中介素预处理对大鼠心肌细胞缺氧的保护作用

目的 通过对中介素（intermedin,IMD）预处理的大鼠心肌细胞缺氧后作用机制的研究,为法医病理学研究心脏性猝死机制提供思路. 方法 大鼠H9c2心肌培养细胞随机分为对照组、缺氧组和IMD预处理组.采用MTT比色法、透射电镜、激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测各组心肌细胞存活率、细胞超微结构、细胞内游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）及细胞凋亡率.结果 与对照组比较,缺氧组细胞存活率明显降低（P＜0.05）,内部超微结构存在损伤,而IMD预处理显著提高细胞存活率（P＜0.05）、减轻缺氧对心肌细胞结构的损伤.缺氧组细胞[Ca2＋]i（荧光强度）和细胞凋亡率较对照组升高（P＜0.05）,IMD预处理降低了缺氧对细胞[Ca2＋]i（荧光强度）和凋亡率的影响（P＜0.05）. 结论 IMD能提高缺氧心肌细胞存活率、减轻缺氧引起的细胞内钙超载从而抑制细胞凋亡,可以揭示心肌细胞缺氧保护作用的机制,为心脏性猝死鉴定提供依据.     

Intermedin在大鼠急性心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨Intermedin（IMD）对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的作用。方法72只健康雄性sD大鼠随机分为3组：对照组;缺血再灌注组（缺血1h再灌30min）;IMD预处理组（缺血再灌注前30min静脉注射10^-7mol／LIMD）。检测血清中LDH、心肌中MDA和SOD活性;半定量实时荧光PCR法检测心肌降钙素受体样受体（ealcitonin receptor like receptor,CRLR）、受体活性修饰蛋白（receptor activity modiying protein,RAMP）1／2／3的mRNA表达水平;酶联免疫吸附法（ELISA）测定心肌cAMP含量,SABC法检测Bcl-2／Bax蛋白表达及比值。结果与对照组比较,缺血再灌注组大鼠LDH、MDA分别升高87％和189％,SOD活性下降84％,IMD预处理组LDH、MDA均降低41％,SOD活性升高38％（均P〈0．01）;实验组心肌CRLR、RAMPl／2／3的mRNA水平均明显上调（P〈0．05或P〈0．01）,与对照组心肌cAMP相比,缺血再灌注组和IMD预处理组分别升高1．36、2．90倍（P〈0．05）。Bcl-2／Bax表达比值,缺血再灌注组较对照组降低,IMD预处理组亦低于对照组但高于缺血再灌注组2．225倍。结论IMD对大鼠急性缺血再灌注损伤的心肌有一定保护作用,减少缺血再灌所致的氧化应激,抑制心肌细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

大鼠双侧阴茎背神经和／或海绵体神经离断后海绵体组织细胞凋亡

目的观察双侧阴茎背神经、海绵体神经损伤．以及联合神经损伤后阴茎海绵体组织细胞凋亡表达。方法（1）将78只SD大鼠随机分为术后1、2、4、8、16和32d组,每组分别分为海绵体神经离断组、阴茎背神经离断组、阴茎背神经和海绵体神经联合离断组、手术对照组和非手术对照组。通过DNA梯带法（DNAladder）进行定性、TUNEL法进行凋亡细胞检测;用actin-α标记平滑肌细胞。用CD31标记内皮细胞,进行凋亡细胞定位。结果双侧海绵体神经损伤及联合损伤组分别与阴茎背神经损伤组、手术对照组和非手术对照组之间的凋亡率均有显著差异（P〈0．0046）,但两组之间的差异无显著性（P〉0．0046）,双侧阴茎背神经损伤组与手术对照组之间细胞凋亡率差异无显著性（P〉0．0046）。海绵体平滑肌细胞凋亡平均数与内皮细胞的凋亡平均数差异具有显著性（P〈0．05）。结论海绵体神经损伤可引起阴茎海绵体平滑肌的凋亡;阴茎背神经损伤对阴茎组织细胞凋亡无明显影响;联合损伤对海绵体平滑肌细胞凋亡的影响同单纯海绵体神经损伤。     

