狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病 犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ－ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１２弱毒株；从狂犬病毒（ＲＶ－ＥＲＡ）株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱毒，必要时还采用低温培养和物理浓缩法进一步提高病毒滴度。５株弱毒细胞培养物与保护剂按适当比例混匀，制成犬五联弱毒疫苗，给８周龄以上的血清抗体阴性犬每只注射２ｍｌ，在１５ｄ内产生针对犬六大疫病的坚强免疫力，免疫期不低于９个月；—２０℃保存期不低于２４个月，２～８℃保存不低于９个月，室温（１８～２２℃）保存不低于６０ｄ，各种弱毒的滴度无明显降低，保护率达１００％。给５０００多只幼犬分别于２月和３月龄时各注射１个剂量（２ｍｌ）五联苗，９个月内进行追踪观测未发现不良反应。５００余只免疫犬的血清学监测证明本联苗免疫力确实。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

反转录－聚合酶链反应检测牛食道－咽部分泌物中的口蹄疫病毒

应用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）。第１组６份Ｏ－Ｐ液，采自人工感染发病牛，ＰＣＲ检测结果都是阳性；查毒试验结果５／６阳性。其中１份样品的１０－１，１０－２，１０－３和１０－３．７稀释液的ＰＣＲ检测结果也都是阳性；同样稀释的样品接种细胞，每稀释度２瓶，１０－１～１０－３都是２／２出现ＦＭＤＶ所致的细胞病变（ＣＰＥ），１０－３．７１／２出现ＣＰＥ。第２组样品是从野外采集的水牛Ｏ－Ｐ液，共５２份。ＰＣＲ检测结果９份为阳性，另７份为可疑（弱阳性）；取接种了这７份Ｏ－Ｐ液的细胞培养液（无ＣＰＥ）再作ＰＣＲ检测，结果全部是阳性。５２份Ｏ－Ｐ液样品分别接种ＩＢ－ＲＳ－２细胞培养物，并盲传３代，均未观察到典型的ＣＰＥ。研究结果表明，建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法不仅可用于检测细胞培养物和动物组织，也适用于检测牛Ｏ－Ｐ液中的ＦＭＤＶ。该方法比目前常规的查毒试验显著的快速和灵敏     

禽霍乱双型原生质体融合株的筛选及其免疫原性研究

以抗链霉素、对卡那霉素敏感的禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９株（血清型为８Ａ）和抗卡那霉素、对链霉素敏感的Ｃ４８－１株（血清型为５Ａ）为亲本，在脱氧核糖核酸酶Ⅰ（ＤＮａｓｅⅠ）始终存在的条件下，以聚乙二醇（ＰＥＧ，分子量６０００）为助融剂，进行原生质体融合，然后在高渗琼脂平板上再生细胞壁，再转种于含卡那霉素和链霉素的双抗培养基上检出融合株。对筛选获得的２个融合株（简称为Ｆ２和Ｆ６）进一步研究表明，其在形态、染色特性、生化反应和毒力等方面均符合禽源多杀性巴氏杆菌的特性。通过血清型鉴定和双抗药性试验证明两亲本株菌细胞确已发生了原生质体融合和染色体重组，经反复继代培养证明融合株表型稳定。用Ｆ２制备的灭能苗免疫小白鼠，１４ｄ后攻毒，对两型标准强毒菌混合培养物１个ＭＬＤ保护率为１００％，１０个ＭＬＤ保护率为８０％。     

鸡马立克氏病单价活疫苗免疫效力比较试验

用农业部南京药械厂和三家外国动物保健品公司生产的４种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）冻干苗、实验室制备的ＣＶＩ９８８细胞结合苗和ＨＶＴ细胞结合苗等６种鸡马立克氏病（ＭＤ）单价活疫苗免疫１日龄ＳＰＦ白来航鸡，８日龄时用鸡马立克氏病强毒（ｖＭＤＶ）ＧＡ株攻击，同时以Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗作对照，进行免疫效力比较试验。结果表明，６种ＭＤ单价活疫苗均能使免疫鸡群获得对ｖＭＤＶ攻击的免疫保护力，免疫效力强弱顺序依次是ＣＶＩ９８８，ＨＶＴ细胞结合苗和ＨＶＴ冻干苗；国产ＨＶＴ冻干苗的免疫效力不低于三家外国公司生产的ＨＶＴ冻干苗；Ｚ４＋ＦＣ１２６双价苗的免疫效力显著高于各种ＭＤ单价苗     

