需要量为0.004 mg。     

云南大麻DNA的提取及检测初步研究

目的探讨云南大麻DNA的提取及检测方法。方法运用改进的SDS微量法提取大麻总DNA,对所得DNA进行PCR检测。结果用所筛选到的大麻引物检测了云南大麻的DNA遗传标记特征,图谱清晰,结果稳定。结论本方法能有效提取并检测大麻DNA,为实现大麻的品种鉴定、遗传多态性研究及来源追踪提供有价值的科学依据。     

鉴别外周血与月经血的六重mRNA荧光复合检测体系构建

目的基于外周血、月经血中特异的mRNA分子标记,建立一种能有效鉴别外周血与月经血的六重mRNA荧光复合检测体系。方法通过文献及数据调研,筛选出在外周血和月经血中特异性表达的mRNA标记分子,设计并验证引物。经过总RNA提取、逆转录、多重PCR(MPCR)扩增、遗传分析仪电泳检测分析等步骤,构建一个基于毛细管电泳技术的六重mRNA荧光复合检测体系,并使用38份样本对体系进行检测验证。结果在外周血样本中检测到外周血标记(HBB、HBA)和管家基因(GAPDH、ACTB)的表达;在月经血样本中检测到所有标记(HBB、HBA、MMP7、MMP10、GAPDH、ACTB)的表达;在非血样本中只检测到管家基因(GAPDH、ACTB)的表达。结论本研究构建的六重mRNA荧光复合检测系统可以有效鉴别外周血与月经血样本。     

法医SNP复合检测体系的构建及应用

目的构建48-SNP位点复合检测体系,用于个体识别、性别鉴定、ABO基因分型。方法采集225份无关个体样本(血斑及口腔拭子),18份案例样本(不同组织及体液斑),选择43个常染色体位点、4个ABO基因位点和1个性别鉴定位点,根据单碱基延伸技术通过GenomeLabTMSNPstream基因分型系统进行SNP分型;并检测体系灵敏度、同一个体不同组织同一性及模拟腐败检材。结果 48-SNP体系分型结果与测序结果的一致性为100%,最小DNA检出量为0.25ng,不同组织来源样本检测同一性很好;利用该体系检测225名无关汉族个体,所有位点均符合Hardy-Weinberg平衡,整个系统的随机匹配概率为9.4×10-18,累积非父排除率(CEP)为0.999 788,累积个体识别率大于0.999 999 999 999 999 99。结论本文48-SNP体系能同时进行个体识别、ABO基因分型和性别鉴定,可以作为现有STR检验体系的补充。     

RAPD和ISSR分子标记检测大麻的遗传多样性初探

目的利用随机扩增多态性DNA和简单序列重复区间扩增分子标记检测大麻遗传多样性,并探讨其在法医学中的应用价值。方法收集中国4省6个地区的100株大麻叶子样品,采用CTAB法提取基因组DNA,设计选择11个RAPD引物和13个ISSR引物,采用6%中性聚丙烯酰胺凝胶电泳-硝酸银染色法进行检测,根据出现的条带数目和片段大小等分析大麻的多样性。结果 11条RAPD引物扩增出的片段在200bp以上共52条,其中具有多态性的27条;ISSR引物扩增出126条,其中具有多态性的73条;多态性条带比率分别为51.9%和57.9%,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论 RAPD和ISSR两种方法均可用于大麻遗传多样性分析,对检测毒品原植物的种类和来源地具有一定的应用前景。     

法医DNA分型的可重复性

为了了解国内法医DNA分型的可靠性，选择酪氨酸羟化酶基因第1内含子什＂mantyrosinehydroxylasegene,intron1）的短串联重复序列（STR）TH01基因座为遗传标记，在国内5个法医实验室进行了DNA分型的可重复性研究，报道如下。材料与方法一、样本制备和分送国内5个法医实验室参加本次研究工作，由华西医科大学法医学系作为协调单位，负责制备与分送盲测样本。每个法医实验室4份样本，2份为纯化DNA，2份为血痕。血液样品采自成都地区无血缘关系汉族个体，常规方法提取DNA；血痕样本由另外两名个体新鲜血液0．5ml滴于滤纸上制成，室温晾干…     

改良高盐低pH方法提取陈旧大麻DNA初探

目的探讨建立室温保存10年队上大麻干叶及大麻树脂DNA提取方法。方法采用SDS及改良高盐低pH方法，改变提取缓冲液中β-巯基乙醇终浓度，增加用酚、氯仿快速抽提过程，提取新鲜和陈旧大麻（树脂）DNA，应用大麻叶绿体trnLintron引物进行PCR，琼脂糖凝胶电泳法检测扩增产物。结果用高盐低pH方法获得了10年以上大麻干叶及树脂清晰的电泳图谱，其中成功提取了1份23年陈旧大麻的DNA。结论高盐低pH方法操作简便、实用，可望用于陈旧、微量大麻植株的DNA检测，对于涉毒案件中特殊大麻标本的检验具有一定意义。     