原发性脑干损伤神经元凋亡及caspase3的表达

目的观察原发性脑干损伤（PBSI）致死者脑干神经元凋亡及caspase3的表达情况,探讨其法医学意义。方法选择法医学检案中30例确定为原发性脑干损伤致死者脑干,按伤后不同存活时间（t≤5min、5min〈t≤15min、15min〈t≤1h、1h〈t≤24h）分为4组,以5例非脑干损伤死亡者脑干为对照组;分别运用常规HE、免疫组化和TUNEL染色检测中脑、桥脑及延脑重要核团内神经元凋亡及caspase3的表达情况。结果原发性脑干损伤后15min～24h出现明显神经元细胞凋亡（23.2%～35.9%）和caspase3阳性表达（28%～54%）,并呈现随损伤时间进行性增加的趋势,与对照组有显著性差异（P〈0.01）。结论原发性脑干损伤早期即出现神经元凋亡及caspase3表达增加,并随损伤时间的延长呈进行性增加,可据此辅助诊断原发性脑干损伤死亡。     

灌服毒鼠强诱导大鼠细胞DNA的损伤研究

目的研究毒鼠强体内染毒后,毒鼠强对大鼠脑细胞、心肌细胞、淋巴细胞DNA的损伤作用。方法选择健康Sprague-Dawley大白鼠20只,分成5组,每组4只,采用灌胃方法使大鼠毒鼠强体内染毒,按0.2,0.1,0.05,0.01mg·kg-1制作大鼠毒鼠强中毒模型,并以灌服生理盐水的健康大鼠为对照,分离实验大鼠的淋巴细胞、心肌细胞和脑细胞,用彗星电泳的方法测定不同浓度毒鼠强中毒后的细胞DNA损伤。结果0.2,0.1,0.05,0.01mg·kg-1剂量组的毒鼠强均可引起大鼠的淋巴细胞、心肌细胞和脑细胞DNA损伤,均与对照组差异有显著性(P<0.01)。结论毒鼠强诱导体内细胞DNA损伤可能是毒鼠强毒性作用机制之一。     

博落回对大鼠心肌Ca2＋.Mg2＋-ATPase与SDH活性的影响及超微结构观察

目的探讨博落回对心肌作用的机制。方法SD大鼠36只分为2个实验组和1个对照组,每组12只;2个实验组分别按1/6LD50、1/3LD50剂量的博落回水煎液灌胃,对照组以蒸馏水灌胃。各组大鼠处死后,每组10只取心肌组织制成匀浆,检测Ca2＋.Mg2＋-ATPase与SDH（琥珀酸脱氢酶）的活性;另2只大鼠心肌行超微结构观察。结果1/6LD50组大鼠心肌内Ca2＋.Mg2＋-ATPase与SDH活性较对照组有显著性升高（P〈0.05）;1/3 LD50组大鼠心肌内Ca2＋.Mg2＋-ATPase与SDH活性同对照组比较无显著性差异（P〉0.05）,但呈下降趋势。超微结构观察到实验组大鼠心肌细胞发生凋亡及1/3 LD50组大鼠出现心肌排列紊乱、断裂等征象。结论博落回对大鼠心肌内Ca2＋.Mg2＋-ATPase与SDH的活性有影响作用,并能诱导心肌细胞凋亡。     

姜黄素对缺氧缺血性大鼠脑组织中丙二醛和c-fos的影响

目的探讨姜黄素对大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxia—ischemic brain damage．HIBD）后丙二醛（malondjaldehyde,MDA）含量和c—fos蛋白表达的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为假手术对照纽、脑缺氧缺血组、姜黄素组和溶剂对照组。用比色法测定脑组织中MDA含量,免疫组织化学方法检测脑皮质区c—fos蛋白的表达,电镜观察脑皮质神经元的形态学变化。结果姜黄素干预组与其他组的相应时间段相比,MDA含量下降,脑皮质区c—fos蛋白表达显著增高（P〈0．05）。电镜观察脑皮质神经元损伤减轻。结论姜黄素可降低HIBD大鼠脑组织的MDA含量,上调c-fos蛋白的表达,减轻神经元的损伤。     

