抗猪流感病毒的单链抗体在真核细胞中的表达

为了研究抗猪流感病毒的单链抗体(scFv)在真核细胞内的表达情况及其生物学特性,通过PCR从前期试验获得的重组噬粒中扩增出scFv基因,将其克隆到真核表达载体p3×FLAG-CMV-7.1中,测序验证后转染A549细胞进行表达,对表达蛋白进行特性分析。结果显示,scFv基因的核苷酸序列的长度为732bp,序列排列方式为VH-Linker-VL,与数据库比对结果表明,符合小鼠抗体的重链和轻链可变区基因的结构特征。间接免疫荧光试验的结果表明,细胞内表达的绿色荧光蛋白主要分布在细胞质中。Westernblot分析显示,转染细胞的培养液上清和细胞裂解液上清中均可检测到一约32.8ku的融合蛋白,与预测结果一致。ELISA结果表明,表达的scFv具有结合猪流感病毒的活性。结果证实,抗猪流感病毒的scFv能够在细胞内正确表达,为进一步对抗猪流感的免疫治疗及免疫检测的研究提供了依据。     

弓形虫烯醇化酶2基因的原核表达与鉴定

为深入研究弓形虫烯醇化酶的生物学功能,根据已发表的eno2基因序列设计引物,通过RTPCR方法扩增弓形虫RH株的eno2基因。将eno2克隆到载体pET-28a(+)中后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定其免疫活性。结果显示,eno2基因全长1 353bp,编码444个氨基酸,与GenBank中登录的弓形虫烯醇化酶基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列的同源性均高达99.8%,与其他物种的烯醇化酶的同源性较低。在pH7.5、28℃和IPTG终浓度0.1mmol/L条件下,重组蛋白ENO2得到高效可溶性表达,分子质量约为55ku。Western-blot结果显示,重组蛋白能被感染弓形虫的犬阳性血清识别,说明ENO2具有较好的反应原性,可以作为血清学诊断抗原。IFA表明,NO2在弓形虫的细胞质和细胞核中均有分布。结果表明,本研究成功获得了可溶性、具有良好免疫活性的弓形虫重组蛋白ENO2,为深入研究其生物学功能奠定了基础。     

抗弓形虫SAG2蛋白单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

为制备抗弓形虫SAG2蛋白的单克隆抗体(McAb),用纯化的rSAG2蛋白免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选稳定分泌高效价McAb的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备单抗。用ELISA方法测定其效价;单克隆抗体类型鉴定试纸条鉴定其类型;Western-blot和IFA试验进行特异性鉴定。结果显示,筛选出2株能稳定分泌抗SAG2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为5E2、2A8。间接ELISA测定其效价分别为1∶256 000、1∶128 000;2株单克隆抗体亚型均为IgG1型,轻链均为κ链;Western-blot与IFA试验表明,这2株McAb均能够特异性识别天然构象的SAG2蛋白,并且进一步说明此蛋白是位于弓形虫膜表面的蛋白。成功获得了具有较高特异性及敏感性的抗SAG2蛋白的单克隆抗体,并能特异性识别天然构象的SAG2蛋白,为弓形虫病免疫诊断及基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

论分类的犯罪既遂标准

犯罪既遂的概念应当从实质意义上界定,并应与犯罪既遂的判断标准相区分;"构成要件齐备说"难以承担犯罪既遂判断标准的功能;从犯罪既遂角度划分的犯罪类型仅包括结果犯和行为犯两种,应在此基础上分别界定不同种类犯罪既遂的判断标准。     

阪崎克罗诺杆菌RPA-LF检测方法的建立

以阪崎克罗诺杆菌特异性基因16SrRNA和外膜蛋白基因ompA为靶序列,设计适用于重组酶聚合酶扩增-侧流层析技术(RPA-LF)的引物和探针,并优化反应条件.结果表明,RPA反应可在25～45℃进行,10～20 min即可完成.优化条件后,RPA-LF总反应时间仅为20 min,包括RPA在39℃反应15 min,RP...     

加快刑事法治建设,促进和谐湖北构建——湖北省法学会刑法研究会2007年年会综述

2007年7月7日至8日,“和谐湖北的刑事法治建设——暨2007年湖北省法学会刑法研究会年会”在湖北省黄石市隆重召开,大会共收到论文40余篇。在为期一天半的会议时间里,与会代表们就和谐社会与刑事政策、和谐社会与社区矫正、和谐社会与反商业贿赂、知识产权的刑法保护等议题进行了深入而广泛的讨论,现将会议的主要观点综述如下:一、和谐社会与宽严相济刑事政策从宏观层面定义,刑事政策是指国家为有效地惩罚和预防犯罪,依据一国的犯罪状况和犯罪产生的原因而确定的,通过指导刑事立法和刑事司法,实现保护人权以及预防、惩罚犯罪以维持社会稳定所…     

英国工业化进程中的社会失衡及其调整

社会失衡问题在此主要指收入分配与社会地位的失衡,英国的实践显示,工业化带来的收入增加效应对不同的群体有不同的影响,总的趋势是向高收入者聚敛,表现在不同部门中劳动与资本收益的非均衡性,经济与社会利益趋于向资本倾斜,形成了人们之间的经济收入和社会地位失衡,并且在工业化过程中进一步加剧。这种失衡主要表现在资本     

五种中草药对弓形虫体外增殖的抑制效果

探索治疗弓形虫病的有效药物组方,从而为临床合理用药提供科学的指导,通过体外试验,培养Ana-1细胞作为弓形虫宿主细胞,采用MTT法测定了甘草、黄芩、百部、苦参和贯众5种中药对细胞的安全浓度,将弓形虫RH株速殖子与Ana-1细胞在含不同浓度药物的细胞培养液中共同培养,在加药后第4、8、12、24、48小时,观察细胞和弓形虫的生长状态和形态,选取第48小时观察药物体外抑制虫体增殖的效果,并以磺胺嘧啶钠作为阳性药物对照。结果显示,黄芩、百部、甘草可显著抑制弓形虫的增殖,而贯众和苦参效果不佳。