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目的探讨血色原微量分光法作为血痕确证试验的可行性。方法用离心分离的检材浸洗液代替检材,与改良高山试剂进行血色原反应,用微量分光光度计测定吸收光谱,判断检材是否含血。在优化参数的基础上,用倍比稀释的粗制人血红蛋白测定方法的灵敏度,用常见疑似血液/血斑,以及不同保存时间、不同基质的血斑测定方法的特异性和检材适应能力。结果用血色原微量分光法,仅血液(斑)具有415nm、525nm和555nm三个吸收峰组成的特异光谱,与常见疑似血液/斑没有交叉。反应2min,上样2.5μL,稀释1000倍的人血可稳定获得三峰光谱。通过延长浸洗时间、设置基质对照,10年陈旧血纱、有色布上的血斑等均可有效确证。三个吸收峰的高度与检液的血含量呈正相关,且525nm和555nm的吸光度变化趋势一致(y=0.523 2x+0.027 4,R2=0.997 1)。结论血色原微量分光法灵敏度高、特异性强,快速简便,可纳入DNA检验流程之中,在实际检案中有较好的应用前景。替代传统结晶法用于教学,更符合当前学生技能和意识的培养要求。 相似文献
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目的探讨降解DNA短串联重复序列PCR扩增产物在PAGE中Ladder-L ike条带的形成原因。方法用一组人工合成的不同长度的D8S1179DNA单链,模拟降解检材中的断裂DNA;利用John M设计的D8S1179引物对模拟模板的DNA单链进行PCR扩增,PAGE分离。结果不同模拟模板的DNA单链的组合可以扩增出不同的Lad-der-L ike条带。结论短串联重复序列Ladder-like条带是PCR过程中降解DNA多态区互补扩增的产物。 相似文献
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目的建立单管一步甲基化可变位点(methylationvariableposition,MVP)分析技术一单管消化后PCR链融解曲线分析(post—digestionPCR—meltingcurveanalysis,PDP—MCA)。方法以文献报道的差异甲基化区(differentiallymethylatedregion,DMR)为模型,在MVP两侧设计一组解链温度各不相同的引物。应用FastDigest甲基化敏感性限制酶(methylation—sensitiverestrictionenzyme,MSRE),在同一反应管内顺次进行DNA的酶切、复合扩增和MCA检测.生成MCA图谱。同时用该方法和传统的MSRE—PCRMCA技术检测相同样品(外周静脉血、精液、阴道液各5份),比较两种方法检测结果,验证其可行性,并分析比较不同样品的MCA/HRM图谱。结果解链温度相差2℃以上的片段,MCA峰分离良好,复合扩增后可以用MCA技术检测。应用单管PDP—MCA技术,可以集酶切、扩增和检测三步于一管,在2h内得到与传统方法一致的特异性图谱和数据,并实现样品的快速分类鉴别。结论单管PDP-MCA技术可以实现多个MVP的单管、闭管检测,具有简便、快速、易于自动化等优点,可用于样品DNA甲基化差异的检测。 相似文献
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目的调查样品中常见成份对"咖啡环"法DNA检测的影响。方法将含有不同浓度SDS、Na Cl等的DNA-EB滴加到载玻片上,室温自然蒸发,用凝胶成像系统观察荧光沉积形貌(Deposition Pattern,DP)、计算积分光密度(Integrated Optical Density,IOD),分析量效关系。结果低浓度非DNA成份存在时,DP仍以环状沉积为主,但有年轮环、放射纹等成份特异性细微差异。浓度高时,DP因成份而异,可为环+散在光点型(Na Cl)、中央光斑+弱小环型(SDS)、同心或年轮状多环型(Triton X-100)、环+斑点型(H^+)等。非DNA成份对DNA含量估计有不同程度影响,但估计值多数在0.5~2倍以内。结论样品成份对DNA的DP和IOD均有影响,但不影响DNA含量的粗略估计,且能提供样品纯度和残留物信息。 相似文献
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HUMARA基因座差异甲基化的法医学意义 总被引:1,自引:2,他引:1
目的 探讨X连锁差异甲基化多态性基因座的法医学应用意义。方法 以STR基因座HUMARA为例 ,应用甲基化敏感性限制酶消化后PCR技术 ,复合分析该基因座的STR多态性和甲基化状态 ,调查并比较男、女检材的分型效果。结果 基因组DNA经HpaⅡ消化后 ,男性没有扩增产物 ,女性分型不受影响 ,男女混合检材得到女性的分型图谱。女性单克隆瘤细胞只能检出 1个等位基因。结论 差异甲基化的HUMARA基因座是混合斑分析、性别鉴定和组织克隆性判断的有用工具。 相似文献
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用新设计引物调查武汉汉族Penta D和Penta E基因座遗传多态性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究PentaD和PentaE基因座分型引物设计 ,调查PentaD和PentaE基因座在武汉汉族人群中的遗传多态性。方法 用重新设计的PentaD和PentaE基因座分型引物 ,采用热启动PCR和PAGE技术对 2 81名武汉地区汉族无关个体进行分型调查 ,并将其分型结果与Promega公司的PowerPlexTM16系统荧光标记复合扩增试剂盒分型结果进行比较。结果 新设计引物扩增产物的片段大小范围分别为 15 3~ 198bp和 10 7~ 2 12bp ,其分型结果与PowerPlexTM16系统的分型结果完全一致 ,且用银染法检测的灵敏度显著提高 (由 0 5ng提高到 0 2ng)。PentaD和PentaE基因座在武汉汉族群体分别检出 10个和 2 1个等位基因 ,其基因型频率分布均符合Hardy Weinberg平衡。家系调查证实了其等位基因的传递符合孟德尔遗传规律。两基因座的个体识别能力 (DP)分别为 0 92 62、 0 9860 ,非父排除率 (PE)分别为 0 665 1、 0 83 2 5。结论 新设计引物用于PentaD和PentaE基因座的分型检测准确可靠 ,两基因座多态性程度高 ,在法医学个人识别和亲子鉴定中具有使用价值。 相似文献