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Differex~(TM)系统在混合斑精子DNA分离提取中的应用 总被引:1,自引:1,他引:0
叶某,女,7岁。某日放学途中被诱骗奸杀,3日后发现其尸体,且已高度腐败。提取阴道内容物送检。阴道拭子浸出液沉淀经涂片,检见少量精子和阴道上皮细胞。用传统差异裂解法[1]分离提取混合斑精子DNA,扩增分型效果不佳(照片1)。本文作者应用D ifferexTM系统分离提取混合斑精子DNA,取得扩增分型的满意结果。现报道如下。1 D ifferexTM系统分离提取精子DNA1.1主要仪器与试剂D ifferexTM试剂盒(含消化缓冲液、分离液、无核酸酶水)、DNA IQTM纯化系统、PowerPlexTM16试剂盒为美国Promega公司产品;金牌酶、AB I3100遗传分析仪、9700PC… 相似文献
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目的 建立一种快速、简单、有效的混合斑DNA检验方法。方法 在100例检案中,利用wizard clean up直接对于精子消化液进行纯化浓缩。采用profiler plus试剂盒进行复合扩增,产物经ABI310基因分析仪检测。结果 从混合斑中成功获得精斑10个STR位点的DNA分型。结论 wizard clean up处理混合斑,能有效去除女性成份,得到精斑DNA进行分型。 相似文献
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泥土混合物检材在案件检验中经常遇到,去除泥土对DNA检验的影响,得到理想的检验结论是检验者关心的共同问题,作者成功对1例遗留在泥土中的精液混合斑进行DNA检验。我们设计了以下检验过程,对提取过程和纯化过程进行了简化,得到了理想的检验结论。1案例资料取含有精液混合斑的泥土适量检材两份,分别装入两个1.5ml的离心管中,编为1、2号,采用PK消化去除女性细胞后。1号管采用5%chelex-100结合PK、DTT提取DNA。2号管经有机法消化后采用酚氯仿提取DNA,在加入等体积氯仿混匀离心后,转移上层液至干净离心管中,进行纯化浓缩,得到纯化的DNA… 相似文献
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目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。 相似文献
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DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。 相似文献
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混合斑的精子DNA提取是法医物证DNA分析中的一种重要技术,能否从中成功地提取有效的模板DNA,将最终决定能否将罪犯绳之以法。在实际检案中,当遇到手纸中的混合斑时,由于手纸遇水后纤维分解,形成糊状物质,导致混合斑与载体难以分离去除;有些手纸中含有漂染剂,对PCR扩增有抑制作用。为此,手纸中混合斑的精子DNA提取是一个广泛性的难题。笔者对通用的混合斑二步提取法进行改良,有效地解决了上述难题,并在实际检案应用中取得了满意的结果。1检材与方法1.1检材日常检案中涉及的含有混合斑的手纸30份。1.2方法1.2.1DNA提取1.2.1.1常规法(1… 相似文献
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用Chelex100法及有机溶剂提取法联合提取DNA扩增STR基因座的比较研究 总被引:13,自引:4,他引:9
为了比较不同方法提取DNA扩增STR基因座的成功率 ,本文用Chelex10 0法及Chelex10 0法联合有机溶剂提取法分别提取性犯罪案件 6份血斑及 6份混合斑中精子DNA ,并用PE公司ProfilerPlus系统复合扩增 ,ABI 310型基因分型仪检测。结果表明 ,常规采用Chelex10 0法提取血斑及精斑等生物检材DNA作STR基因座检验失败或所检测的位点较少时 ,应对Chelex10 0法提取的DNA上清液再用有机溶剂提取法提取 ,可极大提高DNA检验成功率。采用本文建立的Chelex10 0法联合有机溶剂提取法 ,提高了PCR扩增阳性率 ,对实际检案很有帮助 ;在PCR扩增前应常规进行DNA定量检验 ,否则对于重要检材应进行梯度扩增。 相似文献
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目的在传统差异裂解法基础上,研究建立新的混合斑检材中精子分离技术。方法根据精细胞的结构特点,研制精子富集柱。取混合斑检材经第一步消化后的混合液,加入精子富集柱中离心,使DNA等小分子物质透过,而精细胞被特异性黏附和拦截在富集层中。采用本文技术和常规裂解方法对12份混合斑检材中精子进行分离,分离后精子DNA采用Identifiler试剂盒进行PCR扩增和电泳检测。结果混合斑检材经精子富集柱分离后均获得单一男性精子的STR分型结果,而12份检材用常规裂解方法分离,其中有6份检材女性成分去除不完全或未能检出精子STR基因型。结论本研究建立的精子富集柱分离技术适用于常见混合斑检材中精子的分离,特别适合对含有大量女性混合物而精子量较少检材的分离提取。 相似文献
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应用Differex~(TM)法提取混合斑中精子DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
对混合斑中精子的检验,采用传统的Chelex-100两步消化法存在消化时间长、离心洗涤次数不易控制等缺点,一旦操作不当,就会因此而引起DNA混合、损失,导致PCR反应失败。本文应用D ifferexTM系统法,解决了部分混合斑检材的精子DNA提取问题,在实际的案件鉴定中取得了满意的效果。1材料与方法1.1案件检材所用检材系案件鉴定中含有精子的现场提取床单上的混合斑、被害人的短裤、擦拭用的报纸、被害人的阴道及口腔拭子,以及在室温下存放约1年的阴道拭子。1.2 DNA提取方法1.2.1 Chelex-100两步消化法[1]取适量检材剪碎,加入适量TNE,37℃水浴… 相似文献
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1案例2006年7月北京市某区发生一起入室杀人案,死者为女性(21岁),经法医尸体检验,鉴定为外力致机械性窒息死亡。提取以下五种生物检材并进行检验,现场插线板所连接电线上潜在的人体脱落细胞、死者指甲末端、死者阴道棉球拭子、死者心血和犯罪嫌疑人静脉血。用去离子水湿润的无菌脱脂棉,反复擦拭插线板所连接电线,小体系Chelex法[1]提取电线擦拭物和指甲甲缘附着物的DNA,用两步分离法去除阴道棉球拭子女性成分后,显微镜检,仅检见一个精子,用酚-氯仿法[2]提取精子DNA。PCR扩增采用PowerPlex!16System试剂盒(Promega公司美国),并用ABI-3… 相似文献
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目的采用激光显微捕获技术(LCM)捕获尿液脱落细胞,并进行STR分型。方法收集10份健康成人尿液样本,根据储存时间分组,其中新鲜尿液组(≤24h)分别采用Chelex-100及LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,储存尿液组(〉24h)再分为4℃组和室温组,分别在4~30d内不同时间点采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA;各组提取的模板DNA进行扩增及SRT分型检验。结果新鲜尿液组采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,所有样本均可检出全部基因座(16个),采用Chelex-100法则在部分基因座上出现等位基因丢失、非特异性扩增、峰值低等现象;4℃储存10d和室温储存4d以内的尿液经检验可明确判读12个以上基因座,4℃20~30d及室温7d,可检出7个以上基因座。结论 LCM技术可用于尿液检材的DNA分型检验,且检材应尽可能4℃保存并尽快检验。 相似文献