陈旧骨骼DNA检验2例

对高度腐败及白骨化的尸体,骨骼是进行DNA检验的唯一检材。由于骨骼的特殊组织结构及环境因素的影响,使骨骼DNA提取较一般的组织困难。本文作者运用传统的有机法结合Microcon100纯化柱提取骨骼DNA,对2例陈旧骨骼DNA进行检验,现报道如下。1简要案情例12004年8月某河边发现一白骨化的尸骨,破案证实系2001年5月失踪的出租车司机陈某。取肱骨1根进行DNA检验。例22005年6月某水库内发现部分碎尸块,破案证实系半年前失踪的郭某。取股骨1根进行DNA检验。2DNA检验骨骼处理用手术刀片刮净骨骼表面的污垢,蒸馏水冲洗干净后晾干,在紫外灯下照…     

两种提取骨骼、牙齿DNA的方法

目的建立提取骨骼、牙齿DNA的新方法。方法收集380例骨骼、牙齿检材,其中347份为常规骨骼、牙齿(常规组),33份为陈旧骨骼、牙齿(疑难组)。常规组检材以Handy-Eco仪器、疑难组则用冷冻研磨仪研磨成粉,以Kingfisher自动化系统提取DNA,用Identifiler Plus进行STR分型检测。结果用HandyEco Kingfisher法(H-K法)成功提取345例常规骨骼、牙齿检材的DNA,成功率99.42%;用Freeze-mill Kingfisher法(FM-K法)成功获取32例疑难骨骼、牙齿检材的DNA,成功率96.97%。结论采用H-K法和FM-K法对骨骼和牙齿DNA的检验成功率较高,可选择应用于工作实践中。     

联合运用CTAB与磁珠提取陈旧骨骼DNA

<正> 用Chelex-100法或酚-氯仿法提取骨骼DNA,一般采用PK消化。该法虽对比较新鲜且有软骨组织存在的骨骼DNA提取效果较好,但对陈旧性骨骼DNA提取,难以达到理想效果。有人将CTAB(cetytrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化胺)用于陈旧性骨骼DNA提取,并采用纯化柱对DNA提取液进行浓缩纯化。由于其检验步骤相对烦琐,产物回收率受到限制。本文作者用CTAB裂解     

2种陈旧骨骼、牙齿DNA纯化方法的比较

目的比较有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法对陈旧骨骼和牙齿DNA的纯化效果。方法选择10份陈旧骨骼和12份牙齿样本,进行消化后分别采用有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法进行提取纯化,进行DNA定量后用SinofilerTM试剂盒进行检测。结果 2种方法纯化的骨骼、牙齿DNA的IPC CT值无显著差异。有机法+QIAquick纯化法纯化的骨骼、牙齿DNA平均浓度分别为0.180ng/μL±0.068ng/μL和0.132ng/μL±0.027ng/μL,所有样品均获得全部基因分型。DNA IQ磁珠法纯化的DNA平均浓度分别为0.038ng/μL±0.028ng/μL和0.036ng/μL±0.007ng/μL,有5份骨骼和6份牙齿样本仅获得部分基因分型或未能分型。结论有机法+QIAquick纯化法对陈旧骨骼、牙齿DNA的纯化效果优于DNA IQ磁珠法。     

常染色体STR及线粒体测序用于陈旧性骨骼DNA一例

陈旧性骨骼是法医学实践中一种检验难度比较大的生物检材,常常由于DNA的降解造成检验的失败。本文通过优化陈旧性骨骼的DNA提取条件,对4例埋葬38年的尸骨进行了STR分型和线粒体测序检验．为当事人成功解决了已故亲人尸骨的认定。现报道如下。     

陈旧骨骼DNA提取

目的寻找从陈旧骨骼中提取DNA的有效方法。方法运用传统的有机法结合Microcon100纯化柱提取骨骼DNA。结果用常规荧光标记复合STR基因分型法可对提取到的陈旧骨骼DNA进行成功分析。结论有机法结合Micrcon100纯化柱提取陈旧骨骼DNA法可有效应用于实际检案。     