Vero-2和MA-104细胞系染色体组型分析与致癌─致瘤性研究——在犬五联疫苗制备中替代BHK-21细胞系细胞株的筛选和检定

在用纯化３代的猫肾原代细胞（ＦＫＣ）和犬肾原代细胞（ＣＫＣ）皮下接种裸鼠无致癌致瘤性,以人类子宫颈癌细胞系（Ｈｅｌａ）超二倍体ＫＢ株、Ｘ株及超二倍体和亚四倍体ＮＭ２０／Ｘ株皮下接种裸鼠产生进行性恶性肿瘤比率分别为１０／１０,２５／２５和５／５的前提下,非洲绿猴肾细胞系亚二倍体（Ｖｅｒｏ２）ＪＣ株５～１９代和超二倍体ＹＡ株１２～１８代分别皮下接种２０和１０只裸鼠,均未产生肿瘤,恒河猴肾细胞系亚四倍体（ＭＡ１０４）ＪＣ株４代皮下接种５只裸鼠亦未产生肿瘤。不同株的Ｈｅｌａ和地鼠肾细胞系（ＢＨＫ２１）在３．３ｇ／Ｌ琼脂中均具有抛锚独立生长特性,并在终浓度３．１２５～２００ｍｇ／ｍＬ植物凝集素（ＰＨＡ）作用下出现凝集现象,而ＦＫＣ、ＣＫＣ及Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株、ＹＡ株既不具有抛锚独立生长特性,在不同浓度ＰＨＡ作用下也不发生凝集,符合非肿瘤源性细胞的特性。因此,Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株可用作病毒疫苗毒株的传代培养,而Ｖｅｒｏ２细胞系ＹＡ株和ＭＡ１０４细胞系ＪＣ株则不适宜。     

志贺样毒素与动物的大肠杆菌病

志贺样毒素与动物的大肠杆菌病高崧，张如宽（审校）（江苏农学院扬州２２５００９）人医中，除产肠毒素性大肠埃希氏菌（ＥＴＥＣ）外，肠致病性大肠杆菌（ＥＰＥＣ）的研究已相当深入（林万明１９９１）．ＥＰＥＣ中有一亚群可产生对Ｖｅｒｏ细胞有致死作用的细胞毒素，...     

分泌抗鸡病毒性关节炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用鸡病毒性关节炎病毒（ＲｅｏＶ）免疫８ＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ＿２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下融合，用ＥＬＩＳＡ法检测和筛选，以有限稀译法克隆３次，获得４株分泌抗ＲｅｏＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，在传代期间能稳定地分泌ＭｃＡｂ。用杂交瘤细胞注射ＥＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水，其ＥＬＩＳＡ抗体效阶达４０００～８０００，在－７０℃条件下保存半年，其抗体效价不变。特异性分析结果表明，该ＭｃＡｂ只特异地与ＲｅｏＶ发生反应，而不与ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＢＤＶ发生反应。     

犬细小病毒病原特性的研究概况

犬细小病毒病原特性的研究概况孔繁德陆承平（审校）（南京农业大学２１００９５）犬细小病毒（Ｃａｎｉｎｅｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ，ＣＰＶ）是引起犬急性出血性胃肠炎和幼犬急性心肌炎的重要病原，主要危害幼犬，特别是２～６月龄小大，发病急、死亡率高，给养犬业的发展...     

应用聚合酶链反应鉴别诊断马立克氏病病毒及免疫效果监测

应用３对引物建立了３套聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测体系。用该技术分别检测马立克氏病病毒（ＭＤＶ）１型、３型毒株，并能鉴别１型致癌性强毒株和非致癌性弱毒株；可从强毒感染发病鸡病变脏器和弱毒免疫的ＳＰＦ雏鸡不同时期采集的羽髓中检测到ＭＤＶ１型病毒的ＤＮＡ；可鉴别强毒发病鸡羽髓和弱毒免疫鸡羽髓。以羽髓为检测材料，应用上述ＰＣＲ技术可对ＭＤＶ１型弱毒疫苗免疫鸡群进行免疫效果监测。     

