用Chelex100法及有机溶剂提取法联合提取DNA扩增STR基因座的比较研究

为了比较不同方法提取DNA扩增STR基因座的成功率 ,本文用Chelex10 0法及Chelex10 0法联合有机溶剂提取法分别提取性犯罪案件 6份血斑及 6份混合斑中精子DNA ,并用PE公司ProfilerPlus系统复合扩增 ,ABI 310型基因分型仪检测。结果表明 ,常规采用Chelex10 0法提取血斑及精斑等生物检材DNA作STR基因座检验失败或所检测的位点较少时 ,应对Chelex10 0法提取的DNA上清液再用有机溶剂提取法提取 ,可极大提高DNA检验成功率。采用本文建立的Chelex10 0法联合有机溶剂提取法 ,提高了PCR扩增阳性率 ,对实际检案很有帮助 ;在PCR扩增前应常规进行DNA定量检验 ,否则对于重要检材应进行梯度扩增。     

一种改良Chelex地方法提取血痕DNA

对于新鲜或量足的血痕,采用文献报道的Chelex-100直接处理提取DNA,一般都能获得满意结果,但在日常检案过程中,陈旧而量少的血痕检材经常遇到,而且载体可能有泥沙、色素或吸附力强等PCR扩增抑制物的存在.这类检材DNA采用普通的Chelex-100快速提取法,有时很难奏效.针对以上问题,本文结合两例检案,对血痕DNA的Chelex-100快速提取法进行了一些改良,显著提高了检出率,使检案成功,报告如下:1 材料与方法1.1 材料:取自本实验室检验的两案例中的22份血痕.     

直接扩增法在血痕、肋软骨和唾液检材中的应用

目的采用Identifiler Direct PCR试剂盒直接扩增法进行棉签擦拭血痕、肋软骨和烟蒂唾液斑DNA分型检验,并评价其应用价值。方法收集棉签擦拭血痕、烟蒂各20份,肋软骨10份,采用Identifiler Direct PCR试剂盒进行直接扩增及分型检验,以相同检材采用磁珠法/Chelex-100法提取模板DNA后扩增检验结果作为对照,对两组所得结果进行比较分析。结果棉签擦拭血痕和肋软骨一次检测完整分型率均为100%,分型结果与对照组一致;烟蒂上唾液斑有2份检材第一次未能完整分型,调整方法再次检验后获分型成功。结论实际检案中的棉签血痕、肋软骨和烟上唾液斑,采用直接扩增法检测,方法简单、快速、稳定、检材用量小,可在实际检案中选择使用。     

载体法检验微量检材DNA

目的解决微量生物检材DNA检验难题。方法采用载体法对已知微量血样DNA进行检验，再与目前高灵敏度的Chelex-100提取的DNA检验的相应结果进行比较。结果载体法针对微量血样的DNA检验。不但能得到正确的STR分型结果．同时在检验灵敏度上比Chelex-100法高出2倍以上。结论载体法可提高微量生物栓材中DNA检出率，且操作简单，在法医检案工作中具有较高应用价值。     

江苏地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性

<正>本文采用Identifiler荧光标记复合扩增系统,对江苏地区583名汉族无关个体15个STR基因座遗传多态性进行调查,为相关人群法医学个人识别和亲权鉴定提供基础数据。1材料与方法1.1样本583份无血缘关系汉族个体口腔FTA卡样本(男495份,女88份),均为本实验室DNA数据库和日常检案积累。1.2 DNA分型检验采用Chelex法[1]提取样本模板DNA;采用     

微量PCR反应体系在两种试剂盒中的应用

美国AB I公司的Profiler PlusTM试剂盒和Identifi-lerTM试剂盒在当前法医DNA检案中应用广泛,但价格昂贵。本实验利用5μl体系进行PCR扩增取得满意效果,降低了检验成本。1材料与方法1.1材料法医DNA检案中常规检材,血痕、精斑、烟蒂和毛发(带毛囊)各20份。Profiler PlusTM试剂盒和IdentifilerTM试剂盒(AB I,USA)。1.2方法1.2.1 DNA提取上述检材采用Chelex-100法[1]提取模板DNA。取9mm2血痕加入5%Chelex-100150μl,56℃2h;精斑经两步法视镜检精子量多少酌情加入5%Chelex-100 150~250μl,PK 10μl(2mg/m l),DTT 10μl(1mol/L…     

