陈旧骨骼DNA检验2例

对高度腐败及白骨化的尸体,骨骼是进行DNA检验的唯一检材。由于骨骼的特殊组织结构及环境因素的影响,使骨骼DNA提取较一般的组织困难。本文作者运用传统的有机法结合Microcon100纯化柱提取骨骼DNA,对2例陈旧骨骼DNA进行检验,现报道如下。1简要案情例12004年8月某河边发现一白骨化的尸骨,破案证实系2001年5月失踪的出租车司机陈某。取肱骨1根进行DNA检验。例22005年6月某水库内发现部分碎尸块,破案证实系半年前失踪的郭某。取股骨1根进行DNA检验。2DNA检验骨骼处理用手术刀片刮净骨骼表面的污垢,蒸馏水冲洗干净后晾干,在紫外灯下照…     

纳米磁珠提取法在骨骼DNA提取中的应用

目的对纳米磁珠法提取纯化骨骼DNA的效果进行比较评价,为方法选择提供应用参考。方法取泥土掩埋、水中浸泡1~10年不等的25根长骨,经水洗、刮净,液氮冷冻研磨器将骨骼研磨成粉末状,分别应用纳米磁珠提取法和King Fisher仪器自动化提取法提取DNA,IdentifilerPlus试剂盒进行扩增,ABI 3100遗传分析仪进行STR分型检测;对两种方法提取的DNA定量和经扩增、分型检测的结果进行比较。结果骨骼样本采用纳米磁珠法提取到的样本DNA(1.237 5ng/μL±0.319 2ng/μL),较之King Fisher法的浓度(0.506 2ng/μL±0.280 5ng/μL)更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05);而纳米磁珠法的分型成功率亦更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05)。结论用纳米磁珠提取纯化骨骼DNA,能得到高质量DNA模板,有利于提高分型检验的成功率,可在实际检案中选择使用。     

3种提取高度腐败检材DNA的方法比较

本文对3种DNA提取方法在高度腐败检材DNA提取中的应用进行了比较,供法医学实践参考。1材料与方法1.1材料3份检材均为尸体肋软骨,其中1号为死后在水里浸泡18天解剖,酒精固定2年的检材,2号检材为死后15天解剖,酒精固定1年的检材,3号检材为死后10天解剖,后酒精固定1月的检材。1.2 DNA提取Chelex-100法[1]3份检材各500mg剪粹,分别加入200μl 5%Chelex-100,10μl PK(10mg/m l),10μlDTT(39mmol/m l二硫苏糖醇),37℃水浴过夜,100℃加热10m in,剧烈震荡,10 000 r/m in离心10m in,上清备用。有机法[2]3份检材各500mg剪粹,分别加入400μl TES…     

一种牙齿DNA的提取方法

<正>在高度腐败及白骨化的未知名尸源鉴别中,牙齿检材因其自身的组织结构特性而往往优于骨骼检材,而成为DNA工作人员优先检验的样本。在牙齿检验中,手工提取及自动化提取方法在文献中均有报道~([1-2]),本文在参照牙齿传统手工DNA提取方法的基础上进行了改良,形成了一种既快速又适合所有DNA试验室的牙齿DNA提取方法。现介绍如下。     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的　建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。　方法　采用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置 5～ 15年的男、女血痕标本各 5 0例、毛发各 2 0例、骨骼各 2 0例以及现场提取 5 - - 2 0天的男、女腐败肌肉各 10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PAG( 9%T ,3 %C)电泳、银染显带检测扩增产物。　结果　所有样本均得到正确结果 ,男性检材表现为 83bp的Y特异性及 80bp的X特异性 2条谱带 ,而女性检材仅有 1条 80bp的X特异性谱带。　结论　用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便 ,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