3种骨骼DNA提取方法的应用效果比较

目的对3种方法提取骨骼DNA的效果进行比较,为实际应用中选择方法提供参考。方法应用骨骼孵化液法、DNA Investigator试剂盒法和CTAB法对同一骨骼样本进行脱钙、消化、提取DNA,用紫外分光光度计检测DNA的浓度值;使用Identifilerplus试剂盒进行PCR扩增,3130xl型遗传分析仪检测分型,并用SPSS 19.0软件对各项实验结果进行统计分析。结果 1g骨粉样本经上述3种方法提取,得到的DNA浓度分别为26.53ng/μL±5.47ng/μL、23.63ng/μL±4.56ng/μL、14.93ng/μL±3.88ng/μL;单因素方差分析表明3组数据之间差异性具有统计学意义。PCR扩增后电泳检测结果显示,骨骼孵化液法和DNA Investigator试剂盒法基因座检出率和峰值大致相同,均优于CTAB法。结论本文比较的3种方法均可用于骨骼样本的实际检案,检出率较高的两种方法可作为优选方案。     

骨骼DNA提取方法刍议

<正> 近几年,自从 DNA 检测进入司法实践,逐步形成了稳定的检验方法如血液(痕)、精斑、毛发、组织等的检验,但是骨骼(尤其是陈旧骨骼)DNA 提取一直是实际检案的难点,在炎热潮湿季节的尸体以及开棺验尸等案件中,由于骨组织耐腐败即成为唯一的物证,这对骨骼 DNA 的提取提出了实际要求。多年来许多学者和法医工作者在这方面作过探索和实践,摸索了许多骨骼 DNA 的提取方法,如:Kurosaki 1999年将骨组织放于液氮中冷冻处理后。研成粉末状,经 EDTA 脱钙,TNE、蛋白酶消     

10年陈旧软骨DNA检验1例

陈旧骨骼样本骨组织中DNA含量少且高度降解，DNA提取不仅有一定的难度，而且检验周期相对较长。笔者通过对长达10年的骨骼上附着的软骨成功进行DNA检验，现介绍如下。     

用chelex-100提取骨骼DNA的研究

建立了应用chelex-100加蛋白酶K提取骨骼DNA的方法,并对1～30年31例骨骼进行了实验.该方法操作简单、快速、重复性好,灵敏度以及阳性率高,适用于法医学鉴定.     

骨骼脱钙后DNA含量损失问题初探

骨骼是一类特殊的生物检材,是一种致密的结缔组织,相对于人体其他的组织脏器腐败降解得更慢。对高度腐败及白骨化的尸体,骨骼是进行DNA检验的唯一检材,但由于骨骼的特殊组织结构及环境因素的影响,使骨骼DNA的提取较困难。因此,为使骨组织中DNA易于释放,在提取中往往采用单独EDTA脱钙的步骤,以去除羟基磷灰石中的钙元素[1-2]。     

46年陈旧骨骼DNA检验1例

<正>1案例资料1.1简要案情王某,女,46年前去世,当时土葬,2011年7月发现尸骨被盗,需要对公安部门破获盗窃年轻女性尸骨案中提取的陈旧尸骨与王某女儿(现年49岁)血液样本进行DNA分型比对,以确定尸骨身源。1.2 DNA检验及结果骨骼处理取肱骨,去除骨骼表面污染物,中性     

DNATyper19~(TM)与Identifiler~(TM)Plus试剂盒对疑难检材检验比较

<正>本研究应用DNATyper19~(TM)试剂盒和Identifiler~(TM) Plus试剂盒对骨骼、牙齿和脱落细胞等疑难检材DNA进行平行扩增,从分型结果一致性、检出率等方面进行分析,探讨DNATyper19~(TM)试剂盒在疑难检材检验中应用的可行性[1-5]。1材料与方法1.1样本来源510例生物检材均来自本实验室日常检案积累,其中包括:骨骼70例、牙齿50例、脱落细胞390例(包     

mtDNA测序技术在法医检案中的应用

<正> 在法医DNA检验中,高度腐败甚至白骨化的尸体,软组织已遭到严重破坏,往往失去核DNA检验应具备的条件。这种情况下,对硬组织,如毛发、骨骼、指甲等进行mtDNA序列分析,并应用于法医个体识别及亲缘认定则具有独特的优势[1]。本文作者对检案中积累的毛发及腐败尸体的骨骼、指甲、血痕等进行mtDNA测序研究,并应用于案件鉴定,取得了满意的效果。     