QIAcube小型工作站在生物接触类检材提取中的应用研究

目的 探讨QIAcube工作站在生物接触类检材中的提取效果。方法 将90份以脱落细胞粘取膜、实物样本(纱线转移)或棉签擦拭物为载体的生物接触类检材,分别采用QIAcube工作站、EZ1工作站和手工硅珠法进行基因组DNA提取、定量并检测15个常染色体基因座的STR分型。结果 利用QIAcube工作站提取的生物接触类检材平均检出率达到44.4%,其中脱落细胞粘取膜组检出率为56.7%,实物纱线转移组检出率为46.7%,棉签擦拭物组检出率为30.0%。脱落细胞粘取膜组和实物样本(纱线转移)组均获得较好的STR分型结果,所得DNA浓度均优于棉签擦拭物组样本。QIAcube工作站组平均检出率为44.4%,手工硅珠法组平均检出率为43.2%,而EZ1工作站组平均检出率为26.9%,前两者平均检出率明显高于EZ1工作站组。QIAcube工作站组与硅珠法组所得DNA浓度无显著差异,但均明显高于EZ1工作站组。QIAcube工作站组与硅珠法组检测得到的STR分型RFU值及峰值均衡性均优于EZ1工作站组,尤其是大片段基因在前两组中均能够被完整检测到。结论 采用QIAcube工作站提取生物接触类检材检出率高,STR分型结果良好,可应用于法医物证实际案件检验。     

用磁珠法快速提取指甲DNA

<正>在日常检案过程中,一般采用Chelex-100法或苯酚/氯仿法提取指甲DNA。Chelex-100法提取的DNA模板有时存在着较多扩增抑制物,需进一步纯化。苯酚/氯仿法虽可以得到质量较好的DNA模板,但在提取过程中需要多步离心,有可能使DNA样品     

联合应用chelex100和磁珠法检测霉变皮上衣微量DNA1例

微量疑难检材DNA的提取是目前检案的难点之一.笔者在办案中,遇到1份微量、陈旧、霉变的检材;经联合应用chelex100法和磁珠法(DNA IQIM)成功从检材中提取并获得了足量、高纯度的模板DNA,采用PCR扩增和荧光检测获得理想的STR分型结果,为破案提供可靠有力的科学依据.现报道如下.     

碎尸案中腐败肌肉、牙齿的STR分型

正碎尸和腐败尸体案件的检材以腐败肌肉组织、骨骼和牙齿为主,成功获得这类腐败、降解检材的STR分型对案件的侦办至关重要。本研究通过联合应用QIAcube全自动核酸纯化仪和REPLI-g~Single Cell试剂盒的方法提取、纯化高度腐败降解组织DNA,以提高严重降解等疑难检材的STR分型成功率。1材料与方法1.1材料13份检材均来自实验室的检案。其中烹煮尸块的高压锅排气阀滤网内、外侧和绞肉机进料管T形口内侧壁疑似组织擦拭棉签各1份,共3份,塑料PV管内封装19个月的肌肉组织9份,尖牙1颗。     

浓缩DNA法结合miniSTR分型技术检验微量DNA

目的优化低拷贝数DNA STR分型方法。方法对采用磁珠法或Chelex-100法提取DNA,Identi-filer试剂盒扩增,未获得分型结果的日常检案检材,采用物理浓缩法或过柱浓缩法浓缩DNA,采用miniFilerTM试剂盒再次扩增分型。结果 127例检材中,47例磁珠法提取DNA未获得分型的样品,分型成功率为36%;80例Chelex-100法提取DNA未获分型的样品,分型成功率为30%。结论采用浓缩法和miniFilerTM试剂盒,可以提高日常检案中低拷贝数检材的STR检验分型成功率。     

DNA IQ^TM系统在混合斑精子DNA检验中的应用

笔者在强奸案件混合斑精子的DNA检验中,以差异裂解法第一步消化去除女性细胞得到精子沉淀后,采用DNA IQTM系统直接提取混合斑中精子DNA,在200余份检材的检验中获得较满意结果。现将方法报告如下:1材料与方法1.1材料取自本实验室日常检案积累的混合斑样本216份。主要仪器和试剂采用9700PCR扩增仪(美国ABI公司)、ABI3100型遗传分析仪(美国ABI公司)、DNA IQTM系统(Promega公司)、AmpF1STRIdentifiler试剂盒((美国ABI公司)。1.2方法1.2.1 DNA提取参照差异裂解法,经过套管离心去除女性细胞后,得到沉淀精子,加入100~200ulDNA …     

应用硅珠法提取陈旧骨骼DNA

骨骼相对于人体其他的组织脏器腐败降解慢,是进行高度腐败及白骨化样本DNA检验的唯一检材。但骨骼DNA的提取比较困难,本文运用传统的硅珠法提取骨骼DNA取得了很好的效果。1材料与方法1.1样本1~4年水浸泡、土埋的股骨、肱骨等样本,来自本实验室日常检案检材。1.2方法1.2.1骨骼DNA提取用水洗净骨骼表面,晾干。锯成小块,用锉打磨内外表面。去离子水、乙醇和5%bleach浸泡、晾干,磨成粉末。取骨粉5g;加入0.5mon/L EDTA(pH8.0)溶液,搅拌均匀置于摇床上脱钙12h,去离子水洗两遍,去上清,重复4次[1];沉渣中加入适量裂解液(6mon/L GuSCN,20mo…     

