猪三种细胞因子基因的克隆与序列测定

利用RTPCR技术,从植物凝集素(PHA)、脂多糖(LPS)诱导的猪外周血淋巴细胞(PBMC)中成功地克隆了IL2、IL4、IFNα1基因,诱导后第6～24h细胞因子转录基因量最丰富;诱导剂LPS和PHA联合使用的效果优于LPS或PHA单独使用的诱导效果。序列测定与分析表明,克隆的IL2、IL4和IFNα1基因与相应的参考序列的同源性分别是98.5%、99.0%和97.6%。     

番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC蛋白基因的克隆与序列分析

参考已发表的番鸭呼肠孤病毒(mDRV)的S4序列设计了1对扩增σC蛋白基因的引物,对mDRVZJ99株的RNA抽提物进行RTPCR扩增,获得了特异性的扩增片段。将PCR产物克隆测序,序列经同源性比较,发现mDRVZJ99株σC蛋白基因序列与福建MW9710株对应基因的同源性为99.5%,与法国89026株对应基因的同源性为94.2%,与法国89330株对应基因的同源性为95.0%;相应的氨基酸序列同源性分别为98.9%、94.1%、93.7%。基于σC基因及其推导氨基酸序列的蛋白质结构及物理化学性质预测结果,与国外学者对mDRVσC蛋白的报道相似。     

非洲猪瘟CD2v胞外区基因片段的真核表达及其多克隆抗体的制备

本研究利用真核表达系统表达非洲猪瘟病毒的CD2v胞外区蛋白,研究其免疫特性,制备多克隆抗体并研究其性质,为研发特异性单抗奠定数据基础。以非洲猪瘟病毒Wuhan2019-1株(GenBank:MN393476.1)为模板,合成CD2v胞外区基因序列,并将其克隆至真核表达载体pCAGGS载体中,获得pCAGGS-CD2v胞外区重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染293F细胞,获得重组胞外CD2v蛋白(简称His-CD2v)。用Ni-NTA柱纯化His-CD2v,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,利用ELISA和间接免疫荧光对多克隆抗体进行鉴定。结果显示,(1)His-CD2v融合蛋白在293F中以可溶形式表达,SDS结果显示,相对分子质量约为35~80 ku的弥散带;(2)融合表达的His-CD2v能与阳性血清反应,与对照不反应;(3)HisCD2v制备的多抗效价最高达1∶218700,且能与阳性血清竞争性结合CD2v抗原。上述结果表明,His-CD2v融合蛋白的表达及其多抗的成功制备,为进一步筛选CD2v特异性单抗及研制竞争ELISA试剂盒,为非洲猪瘟感染与免疫鉴别方法的建立奠定了坚实的基础。     

基于分子克隆方法制备标准分子量片段混合物

目的制备标准分子量DNA片段混合物。方法选取pMD18-T载体部分序列作为插入片段,设计引物,制备包含不同大小的标准分子量片段的克隆。大量培养细菌提取质粒,用双酶切、连接荧光接头的方法制备不同大小的带有荧光的标准分子量片段,混合,纯化,最终获得标准分子量片段混合物(内标)。结果用分子克隆方法制备出具有实用性的标准分子量片段混合物,其单个标准分子量片段大小分别为80bp、124bp、194bp、224bp、254bp、304bp、349bp、399bp、424bp、454bp。并且这些标准分子量片段混合物可以准确地对DNATyper15试剂盒的扩增产物进行检测。结论应用该方法制备了能满足研究和实验室要求的标准分子量片段混合物,为DNA分子量标准物标准品的制作提供了一种新的方法。     

猪生殖与呼吸综合征病毒ORF6片段的cDNA克隆及鉴定

根据已发表的PRRSV基因组序列,设计并合成了1对特异扩增ATCC VR-2332株的ORF6基因的引物.以ATCC VR-2332基因组为模板,通过RT-PCR扩增出586 bp的cDNA产物.将该cDNA片段经T-A连接插入pGEM-Teasy载体中,用重组质粒转化大肠埃希氏菌JM109,获得重组质粒转化菌.对重组质粒DNA进行PCR及酶切鉴定,证明插入的DNA片段与PCR扩增的DNA片段大小相符.对整个ORF6进行序列分析,将测序结果与已发表的ATCCVR-2332序列相比较,证实插入片段为PRRSV VR-2332的ORF6片段的cDNA.     

