旋毛形线虫P53重组蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的旋毛形线虫P53排泄分泌(ES)重组蛋白作为包被抗原,建立了检测旋毛形线虫P53 ES蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件:抗原包被浓度为2/μg/mL(100 μL),血清稀释度为1∶200,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG抗体稀释度为1∶10 000,抗原和血清于37℃反应1.5 h,血清和二抗于37℃反应1 h,底物于37℃显色10 min.应用该方法对试验小鼠血清进行检测,结果表明,建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,适用于检测特异性P53血清抗体.     

禽流感野毒感染禽与疫苗免疫禽NS1-ELISA鉴别方法的建立

分别构建了重组禽流感病毒H9N2亚型、H5N1亚型NS1基因原核表达菌株,IPTG诱导表达,表达的蛋白用Ni -NTA Agarose纯化,Western-blotting检测两种蛋白的活性,并进行交叉反应检测;以H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法,并优化各项反应条件.高效表达了H9N2和H5N1亚型NS1蛋白,融合蛋白的分子质量均为30 ku左右;Western-blotting检测均有特异性条带,并且存在明显的交叉反应.选择重组的H5N1亚型NS1蛋白建立了间接ELISA检测方法,最佳抗原包被浓度为1.325μg/mL,血清稀释度为1400.结果表明,以H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白为包被抗原的ELISA检测方法可区分禽流感病毒感染禽与疫苗免疫禽.     

磁贴穴位敷贴对哮喘患者肺功能及Th1/Th2细胞因子的影响

目的:研究曼吉磁贴对哮喘患者肺功能及辅助性T淋巴细胞1(T helper cell 1, Th1)/辅助性T淋巴细胞2(T helper cell 2, Th2)细胞因子的影响.方法:将80例支气管哮喘患者随机分为2组.对照组40例,用丙酸倍氯米松及沙丁胺醇治疗,疗程30 d;治疗组40例,在对照组治疗基础上用曼吉磁贴穴位敷贴治疗,疗程30 d.于1个疗程后判断疗效,观察两组患者给药前后咳嗽症状、昼夜发作次数的变化,并以美国AS-500型肺功能检查仪测定肺功能各项指标,包括一秒钟用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)、最大呼气流量(peak expiratory flow,PEF)、最大肺活量(forced vital capacity,FVC);采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组外周血白介素-4(interleukin-4,IL-4)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)水平,采用免疫荧光法检测血清总免疫球蛋白E(total immunoglobulin E, TIgE) 水平变化.结果:治疗组支气管哮喘的总有效率为95.00%, 其疗效优于对照组(P<0.05).与治疗前比较,治疗组治疗后症状和肺功能改善明显优于对照组(P<0.05).两组治疗后IL-4、TIgE水平均显著下降,IFN-γ水平均显著升高.结论:改善患者的肺功能及调节Th1/Th2细胞因子的水平是磁贴穴位敷贴治疗哮喘的可能机制.     

丝状霉形体山羊亚种血清抗体间接ELISA检测方法的建立

利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比(P/N)≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。     

反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响

选择促细胞生长性能良好的三批新生牛血清 ,经不同次数冻融后用其配制MEM培养液 ,用于培养SP2 / 0细胞 ,从细胞最大增殖量和倍增时间 2个指标测定促细胞生长效应。结果 ,用经不同次数冻融的新生牛血清配制的MEM培养液 ,对SP2 / 0细胞的最大增殖量和倍增时间影响不大 ;但反复冻融 2 0次以上的新生牛血清配制的培养液使细胞的倍增时间延长。由此可见 ,为了防止细胞倍增时间延长 ,所用新生牛血清的冻融次数应该控制在 2 0次以内     