人工感染vMDV雏鸡IL-2活性和淋巴细胞增殖反应的变化

对１ 日龄ＡＡ 肉用雏鸡人工感染马立克氏病强毒（ｖ ＭＤＶ） 后,脾Ｔ 淋巴细胞ＩＬ２ 诱生活性和Ｔ 淋巴细胞增殖反应减弱（ Ｐ＞ ０ ．０５） 或显著减弱（ Ｐ＜ ０ ．０５） ;ＭＤ 平均发病率为３３ ．７５ ％ ,平均死亡率为１１ ．２５ ％     

麻雀体内传染性法氏囊病病毒的分离鉴定及理化特性研究

从传染性法氏囊病（ＩＢＤ）阳性麻雀体内分离到了一株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验和ＤＩＧ－标记ＩＢＤＶｃＤＮＡ探针斑点杂交试验证明该病毒为ＩＢＤＶ。病毒可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞，产生细胞病变效应（ＣＰＥ）。病毒血清型鉴定为Ⅰ型，病毒代谢抑制试验证明其基因组为ＲＮＡ，病毒核酸的电泳图谱呈两条特征带。病毒对乙醚不敏感，ｐＨ２．０不能灭活病毒，ｐＨ１２可使病毒失去感染性，５６℃作用３小时病毒仍有活性，７０℃１小时可灭活病毒。以上结果表明从麻雀体内分离到的ＩＢＤＶ理化性质比较稳定，与目前鸡场流行的ＩＢＤＶ极为相似，可能与鸡ＩＢＤＶ同源，提示麻雀可能在ＩＢＤ流行病学中起主要作用。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔接种和１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选出８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株、ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应。经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＧ２ａ；ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０￣３～１０￣５之间。     

磷酸钙介导马立克氏病病毒DNA转染鸡胚成纤维细胞

提取马立克氏病病毒（ＭＤＶ）Ｒｉｓｐｅｎｓｅ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）总ＤＮＡ，运用磷酸钙－ＤＮＡ沉淀转染ＣＥＦ，可以成功地得到ＭＤＶ的病变空斑。用每份沉淀含２０μｇ的ＭＤＶ和细胞总ＤＮＡ转染次代ＣＥＦ，其转染形成空斑的数量为４～２２１个，转染频率约为１０－６～１０－５；将磷酸钙－ＤＮＡ沉淀加入到ＣＥＦ中，于３７℃５％ＣＯ２培养箱中培养４ｈ后，室温下用１５％甘油休克２ｍｉｎ，由此可以提高转染频率约２０倍；转染后形成的ＭＤＶ空斑与原始感染病毒的空斑形态、生长速度一致。ＭＤＶＤＮＡ通过磷酸钙沉淀法以较高的频率转染ＣＥＦ，为研究ＭＤＶ基因组的调控、重组ＤＮＡ的表达及构建高效基因工程疫苗提供了可靠的技术手段     

口蹄疫病毒12S抗原免疫学性质的研究

用口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）Ａ型１２Ｓ基础免疫，Ｏ型１２Ｓ加强免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，筛迭，得到了一组群特异性单抗。用ＲＰＨＩ，ＡＧＤ，ＥＬＩＳＡ及阻断式和竞争式ＥＬＩＳＡ分析这组单抗得出以下结论：１２Ｓ抗原至少存在一个１２Ｓ独有的型间交叉的群特异性抗原表位，该表位是非中和性抗原表位，免疫原性较低；这组群特异性单抗可与ＦＭＤＶＯ，Ａ，Ｃ，Ａｓｉａ－１型１２Ｓ发生不同程度的反应，表明该表位存在于ＦＭＤＶＯ，Ａ，Ｃ，Ａｓｉａ－１型１２Ｓ上，但不同血清型的１２Ｓ表位构成存在细微的差别     

斑点免疫金染色检测雏鹅新型病毒性肠炎抗体研究

应用提纯的雏鹅病毒性肠炎病毒（ＮＧＶＥＶ）抗原制备抗原诊断膜，建立了ＩｇＧ的金颗粒标记、抗原抗体反应同步试验的斑点免疫金染色（ＤｏｔＩＧＳ）检测雏鹅新型病毒性肠炎（ＮＧＶＥ，暂定）抗体的方法，只需３０～４０ｍｉｎ即可判断结果；与本动物抗ＧＰＶ，ＤＰＶ，ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ，ＩＢＤＶ，ＥＤＳＶ及多杀性巴氏杆菌血清不发生交叉反应；对兔抗ＮＧＶＥＶ的ＩｇＧ的最低检出量为１．０×１０－１０ｇ／ｍＬ。雏鹅感染ＮＧＶＥＶ强毒后第３ｄ、成年鹅接种ＮＧＶＥＶＣＮ４０弱毒疫苗后第３ｄ即可检测到相应抗体。对重庆市和四川省１０个县（市）的６１７份成年鹅血清进行检测，结果ＮＧＶＥ的血清阳性率为３０．４４％～３６．８４％。该法适用于雏鹅感染的早期诊断、成年鹅的血清流行病学调查和疫苗免疫效果评价等。     