大鼠尺神经损伤平面和修复时间对爪内肌细胞凋亡的影响

目的研究尺神经损伤修复后靶肌功能恢复的影响因素。方法42只SD雄性大鼠分为肘部、腕部2组实验组和1组正常对照组;实验组在肘部和腕部完全离断两前肢尺神经后即刻、1个月、3个月修复一侧神经（另一侧为对照侧）,应用免疫组织化学染色和电镜技术,观察和比较大鼠爪内肌细胞凋亡及细胞超微结构变化。结果即刻修复组大鼠爪内肌促细胞凋亡基因Fas、Caspase-3表达与正常组之间的差异无统计学意义;随修复时间延长,其表达逐渐增高,且组间有显著性差异（P〈0．05）。抑细胞凋亡基因Bcl-2蛋白表达随修复时间延长而逐渐降低。伤后即刻、1月组实验侧Fas和Caspase-3蛋白表达较相应对照侧低（P〈0．05）;而3月组实验侧与相应对照侧比较无明显差异（P〉0．05）;相同修复时间,不同损伤平面组间表达差异均无统计学意义。结论靶肌超微结构改变及细胞凋亡的发生与神经损伤后修复时间有密切关系,与损伤平面关系较小。在法医学鉴定时机认定方面,尚需进一步研究验证。     

大鼠DAI脑细胞凋亡与Phospho-Ser^727 Stat1表达的相关性

目的探讨Stat1是否参与弥漫性轴索损伤（diffuse axonal injury,DAI）后神经细胞凋亡的病理生理过程。方法应用自由落体撞击模型复制大鼠DAI模型,分为正常对照组、假手术组和打击后不同时间组（6、12、24、48、72h,5d和10d）。采用HE染色和镀银染色观察大鼠脑组织的病理改变,用流式细胞检测脑组织中脑细胞的凋亡率,RT-PCR法测定脑组织中bax和bcl-2的表达变化,免疫组织化学法测定脑组织中不同脑区727位丝氨酸磷酸化的信号转导与转录激活子1（Phospho-Ser727 Stat1）的表达情况。结果DAI后HE染色未见脑挫裂伤,镀银染色可见神经轴索扭曲肿胀,个别断端膨大形成轴缩球;损伤组脑细胞的凋亡率和脑组织中bax和bcl-2 cDNA扩增产物的比值24h达到最大值,随后下降;不同脑区Phospho-Ser727 Stat1表达升高,24h达峰后下降,至10d较对照组仍有显著差异;阳性细胞主要是神经元,在不同脑区也有一定量的神经胶质细胞阳性表达。脑组织中Phospho-Ser727 Stat1表达变化与bax和bcl-2的cDNA扩增产物比值的变化具有正相关性,相关系数r为0.921。结论大鼠DAI后Stat1的激活和损伤后脑细胞的凋亡有关,应与损伤后二次打击有关。     

可卡因对性成熟期雄性大鼠生殖功能的损害

目的探讨可卡因对性成熟期雄性大鼠生殖功能的影响及其作用机制。方法选用性成熟期健康雄性SD大鼠30只，随机分为实验组和对照组，每组15只。实验组大鼠以15mg／kg剂量每天皮下注射可卡因28d。观察动物体质量、睾丸质量改变，检测血液中激素含量的变化．利用原位缺口末端标记（TUNEL）法检测睾丸细胞的凋亡，免疫组化方法检测睾丸Fas基因的表达。结果（1）实验组大鼠体质量、睾丸质量明显低于对照组（P〈0．05）；（2）实验组与对照组相比，睾酮含量明显降低（P〈O．05）：（3）实验组睾丸细胞凋亡较对照组明显增多（P〈0．05），Fas基因表达明显增加（P〈0．05）．且Fas基因阳性表达与睾丸细胞的凋亡指数呈正相关（r=0．9012，P〈O．05）。结论可卡因可致大鼠生殖器官发育和生殖内分泌功能损害．造成生精细胞凋亡．增殖能力下降．可能与Fas介导的睾丸生精细胞凋亡机制有关。     

咖啡因对乳鼠脑皮质神经元凋亡的作用

目的考察咖啡因对乳鼠脑皮质神经元凋亡的作用。方法取出生后2-3d的乳鼠脑皮质神经元,在37℃、5%CO2、100%相对湿度的培养箱中培养7d后,分别加入终浓度为300μmol/L和1 000μmol/L的盐酸咖啡因培养液,继续培养6-36h后,流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度、线粒体膜电位和细胞凋亡率,酶标仪测定Caspase-9的活性,电镜和Hoechst 33258荧光染色观察细胞的形态学改变。结果与正常组相比较,300μmol/L和1 000μmol/L盐酸咖啡因组在给药后6h的钙离子平均荧光强度明显增强（P〈0.05）,由正常值43.13±2.02分别增加到45.28±1.16和46.92±1.99;在给药后8h的线粒体膜电位下降最明显（P〈0.05）,由正常值443.58±11.77分别下降到289.53±16.47和165.14±14.72;在给药后10h的Caspase-9活性最高（P〈0.05）,由正常值1.00±0.000分别增加到5.33±1.02和8.33±0.92;在给药后36h的细胞凋亡率明显升高（P〈0.05）,由正常值4.94±1.74分别增加到15.98±2.03和18.70±2.09;在给药后24h荧光显微镜下见典型凋亡小体。结论咖啡因对乳鼠脑皮质神经元凋亡有促进作用。     