蛋鸡血清与卵黄中禽流感病毒抗体的相关性

用禽流感 (AI)H9N2油乳剂灭活疫苗免疫非免疫蛋鸡 ,并于免疫后第 0、3、5、7、9、11、13、15、17、19、2 1、30d分别测定血清及卵黄中的AI血凝抑制试验 (HI)及琼脂扩散凝集试验(AGP)抗体。结果显示 ,免疫后第 7d卵黄中即可检出HI及AGP抗体 ,以后逐渐上升 ,在免疫后第 19～ 2 1d达高峰值 ,与血清的HI抗体水平接近 ,差异不显著 (P >0 .0 5 )。表明通过对鸡蛋卵黄AIV抗体检测 ,可以进行AI的疫情监测 ,但卵黄抗体检测具有一定的滞后性     

感染堆形艾美球虫的鸡血清生化指标检测

将 3 6只 2 4日龄AA鸡分为 3组 ,Ⅰ组每只鸡感染堆形艾美球虫 (Eimeriaacervulina)孢子化卵囊 70万个 ,Ⅱ组每只鸡感染 2 0万个 ,Ⅲ组为不感染对照组。对 3组试验鸡分别在感染前和感染后 4d、7d采心血 ,分离血清后检测 10项生化指标。结果 ,血清葡萄糖含量和天冬氨酸氨基转移酶活性在感染前后没有显著差异 (P >0 .0 5 ) ;血清总蛋白、白蛋白、甘油三酯含量和酸性磷酸酶活性在 4d和 7d均显著下降 (P <0 .0 5 ) ,其中Ⅱ组鸡的甘油三酯含量在 4d所降的幅度显著大于Ⅰ组 (P <0 .0 5 ) ;球蛋白、尿酸含量和碱性磷酸酶活性在 4d都显著升高 (P <0 .0 5 ) ,7d时Ⅰ组鸡的碱性磷酸酶活性仍显著高于感染前测定值 (P <0 .0 5 ) ,而球蛋白和尿酸含量均出现回落 ;Ⅰ组鸡的胆碱酯酶活性在 7d显著升高 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ组的胆碱酯酶活性在 4d和 7d均显著升高 (P <0 .0 5 )。     

虫草菌丝药物血清对传代大鼠系膜细胞胶原代谢的影响

目的：研究含药血清对体外培养大鼠系膜细胞的胶原合成及分泌的影响。方法：运用血清药理学及胶原酶消化的[3H]-Proline掺入法研究系膜细胞的胶原代谢。结果：正常大鼠血清对系膜细胞的胶原代谢无异常作用，而肾衰竭大鼠血清对系膜细胞的胶原合成与分泌有促进作用，含药血清则有抑制作用。结论：含虫草菌丝的血清对大鼠系膜细胞胶原合成与分泌有抑制作用。     

奶牛血清AKP聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离法

本文对前人分离火鸡血清及人组织碱性磷酸酶同功酶的聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法做了改进,成功地用于奶牛血清碱性磷酸酶同功酶的分离。     

一株猪源1型呼肠孤病毒的分离及鉴定

为了研究猪呼肠孤病毒的分子生物学特性,通过在细胞培养液中添加胰酶的方法,从仔猪腹泻粪样中分离、纯化并鉴定了1株能在Vero细胞上稳定产生细胞病变,以细胞颗粒增多、肿胀、漂落等细胞病变为主要特征的猪源1型呼肠孤病毒SHR-A株。根据呼肠孤病毒的理化特性,对病毒进行初步纯化,然后进行电镜观察、核酸提取、RNA电泳、RT-PCR、各病毒基因扩增和克隆测序等常规病毒学鉴定。SHR-A株S1基因的同源性分析和核苷酸系统发育进化树分析表明,该病毒与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型的同源性较高,而与血清2型和3型的同源性较低,因此初步判断该SHR-A株为血清1型,为国内首次报道从猪体内分离到血清1型的呼肠孤病毒。进一步分析发现,SHR-A的S1基因全长为1 465bp,其3′-UTR为3型,其余部分则为1型,说明其S1基因是1型和3型的嵌合体,此结果表明,哺乳动物呼肠孤病毒作为RNA病毒,基因重组可能是其除基因突变和基因重排以外的第3种病毒变异进化的重要方式。