小熊猫接种犬瘟热疫苗后的抗体检

以犬用犬瘟热（ＣＤ）弱毒疫苗接种从产地新引入南京市玄武湖动物园的２只小熊猫（Ａ组），在接种后１１个月内每月采血１次，用微量中和试验检测其体内抗犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体效价。结果显示，小熊猫接种后１个月时抗体效价已达１∶１０００左右，２个月时效价最高，达１∶２０００左右，而后缓慢下降，至７和１１个月时分别约为１∶１００和１∶２０。同时检测了以前接种过同一疫苗的３只该动物园自己繁育的小熊猫（Ｂ组）和福州市动物园内的６只小熊猫（Ｃ组）的ＣＤＶ中和抗体效价，其效价变化类似于Ａ组。这些小熊猫在接种前均确认健康，在试验期间同样的饲养条件下未发生ＣＤ，提示犬用ＣＤ疫苗可用于小熊猫的ＣＤ预防，其产生的有效免疫力至少可持续６个月。     

猪流行性腹泻微量血清中和试验的建立和应用

用分离自广东某猪场并适应于传代细胞生长的猪流行性腹泻病毒Ｐ－ＥＤＶＧ＿Ｖ毒株作猪流行性腹泻（ＰＥＤ）微量血清中和试验。检测了五个猪场共１５２份血清，其中未发生过ＰＥＤ的一个猪场３５份血清，抗体滴度≤１：２；三个发生过ＰＥＤ的猪场７７份血清，抗体滴度在１：４～１．５１２；一个接种过ＰＥＤ油佐剂灭活疫苗的猪场４０份血清，抗体滴度在１：８～１：１０２４。猪传染性胃肠炎、伪狂犬病、猪瘟和轮状病毒阳性血清均不能中和ＰＥＤＶ，表明该方法具有准确、可靠、特异性好、操作简便的优点。     

猪流行性腹泻弱毒疫苗的研究

用从广州地区流行性腹泻病猪分离并适应到Ｖｅｒｏ等传代细胞的猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）Ｇ１强毒株，通过Ｖｅｒｏ、ｐＫ１５、ＳＴ细胞株的连续传代，证明第７２代毒已被致弱。用８３代毒（Ｐ８３）对吃初乳前的小猪以８～１０ｍｌ剂量口服连续传５代，每代都从接种猪小肠取样接种细胞进行培养鉴定，并于增殖后作为次代接种材料，结果５代毒均未引起小猪发病，证实该代次毒株的安全、稳定，达到了常规弱毒疫苗株要求的标准。用Ｐ８３制成弱毒疫苗，对２２头８～１０日龄小猪进行免疾效力试验，１４头口服免疫，８头颈肌注射免疫，剂量均为２ｍｌ／头。免疫后２１ｄ以最小发病量（即原毒液的１：１２稀释液）及原毒液的２倍、４倍和８倍的稀释液经口进行强毒攻击，对照组１２头也以相对剂量同时攻击。结果免疫组仅口服免疫、经大于最小强毒攻击量６倍剂量攻击组中１头（１／２）有一过性轻微腹泻，发病不到２４ｈ即恢复。对照组的１２头中有１０头典型发病，严重腹泻，并有寒颤等症状，病程长达３～６ｄ，７ｄ后腹泻症状消失，但体况明显削瘦。试验证明Ｐ８３制备的弱毒疫苗的总免疫效力达９４．６％，表明Ｐ８３已具备弱毒疫苗株的要求。     

鸡传染性法氏囊病病毒的提纯和鉴定

取鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）患鸡的法氏囊病料经氟利昂作用去除杂蛋白，并经甘油一酒石酸钾密度梯度离心进一步纯化；细胞适应毒在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）上出现明显细胞病变后冻融、ＰＥＧ沉淀纯化。电镜观察、吸光庆测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）的结果表明，得到了完整形态的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）。