表达序列标签在寄生虫基因研究中的应用

一个基因组的所有碱基中大约只有 2 %组成编码蛋白质的那部分基因 ,因此 ,测序基因组已不再是一种创建基因目录的有效途径。大量的试验证明 ,以cDNA的形式进行基因转录产物的大规模测序是了解基因组的首选办法。高通量cDNA测序于 1991年由Adams等[1] 创始 ,在构建人脑的cDNA并进行末端单向一次自动测序时首次提出了“表达序列标签 (EST )”概念 ,并发现了 337个基因。EST是对随机挑取的cDNA克隆的外源插入片段的一端或两端进行一次性测序产生的DNA序列 ,长度一般为 30 0～ 5 0 0bp ,一个全长基因转录本的cDNA序列可能包含多个重叠…     

枯草芽孢杆菌BE-91菌株木聚糖酶对小鼠的免疫原性试验

利用纯化的木聚糖酶免疫SPF小白鼠,收集血清样品,以建立的ELISA方法检测血清样品中的IgG水平、IFN-γ和IL-4含量,利用SPSS软件对结果进行分析。发现试验组IgG水平与阴性组、空白组有极显著差异(P0.01),空白组与阴性组无显著差异(P0.05);试验组IFN-γ含量与阴性组、空白组和阳性组有极显著差异,阳性组与阴性组、空白组有极显著差异,空白组与阴性组无显著差异;试验组IL-4含量与阳性组无显著差异,与阴性组、空白组有极显著差异,空白组与阴性组无显著差异。结果证明,BE-91菌株分泌的木聚糖酶具有良好的免疫原性和反应原性,能刺激机体启动细胞免疫和体液免疫。     

片形吸虫第一内转录间隔区DNA多态性的研究

以不同地区的片形吸虫虫株为研究对象 ,经PCR扩增出了ITS 1部分基因片段 ,采用单链构象多态性 (SSCP)方法 ,并结合序列分析研究了不同地区片形吸虫ITS 1DNA的多态性。不同地区的样品经SSCP分析 ,显示 3种带型 ,第 1种为大片形吸虫的带型 ,第 2种为肝片形吸虫的带型 ,第 3种为 2种带形的混合带型。广西区样品和大部分贵州省样品属于大片形吸虫带型 ;四川省、黑龙江省和部分贵州省样品为混合带型 ;南京市和甘肃省样品为肝片形吸虫带型或混合带型。测序结果表明 ,根据ITS 1基因的序列变异位点可区分 2种片形吸虫 ;表现为混合带型的样品在变异位点具有多态性。本研究结果显示 ,ITS 1片段可作为遗传标记用以区分大片形吸虫和肝片形吸虫 ,同时也证实 ,在我国除了这 2种片形吸虫外 ,还可能存在着“中间型”的片形吸虫     

食蟹猴源食道口线虫和缩小特尼登线虫的形态学鉴定及基于其ITS2基因的分子种系发育分析

对采集自食蟹猴肠道血结节中的3种线虫进行形态观察后鉴定,并用PCR扩增其ITS2基因后进行序列测定分析。结果显示,3种线虫分别为尖形食道口线虫、双叉食道口线虫及缩小特尼登线虫。测序结果表明,3种虫体ITS2基因序列的大小均为216bp。邻位连接法构建的种系发育树显示,本研究中测定的尖形食道口线虫、双叉食道口线虫和缩小特尼登线虫序列在进化树上自成独立的拓扑分支。以上结果为人类食道口线虫病及缩小特尼登线虫病建立分子鉴别诊断方法提供了分子标记。     

安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因与热休克蛋白70基因的重组联合表达

利用双酶切方法将安氏隐孢子虫热休克蛋白70(HSP70)基因部分编码区连接到含有安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因(COWP)的表达质粒pET-32a-COWP上,构建了表达质粒pET-32a-COWP-HSP70。将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,30℃,经1.5mmol/L IPTG诱导表达6h,表达产物主要以可溶的形式表达。使用小鼠抗安氏隐孢子虫超免疫血清为第一抗体进行Western-blot检测,结果有明显的目的条带出现,说明重组蛋白能被抗安氏隐孢子虫抗体识别。     

大片吸虫ESP对水牛外周血单核/巨噬细胞NO表达的影响

为探讨水牛易感大片吸虫的免疫机理,采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离水牛外周血单个核细胞,再经贴壁法纯化单核/巨噬细胞,用Geriss法检测在大片吸虫分泌排泄产物(ESP)或脂多糖(LPS)作用下,水牛外周血单核/巨噬细胞一氧化氮(NO)的表达量。结果显示,大片吸虫ESP或LPS都可单独作用刺激水牛外周血单核/巨噬细胞产生NO。大片吸虫ESP(0.1、1μg/mL)和LPS(0.1μg/mL)联合作用时水牛外周血单核/巨噬细胞产生NO的量低于LPS(0.1μg/mL)单独作用时的量,差异显著(P<0.05)。大片吸虫ESP(10μg/mL)和LPS(0.1μg/mL)联合作用时水牛外周血单核/巨噬细胞产生NO的量与LPS(0.1μg/mL)单独作用时差异不显著(P>0.05)。结果表明,大片吸虫ESP或其中组分能抑制水牛外周血单核/巨噬细胞产生NO的作用,这可能是水牛易感大片吸虫的一个原因。     

用免疫组织学方法检测猫皮下伪肿瘤中的皮肤真菌

应用小鼠抗犬小孢子菌（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍｃａｎｉｓ）特异性多克隆抗体，以生物素－亲和素酶标免疫组织学方法检测猫皮下伪肿瘤病理切片中对应的犬小孢子菌抗原，并与其它病原真菌进行了对比。试验结果显示，将真菌体外培养物经轻度匀浆的混悬液给小鼠皮下接种，可获得高滴度的特异性抗体。１５００～１１０００稀释的血清和１１００的二抗，以氨基乙烯苄唑（ＡＥＣ）作底物进行免疫组织学检验，可将组织切片中对应的抗原染成红色。犬小孢子菌抗体与所检酵母型真菌的抗原不发生交叉反应，与褐色丝状真菌瘤中的常见病原如烟曲霉菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、短颈扫帚霉菌（Ｓｃｏｐ－ｕｌａｒｉｏｐｓｉｓｂｒｅｖｉｃａｕｌｉｓ）、脱毛分枝孢子菌（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｔｒｉｃｈｏｒｃｈｅｓ）、疣状瓶霉菌（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａｒｅｒｒｕｃｏｓｅ）也无交叉反应，与链格孢菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ）有部分交叉。从而可区别皮肤真菌与其他常见病原真菌，为研究皮肤真菌感染非典型病理提供了一种可靠的手段