挤压伤大鼠早期心脏损伤的细胞机制

目的观察挤压伤大鼠血清对培养的新生大鼠心肌细胞的某些作用,拟阐明挤压伤早期心肌细胞损伤的细胞机制。方法培养1～3d龄SD大鼠心肌细胞,观察挤压伤大鼠血清对心肌细胞搏动频率、表面积、蛋白质含量、3H-亮氨酸掺入、胞内钙浓度和Fos蛋白表达的影响。结果与正常大鼠血清组比较,挤压伤大鼠血清培养的心肌细胞搏动频率(次/min)由88.3±20.6降为26.4±16.7,心肌细胞表面积、蛋白质含量、3H-Leu掺入、胞内游离钙浓度(nmol/L)和Fos蛋白表达阳性指数增加。结论挤压伤大鼠血清通过抑制细胞搏动,增加胞内钙浓度诱导Fos蛋白的表达,引起心肌细胞肥大,介导挤压伤早期的心脏损伤。     

大鼠博落回总碱中毒心肌细胞凋亡的研究

目的观察博落回总碱中毒后大鼠不同时间内心肌细胞凋亡情况,为博落回总碱中毒提供毒理学指标。方法以SD大鼠博落回总碱中毒为实验模型,通过HE染色及凋亡细胞检测技术对大鼠博落回总碱中毒后心肌病理变化进行研究,并对研究结果进行计算机病理学图像分析。结果大鼠在中毒后的不同时间段内,心肌细胞凋亡数高于正常对照组(P<0.01),且凋亡数在不同时间段差异有显著性。结论博落回总碱中毒在临床症状不明显及毒物分析难以检测的情况下,应用凋亡细胞检测技术可成功检测出心肌的病理学变化。     

乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响

目的探讨乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响。方法新生SD大鼠20只,随机分为4组,取心室肌以差速贴壁法原代培养心室肌细胞。培养第6天,制成密度为2×105个细胞/mL的细胞悬液,分别加入乌头碱混合液至终浓度为0.1、0.5、1、2μmol/L,染毒30m in;采用彗星电泳技术及CASP分析软件,检测不同浓度乌头碱染毒后心室肌细胞DNA损伤程度。结果心肌细胞被不同浓度乌头碱染毒后,尾部DNA含量、彗尾长度、尾矩、O live尾矩均随乌头碱浓度增加而升高,头部DNA含量则逐渐降低,与对照组相比,有显著性差异(P<0.01);乌头碱染毒剂量越大,心肌细胞DNA损伤越严重。结论乌头碱染毒引起细胞DNA断裂损伤呈明显的剂量—效应关系,推测细胞DNA损伤是乌头碱毒作用机制之一。     

急性心肌缺血猝死心肌中血红素加氧酶-1的表达

目的观察血红素加氧酶-1（HO-1）在急性心肌缺血猝死心肌细胞胞浆中的表达情况。方法应用免疫组织化学技术（SP法）,对27例可疑早期心肌缺血猝死（早期梗死组）、10例心肌梗死猝死（心肌梗死组）、11例冠心病非心性猝死（对照组1）以及10例正常心肌（对照组2）中HO-1的表达进行观察分析。结果早期梗死组与心肌梗死组在心肌细胞胞浆中HO-1均呈强阳性表达,对照组1和对照组2心肌细胞胞浆中HO-1弱阳性表达或无表达。早期梗死组和心肌梗死组与对照组1和对照组2之间心肌细胞内HO-1表达的差异有显著性意义（P（0.01）;镜下各组心肌细胞胞浆内HO-1表达的阳性面积率及平均光密度差别明显。结论 HO-1可以作为急性心肌缺血所致心性猝死的一个诊断指标。     