陈旧骨骼DNA提取方法的应用研究

在法医实践中,DNA检验已成为个体识别鉴定的常规技术。现场提取的检材中,骨组织具有耐腐败特性,当其他检材完全腐败后,骨组织仍能够作为DNA检验的重要材料。但陈旧尸骨骨组织中DNA含量少且高度降解,给提取DNA带来一定难度。本文采用较高温度脱钙,在磷酸盐缓冲液条件下经SDS-PK、GuSCN消化裂解骨细胞,含DNA的裂解产物经硅珠纯化,从1~16年的陈旧骨骼中提取到高质量DNA模板用于STR分型,成功率为95.5%。现将方法报告如下:1材料与方法1.1材料骨骼样本89根,来源于送检案件。其中完整长骨78根,断骨和骨片11根。现场条件有泥土掩埋、水…     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的 建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。方法 采用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置5－15年的男、女血痕标本各50例、毛发各20例、骨骼各20例以及现场提取5－－20天的男、女腐败肌肉各10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PGA（9％T,3％C）电泳、银染显带检测扩增产物。结果 所有样本均得到正确结果,男性检材表现为83bp的Y特异性及80bp的X特异性2条谱带,而女性检材仅有1条80bp的X特异性谱带。结论 用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

骨骼脱钙后DNA含量损失问题初探

骨骼是一类特殊的生物检材,是一种致密的结缔组织,相对于人体其他的组织脏器腐败降解得更慢。对高度腐败及白骨化的尸体,骨骼是进行DNA检验的唯一检材,但由于骨骼的特殊组织结构及环境因素的影响,使骨骼DNA的提取较困难。因此,为使骨组织中DNA易于释放,在提取中往往采用单独EDTA脱钙的步骤,以去除羟基磷灰石中的钙元素[1-2]。     

尿斑的DNA检验1例

1案件简价2006年1月,南方某市一女子被杀;警方在现场勘查中提取到一件部分被液体浸泡的有色毛衣(经当地鉴定该液体为尿液)。为确定这份尿斑为何人所留,办案单位于半年后将以上检材送检,要求进行DNA鉴定。2检验方法检材为现场提取的毛衣1件。在毛衣被液体浸泡之处(有黄色斑迹)分别剪取2处1cm2大小的斑迹(编号为1、1R)各置于1.5ml空离心管中,加入500μl磁珠裂解液(Promega公司)和20μl PK(5mol/L),56℃保温1h,13000r/min离心3min,吸取上清,移入干净的离心管中,此后依照DNA IQTMsystem进行DNA提取,方法详见试剂盒说明书,最后用20μl的…     

陈旧性骨骼DNA提取方法的探索

目的探索陈旧性骨骼DNA的提取方法。方法收集4~15年陈旧骨骼样本,去除表面污染物,经脱钙、裂解提取各样本DNA,使用QIAquickPCR Purification试剂盒进行纯化,检测DNA纯度和浓度,应用Power PlexFusion荧光标记复合扩增系统进行扩增,AB-3500型遗传分析仪检测STR分型。结果 15例陈旧性骨骼经提取、纯化,提取的DNA模板浓度较高,在42.9~176.4ng/μL之间,A260/A280值较稳定,在1.06~1.40之间;所有样本均获得完整STR分型。结论该方法简便快速,提取效果好,能够适用于法医学实际检案。     

硅珠法提取骨组织DNA

骨骼是硬组织 ,抗腐蚀性好 ,当其它软组织完全腐败后 ,骨组织在鉴定中可发挥重要作用。但由于骨组织中细胞含量少[1] ,加上环境因素的影响 ,使陈旧骨骼的ＤＮＡ提取成为鉴定工作的难点[2 ] 。本文研究了骨组织ＤＮＡ的硅珠提取法 ,并将其运用于法医物证检验。1　材料与方法1 1　样本收集75例骨骼样本来自本实验室受理的刑事案件检材 (检材保存时间最久为 14年 )。1 2　试剂脱钙液 :0 2ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ溶液 10 0ｍｌＥＤＴＡ Ｎａ2 10 ｇ ,ｐＨ 7 0 [3] 。裂解液 :12 ｇ ＧｕＳＣＮ + 10ｍｌ0 1ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌｐＨ 6 4 + 2 2…     

