基于布鲁氏菌Dps蛋白间接ELISA检测方法的建立与初步应用

为建立一种布鲁氏菌病早期快速诊断的血清学方法,进一步加强对布鲁氏菌病的防控.对布鲁氏菌Dps蛋白进行生物信息学分析、原核表达,将纯化后的重组蛋白作为包被抗原,建立了布鲁氏菌病血清学间接ELISA检测方法并进行初步应用.结果显示,当重组蛋白Dps包被量为0.25 μg,5％脱脂奶粉溶液封闭1.5 h,用稀释度为1∶1 0...     

猪SIgA直接ELISA检测方法的建立及应用

采集猪肠黏液并分离纯化出猪分泌型免疫球蛋白A(SIgA),制备兔抗猪SIgA IgG抗体,经HRP标记,并优化直接ELISA检测猪SIgA的条件,建立了检测猪SIgA的直接ELISA方法。结果显示,筛选的最佳反应条件:黏液蛋白包被浓度为10μg/mL,兔抗猪SIgA IgG-HRP酶标抗体的工作浓度为1∶200,反应时间为60min。包被SIgA浓度标准曲线的线性范围为90～1 400ng/mL,回收率为85.85%～133.88%,变异系数为13.12%～17.67%。采用该方法对猪肺炎支原体灭活疫苗免疫与攻毒后的仔猪肺冲洗液和肠黏液中的SIgA进行检测;结果显示,攻毒后免疫猪肺冲洗液中SIgA含量平均为205.81ng/mL,显著高于攻毒对照猪的147.56ng/mL和空白对照猪的124.37ng/mL(P<0.05);免疫猪肠黏液中SIgA含量平均为67.94ng/mL,与对照猪无明显差异。结果证实,建立的猪SIgA直接ELISA方法具有经济、适用和准确的特点。