胶体金标记检测大麻单克隆抗体免疫试剂盒研制

目的 建立准确、快速、简便的检测尿液中大麻的胶体金免疫层析技术(ICT)。方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗主要代谢物四氢大麻酚-9-羧酸,THC与GC/MS检测方法相比,用ICT法的216份尿样,其检测限为50 ng/ml,灵敏度为96.67％,准确性为98.61％。结论 ICT法检测尿液中THC,其特异性强,对确定大麻的存在具有广泛的应用价值。     

焦磷酸测序分析短片段牙釉质蛋白基因进行性别鉴定

目的采用焦磷酸测序技术分析短片段牙釉质蛋白基因进行性别鉴定并用于骨骼及腐败生物检材的检测。方法应用blast软件,确定牙釉质蛋白基因(Amel)上1段含有3个SNP位点及1个插入/缺失(indel)位点的序列作为待测靶序列,设计引物,扩增该段序列,应用焦磷酸测序技术分析扩增序列,进行性别鉴定。对方法进行准确性、灵敏度、种属特异性的测试,并用于对骨骼和高度降解DNA的检测。结果 PCR产物分别为44bp(Amel X)和45bp(Amel Y),女性测序结果为:G/G,T/T,…/…,C/C,男性测序结果为:G/T,T/A,…/C,C/A,分型图谱清晰。应用本文方法检测100份已知性别的DNA样本,结果均正确无误,方法最低DNA模板量为0.5ng,具有较好的人类种属特异性。用于高度降解DNA分析,较IdentifilerTM试剂盒具有更高的成功率且骨骼样本也得到清晰的分型结果。结论本文采用焦磷酸测序技术分析Amel的方法在法医学性别鉴定中有较好的应用价值。     

应用低离子强度溶液提高血痕MN血型测定的灵敏度

应用低离子强度溶液能提高凝集试验的灵敏度。本实验采用低离子强度溶液及蛋清薄膜固定解离法对保存1～6年的258份血痕进行MN血型盲测。结果总正确率94.57％。证明应用低离子强度溶液解离法的灵敏度明显优于盐水解离法。     

用等电聚焦酶免疫分析法检测人类精斑GC表现型

本文用IEF结合使用过氧化物酶标记第二抗体的酶免疫分析法检测了17名键康成年男性的精液(斑)和唾液斑及10名健康成年女性的阴道分泌液中的GC表现型。结果发现17份人类精斑均可测出三种GC蛋白普通表现型。在10份阴道液中测出一份样本的GC表现型,3份样本有不甚清楚的GC带,不能定型,其他样本均无GC带。17份唾液斑未测出GC。本法的灵敏度(0.675ng)比文献报道的用过氧化物酶标记第二抗体的酶免疫分析(5.6ng)高。     

大麻遗传标记的法医学应用研究进展

大麻是大麻科大麻属一年生雌雄异株的草本植物,其内含有具有强烈成瘾性和麻醉性的四氢大麻酚(THC).大麻价格低廉、获取方便、且受到一些国家和地区合法化的影响,目前已成为滥用最广泛的毒品之一.因此,大麻植株的鉴定对于打击毒品犯罪、维护社会稳定具有重要意义.近年来,基于DNA遗传标记的大麻鉴定为案件侦破提供了新的技术手段,针...     

根据骨盆CT片特征指标进行同一认定的研究

目的选择骨盆CT片上的特征指标,建立逐步回归方程,探讨其在法医学同一认定中的应用价值。方法收集160名不同被检查者骨盆CT影像片各1张,70名被检查者不同次骨盆CT影像片各2张。选择并测量骨盆CT片上的14项指标值,分别计算不同人随机分组相同测量指标的组间的差值,以及相同人不同次测量指标间的差值,运用二分类logistic逐步回归分析,建立各项指标的一元回归方程和多项指标的多元回归方程,并对方程进行盲测检验。结果建立的14个一元方程中同一认定的正确率在61.1%(骶骨耳状面后缘宽)~80.5%(第一骶椎平面左右髂骨前端间距)之间;建立的6个多元回归方程的正确率在80.5%~93.8%之间。盲测准确率为100%。结论本文在CT片上选择的14项特征指标可以用于同一认定,在使用时应尽可能选用多元指标以得到更准确的结果。