PuriTyper~(TM)法医学纯化试剂盒的性能验证

目的验证PuriTyperTM纯化试剂盒各项性能指标和法医学应用价值。方法收集及制备抗凝血液、常见案件检材(唾液、烟头、精液、毛发、指甲、骨骼及组织块)、斑痕样本(血斑、唾液斑、精斑)以及模拟添加抑制剂和模仿自然环境中放置的血斑。采用PuriTyperTM纯化试剂盒提取纯化并进行DNA定量,IdentifilerTM复合扩增试剂盒扩增,产物经ABI 3130遗传分析仪进行检测,Genemapper软件分析结果,对该试剂盒灵敏度、稳定性、重复性、检材适应性进行测试。结果采用该试剂盒提取0.1～40μL血液分别获得0.042～26.45ng/μL的DNA。3种斑痕样本DNA产量平行试验结果稳定。不同类型检材重复检验所获IPC的CT平均值在27.60至28.03之间。常见案件检材所得分型与已知结果均一致。结论 PuriTyperTM纯化试剂盒能够满足法医DNA检验的要求,对法医学实践具有重要的应用价值。     

3种骨骼DNA提取方法的应用效果比较

目的对3种方法提取骨骼DNA的效果进行比较,为实际应用中选择方法提供参考。方法应用骨骼孵化液法、DNA Investigator试剂盒法和CTAB法对同一骨骼样本进行脱钙、消化、提取DNA,用紫外分光光度计检测DNA的浓度值;使用Identifilerplus试剂盒进行PCR扩增,3130xl型遗传分析仪检测分型,并用SPSS 19.0软件对各项实验结果进行统计分析。结果 1g骨粉样本经上述3种方法提取,得到的DNA浓度分别为26.53ng/μL±5.47ng/μL、23.63ng/μL±4.56ng/μL、14.93ng/μL±3.88ng/μL;单因素方差分析表明3组数据之间差异性具有统计学意义。PCR扩增后电泳检测结果显示,骨骼孵化液法和DNA Investigator试剂盒法基因座检出率和峰值大致相同,均优于CTAB法。结论本文比较的3种方法均可用于骨骼样本的实际检案,检出率较高的两种方法可作为优选方案。     

两种提取骨骼、牙齿DNA的方法

目的建立提取骨骼、牙齿DNA的新方法。方法收集380例骨骼、牙齿检材,其中347份为常规骨骼、牙齿(常规组),33份为陈旧骨骼、牙齿(疑难组)。常规组检材以Handy-Eco仪器、疑难组则用冷冻研磨仪研磨成粉,以Kingfisher自动化系统提取DNA,用Identifiler Plus进行STR分型检测。结果用HandyEco Kingfisher法(H-K法)成功提取345例常规骨骼、牙齿检材的DNA,成功率99.42%;用Freeze-mill Kingfisher法(FM-K法)成功获取32例疑难骨骼、牙齿检材的DNA,成功率96.97%。结论采用H-K法和FM-K法对骨骼和牙齿DNA的检验成功率较高,可选择应用于工作实践中。     

微量检材DNA提取方法

法医DNA鉴定中常见的微量检材,是指含有微量核DNA的降解检材(例如陈旧骨骼等)和附着载体上生物组织量少的检材。为了获得“大量”的检材DNA就必须增加检材用量,扩大反应体系。应用大反应体系提取微量检材DNA时,常出现提取溶液DNA含量过低,而不能获得DNA沉淀。如果不采用有效的方法,就会由于提取操作不当而引起DNA损失,导致PCR反应失败,直接影响案件的侦破和法庭证据的科学性。本文应用正丁醇浓缩法成功地解决了微量检材DNA的提取问题,在实际的案件鉴定中取得了满意的结果。1材料与方法1.1微量检材所用微量检材均来自案件鉴定所用…     