藏獒粪便中人碎骨DNA检验1例

正近年来,骨骼DNA检验技术取得很大进展。骨骼DNA检验不仅在一些疑难案件中为侦破提供了方向,同时在证据链的完善和服务法庭诉讼中也发挥着重要作用。本文对1例藏獒粪便中残留的碎骨片进行检验,成功获得了被害人的STR分型,现报道如下。1案例样本及检验1.1简要案情及样本提取2014年11月,四川省某地发生一起杀人案。受害人张某家属报案称其失踪,经调查和前期取证,确     

利用AutoMate Express~(TM)系统提取陈旧性骨骼DNA

目的建立利用AutoMate Express~(TM)系统提取陈旧性骨骼DNA的方法。方法将骨骼用冷冻研磨机研磨成骨粉,经AutoMate Express~(TM)系统提取后,用Identifiler~Plus、MiniFiler~(TM)试剂盒扩增分型。结果10例保存在不同环境中、死亡时间在10~20年的骨骼样本利用AutoMate Express~(TM)系统3 h内完成DNA提取,有8例获得完整STR分型。结论 AutoMate Express~(TM)系统能快速、高效地提取陈旧性骨骼DNA,可应用于法医实际案件检验。     

陈旧性骨骼DNA提取方法的探索

目的探索陈旧性骨骼DNA的提取方法。方法收集4~15年陈旧骨骼样本,去除表面污染物,经脱钙、裂解提取各样本DNA,使用QIAquickPCR Purification试剂盒进行纯化,检测DNA纯度和浓度,应用Power PlexFusion荧光标记复合扩增系统进行扩增,AB-3500型遗传分析仪检测STR分型。结果 15例陈旧性骨骼经提取、纯化,提取的DNA模板浓度较高,在42.9~176.4ng/μL之间,A260/A280值较稳定,在1.06~1.40之间;所有样本均获得完整STR分型。结论该方法简便快速,提取效果好,能够适用于法医学实际检案。     

清代遗骸Y-STR检验1例

法医学实践中经常遇到对骨骼DNA检验的案例,但对保存超过100年的骨骼样本的检验报道较少。本文成功提取到150年前土埋遗骸的骨骼DNA,采用Y—filer试剂盒在9700型扩增仪上进行扩增,3130XL型遗传分析仪进行检测,得到遗骸Y—STR分型,并与对照样本比对,确认了遗骸身份。     

陈旧性骨骼DNA提取技术的研究

对陈旧性骨骼建立一个高回收率并能除去 PCR 反应抑制物的提取 DNA 的方法。采用 CTAB 法提取 DNA。结果显示,该方法不但能有效去除 PCR 抑制物,而且对水泡、火烧、土埋以及10年左右的骨骼所提取的 DNA 均能成功地进行荧光标记 STR 多基因座扩增检验。实验表明,该方法稳定,重复性好,适合陈旧骨骼标本的 DNA 提取。     

应用硅珠法提取陈旧骨骼DNA

骨骼相对于人体其他的组织脏器腐败降解慢,是进行高度腐败及白骨化样本DNA检验的唯一检材。但骨骼DNA的提取比较困难,本文运用传统的硅珠法提取骨骼DNA取得了很好的效果。1材料与方法1.1样本1~4年水浸泡、土埋的股骨、肱骨等样本,来自本实验室日常检案检材。1.2方法1.2.1骨骼DNA提取用水洗净骨骼表面,晾干。锯成小块,用锉打磨内外表面。去离子水、乙醇和5%bleach浸泡、晾干,磨成粉末。取骨粉5g;加入0.5mon/L EDTA(pH8.0)溶液,搅拌均匀置于摇床上脱钙12h,去离子水洗两遍,去上清,重复4次[1];沉渣中加入适量裂解液(6mon/L GuSCN,20mo…