利用PrepFiler Express~(TM)提取石蜡包埋组织DNA 1例

正1材料及方法1.1样本组织蜡块一份,来自实验室检案。1.2 DNA提取用刀片切开蜡块,从中间取约两份大小为0.2cm×0.2cm的组织,分别采用Chelex-100法和Prep Filer Express BTATM法(Prep Filer Express BTA DNA提取试剂盒,Applied Biosystems,简称BTA法)提取样本DNA。     

擦拭直扩法和粘取磁珠法检测衣物脱落细胞DNA的比较

<正>法医检案中经常遇到对衣物接触DNA检验的要求,目前多为先用真空吸附或胶带粘取的方法富集衣物上的脱落细胞,然后用Chelex-100法、磁珠法或硅珠法提取DNA进行STR分型检测[1-5]。上述方法操作均较繁琐,且容易污染。本研究用生物检材采集与保存套管的尖头棉签擦拭穿过的衣物上的脱落细胞,然后剪取少量棉签头部,采用直接扩增法及用脱落细胞粘取器粘取后磁珠提取法获得脱落细胞DNA,并     

磁珠法在自动化核酸提取工作站中的应用

正在全国罪犯DNA数据库的建设过程中,需对大量人员样本进行检验,增加了检验人员的工作量。本实验将磁珠法与自动化核酸提取设备相结合以提高检验过程的准确性,减少因手工操作引起的失误,缩短检验时间,提高每次检验结果的可重复性及均一性。1材料与方法人员血样100份,为本实验室2009年上半年采集,载体为公安部物证鉴定中心生产的血样采集卡。     

手纸中混合斑的精子DNA提取方法探讨

混合斑的精子DNA提取是法医物证DNA分析中的一种重要技术,能否从中成功地提取有效的模板DNA,将最终决定能否将罪犯绳之以法。在实际检案中,当遇到手纸中的混合斑时,由于手纸遇水后纤维分解,形成糊状物质,导致混合斑与载体难以分离去除;有些手纸中含有漂染剂,对PCR扩增有抑制作用。为此,手纸中混合斑的精子DNA提取是一个广泛性的难题。笔者对通用的混合斑二步提取法进行改良,有效地解决了上述难题,并在实际检案应用中取得了满意的结果。1检材与方法1.1检材日常检案中涉及的含有混合斑的手纸30份。1.2方法1.2.1DNA提取1.2.1.1常规法(1…     

5 μl PCR反应体系的建立

PCR技术最大的优点是使目的DNA片段成百上千万倍增加,尤其适合于微量检材检验,该技术已成为常规法医物证检验技术。实际检案中,多余的PCR扩增产物没有用处,更是为了节约成本,我们微量化了ProfilerPlus试剂盒反应体系至５μl,报道如下,供参考。１材料与方法１．１材料送检案件滤纸提取血样１０份,混合斑检材为花短内裤１条,卫生纸２份,阴道擦拭纱布２份,地上提取精斑１份,镜下均检见人精子。所用试剂、仪器为：ProfilerPlus试剂盒;９６００型PCR仪;３１０型遗传分析仪。１．２方法（１）用Chelex１００法提取１０份血斑…     

磁珠法自动化纯化现场检材DNA方法研究

目的利用TE-MAGS在TECAN工作站上结合磁珠试剂盒,建立自动化工作站批量纯化现场检材DNA的方法,并探讨其在法医物证检案中的应用。方法灵敏度测试:标准品使用0.1ng/μL 9947A,用200μL TES稀释制备DNA总量0.1ng~1ng共10种的标准样品,采用本文方法提取纯化,使用IdentifilerTM试剂盒扩增,用3130XL型测序仪检测,Gene Mapper ID-X分析,分析STR图谱质量;纯化能力测试:在1ng总量的标准样品中加入腐殖酸、血红素,采用本文方法提取纯化、扩增检测,分析STR图谱质量;实际案件应用对比:收集304份现场检材,分别采用本方法和硅珠法进行提取纯化,经扩增检测,统计对比两种提取纯化方法 STR分型成功率。结果灵敏度测试:0.1ng~0.2ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可检测到部分基因座STR图谱,0.3ng~1ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可以得到完整的STR图谱;纯化能力测试:对混合有一定浓度的腐殖酸、血红素的标准样品的提取产物检测图谱未见明显抑制;实际案件应用对比测试:304份现场检材工作站磁珠法检出成功率(50%)高于硅珠法(40.8%)。结论本文所建立的方法缓冲范围较大,回收率高,纯化能力强,提取产物STR分型成功率高,适合现场检材批量化DNA检验。     

微量脱落细胞DNA检验方法的比较分析

结合日常检案,本文从实验室提取方法和检验时限两个方面对盗窃案件脱落细胞类生物学检材的DNA检出率进行了比较分析,提取方法使用Eppendorf epMotion 5075工作站结合DNA IQTM系统（以下简称5075结合磁珠法）和手工硅珠法,检验时限规定为案发至检验时间段.现将分析结果交流如下.