陈旧骸骨DNA身份鉴定的法医学进展

骨骼和牙齿是重要的生物样本,由于结构特殊,抗降解能力强,是自然条件下保留DNA理想的生物检材。在历史人物鉴定案例中,陈旧的骨骼和牙齿样本常常是唯一的生物检材,但其DNA呈微量、毁损和不同程度降解状态,需要经过特殊的实验处理以实现身份鉴定。本文综合近年来相关研究报道,从采集检材、DNA提取、DNA富集、检测分析方案等方面进行综述,以期促进陈旧骨骼和牙齿检测体系的进一步发展和完善。     

碎尸案中腐败肌肉、牙齿的STR分型

正碎尸和腐败尸体案件的检材以腐败肌肉组织、骨骼和牙齿为主,成功获得这类腐败、降解检材的STR分型对案件的侦办至关重要。本研究通过联合应用QIAcube全自动核酸纯化仪和REPLI-g~Single Cell试剂盒的方法提取、纯化高度腐败降解组织DNA,以提高严重降解等疑难检材的STR分型成功率。1材料与方法1.1材料13份检材均来自实验室的检案。其中烹煮尸块的高压锅排气阀滤网内、外侧和绞肉机进料管T形口内侧壁疑似组织擦拭棉签各1份,共3份,塑料PV管内封装19个月的肌肉组织9份,尖牙1颗。     

检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响

目的 研究检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响。方法 使用生物检材采集与保存套管棉签、尖头棉签和普通医用棉签采集血样,分别放置于生物检材采集与保存套管或纸质物证袋中保存1周。剪取全部血样于96孔板中,用磁珠法结合自动化工作站提取DNA,以ABI7500型荧光定量PCR仪定量。结果 生物检材采集与保存套管采集保存的血样所提取的DNA浓度平均为(2.54±0.63)ng/μL,而尖头棉签、普通医用棉签采集并分别用纸袋保存的血样提取的DNA浓度平均为(2.06±0.44)ng/μL和(0.93±0.59)ng/μL。结论 生物检材采集与保存套管较之于尖头棉签或普通医用棉签采集、纸袋保存方式,其获得的DNA浓度显著提高,DNA提取率高。     

硫酸铜检验1例

硫酸铜(CuSO4)是二价铜盐,可溶于水,有毒性,其水溶液因硫酸铜水解而略呈碱性。无水硫酸铜为白色粉末,一般情况下,易吸水变为CuSO4.5H2O呈蓝色。2005年3月11日,新乡市获嘉县某线材厂被盗铜板(已被硫酸反应过,铜板上附有大量硫酸铜)20块,价值3000余元。3月17日查获犯罪嫌疑人冯某,提取冯某的棉袄、棉鞋以及几块红砖(棉袄、棉鞋以及红砖上均附有微量浅蓝色物质)。1检材提取将棉球用去离子水浸泡后,分别擦拭附有微量浅蓝色物质检材的表面;挤出棉球中的水,离心(1000r/min)1min,取上清液备检。2检验(1)取检材提取液各1ml,滴加0.5ml0.5?Cl2溶…     

DNATyper19~(TM)与Identifiler~(TM)Plus试剂盒对疑难检材检验比较

<正>本研究应用DNATyper19~(TM)试剂盒和Identifiler~(TM) Plus试剂盒对骨骼、牙齿和脱落细胞等疑难检材DNA进行平行扩增,从分型结果一致性、检出率等方面进行分析,探讨DNATyper19~(TM)试剂盒在疑难检材检验中应用的可行性[1-5]。1材料与方法1.1样本来源510例生物检材均来自本实验室日常检案积累,其中包括:骨骼70例、牙齿50例、脱落细胞390例(包