传染性腔上囊病病毒HN01超强毒株VP2基因的克隆和序列分析

根据GenBank中登录的传染性腔上囊病病毒(IBDV)标准强毒株52-70株基因组序列,设计并合成了1对扩增IBDV VP2基因的特异性引物.以IBDV超强毒分离株HN01感染发病鸡腔上囊组织中提取的病毒RNA为模板,用RT-PCR扩增出了1.45 kb的cDNA产物,将扩增的IBDV HN01株VP2基因克隆于pMD 18-T载体上,获得了pMD 18-T-VP2重组质粒.将IBDV HN01株 VP2基因序列测定结果与已发表的其他IBDV毒株VP2基因序列进行分析比较,绘出系统进化树.结果表明,HN01株与欧洲超强毒株UK661、日本超强毒株OKYM、香港超强毒株HK46等非常相似,而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大.     

国际邪教组织“雷尔教”

2003年11月14日,英国<伦敦晚报>发布的一条新闻立即引起国际主要新闻媒体的关注.据报道称,国际邪教组织"雷尔教"的主要头目之一、法国女生物学家布里吉特·布瓦瑟利耶在接受该报记者独家采访时,宣布"雷尔教"的"斯蒂梅德"公司已经找到一种"青春永驻"的方法,利用干细胞技术可以改变人体变老的进程.①布瓦瑟利耶的这番"惊人之语"立刻使人联想到去年末今年初的一场"闹剧":从2002年12月27日至2003年3月,"雷尔教"接连召开多个新闻发布会,大肆渲染其所属的"克隆援助"公司相继克隆出5个婴儿.2002年12月底,一手策划这一事件的"雷尔教"教主克劳德·沃利霍恩在接受美国<迈阿密先驱报>的采访时说,他"每年均会与外星人通过脑电波联络一次,由外星人告诉他应在哪儿重点进行传道工作",并扬言"下一个传道地点将是中国".②     

牛黄“粘”住异域巨骗

五名韩国人通过“服装样品”夹带各种类型的信用卡来沪，然后刷卡虚假消费，套取大量现金，上海警方循迹追踪，苦战20天，将其一网打尽，并一举查获用于作案的信用卡457张，上海首起跨国信用卡诈骗案成功告破。事隔半年，一伙马来西亚人携带经过“克隆”的信用卡悄然潜来上海，刷卡狂购名贵药材和高档日用品，犯罪活动刚刚露头，即被高度警觉的群众识破。     

“克隆”轿车运营

前不久．家住风阳县府城镇的邓某与朋友在一起吃饭时，有朋友告诉他，在凤阳县刘府镇街头偶然发现一辆和邓某车牌车型都一模一样的小车。这让邓某很是郁闷。3月14日上午。当邓某开车从淮南市办完事情往回赶时正好路过刘府镇．便有意减速注意搜寻是否能发现“孪生兄弟”。待其行至刘府镇三岔路朝北200米处时，     

谁为“克隆卡”埋单？

客户持中国工商银行湖南省新晃县支行（以下简称新晃县工行）的卡到联网的中国建设银行新晃县支行（以下简称新晃县建行）的自动柜员机上取钱，结果银行卡遭“克隆”。3万多存款不翼而飞。谁为“克隆卡”埋单？是让倒霉的银行客户去人海中搜寻了无踪影的盗款人？还是让不辨“克隆卡”真假的发卡银行承担责任？抑或是让被不法之徒安装了摄像头的自动柜员机的所有者新晃县建行承担责任？