常规冷冻对大鼠尸体组织形态学的影响

目的观察分析死后不同时间冷冻大鼠尸体主要内脏组织细胞形态变化规律。方法 SD大鼠20只,分为尸僵前冷冻组、尸僵期冷冻组、尸僵缓解冷冻组及对照组（各5只）,颈椎脱臼处死大鼠,实验组大鼠在室温25℃±5℃、相对湿度80%±5%分别放置0h、6h、24h后-20℃±2℃冰箱冷冻72h,解剖提取脑、心、肺、肝、肾,常规切片HE染色,显微图像体视学测量细胞外间隙的面密度。结果各实验组内脏组织间质疏松增宽,冰晶裂隙沿组织间隙或肝血窦分布、周边细胞固缩,红细胞冻溶、血管周围浆液淤积,以肝组织变化最明显。细胞外间隙的面密度：对照组明显小于实验组（P〈0.01）;脑尸僵前组较尸僵组大（P〈0.05）;心、肾尸僵前组和尸僵组无显著差异（P〉0.05）,均较尸僵缓解组大（P〈0.01）;肝各实验组组间比较均无显著差异（P〉0.05）。结论冷冻不同尸僵状态下内脏组织细胞有不同的形态结构,可作为区别和判断生前和死后组织细胞形态改变的参考。     

病毒性心肌炎和扩张型心肌病心肌Fas蛋白表达

目的探讨病毒性心肌炎（viral myoearditis，VMC）和扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy，DCM）的发病机制及相互关系。方法应用改良的免疫组织化学技术观察VMC、DCM和对照组（各20例）心肌Fas蛋白的表达，并对其阳性反应结果进行Ridit检验。结果与对照组相比，VMC和DCM组Fas蛋白阳性表达明显升高，经Ridit检验，3组阳性结果差异有统计学意义（P〈O．005）；进一步采用两两比较Ridit检验，对照组和其他两组之间差异有统计学意义（P〈O．05），而VMC和DCM组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论VMC和DCM心肌组织中Fas蛋白表达明显高于对照组，提示VMC和DCM的发病都有细胞凋亡的参与：凋亡可能是VMC引起心肌损伤及演变为心肌病的一个发病机制。     

中介素对大鼠急性心肌缺血损伤的作用及机制

目的 探讨中介素(intermedin,IMD)对大鼠急性心肌缺血损伤的作用及机制,为研究心源性猝死机制提供思路.方法 72只健康雄性大鼠随机分为对照组、缺血组、IMD干预组.酶化学法检测心血中乳酸脱氢酶(1actate dehvdrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧...     

冠心病心肌细胞凋亡的研究

探索细胞凋亡在心血管系统的意义,应用TUNEL法、透射电镜技术观察20例冠心病猝死者梗死区心肌细胞凋亡现象。冠心病组梗死区心肌细胞凋亡千分率(557.94±144.10％)明显高于正常对照组(34.30±20.68％),P<0.01,并有趋势表明,冠状动脉粥样硬化病变支数越多,梗死区心肌细胞凋亡越明显。电镜下见有的心肌细胞出现胞核体积缩小、染色质边聚、核膜完整的早期凋亡特征;有的则出现染色质更浓密、电子密度明显增加、结构模糊不清、核膜仍完整的中晚期凋亡细胞特征。细胞凋亡在冠心病心肌梗死是一种相当重要的现象。     

地塞米松对人星形胶质细胞凋亡的影响

目的观察地塞米松(Dexamethasone,DEX)对人星形胶质细胞(Human astrocytes,HA)凋亡的影响。方法(1)培养人星形胶质细胞,免疫荧光法检测糖皮质激素受体(Glucocorticoid recepters,GR)的表达;(2)采用MTT实验检测不同浓度的DEX(10-9 M~10-5 M)对星形胶质细胞存活率的影响;(3)流式细胞术AnnexinⅤ-PI双标染色法检测细胞凋亡率。结果(1) HA细胞表达GR,阳性部位位于细胞浆;(2)与Con组相比,10-9 M~10-5M的DEX作用HA细胞48 h后,细胞存活率明显降低;(3)与Con组相比,10-6 M的DEX作用于HA细胞6h后,细胞凋亡率明显升高,DEX+RU486组与DEX组相比凋亡率明显下降。单独应用RU486组与CON组相比无明显差别。结论 DEX可通过与其受体结合独立诱导人星形胶质细胞凋亡。