重特大安全生产事故中的DNA检验1例

1案例资料1.1简要案情2008年9月8日,某公司尾矿库发生特大溃坝事故,造成277人遇难。时值夏末秋初,尸体在被掩埋数天至两个多月被挖出,呈高度腐败,有的仅为尸体块,事故处理需要对尸体及尸块进行身源识别。1.2检材提取对较新鲜的尸体提取心脏血液、血痕;腐败尸体或尸块提取深层肌肉组织;腐败严重者则提取骨骼(肋软骨、耳骨、鼻骨等方便、易保存的骨骼)。检材提取时注意采用各项措施避免交叉污染[1],检材分装并按规范保存。1.3 DNA检验方案重特大事故中,死亡人数较多,人员情况比较复杂,进行身源鉴定应针对不同特定情况采用不同方案,本案例主要采用的检验方法为:Identifiler复合扩增试剂盒通过对尸体和亲属15个常染色体基因座和AMEL基因座的检验,大多数尸体身源得到确认,或对尸块进行识别鉴定。Yfiler复合扩增试剂盒部分检材可根据需要,在常染色体基因座鉴定的基础上,利用Y染色体基因座具有的优势,通过对兄弟、爷孙、叔侄等父系遗传关系的认定确定身源。线粒体DNA(m tDNA)测序m tDNA呈母系遗传,部分检材可进行m tDNA测序检验,通过姐妹、兄妹等母系亲缘关系确认,并结合其他遗传标记的检测进行尸体身源确认...     

“东方之星”客轮翻沉事件中肋软骨的检测

<正>2015年6月1日晚,长江监利段"东方之星"客轮发生特大翻沉事件,遇难者达442人,受天气炎热、打捞工作复杂等影响,遇难者遗体腐败很快,心血、肌肉等常规检材已经无法提取到DNA,如何快速有效地进行DNA检验对客轮翻沉事件的尸源认定具有重要意义。肋软骨因其相对不易腐败、易于前处理等特点在腐败尸体DNA检验中成为首选生物检材[1]。笔者通过对肋软骨样品使用Global Filer誖系统经直接扩增     

亲子鉴定DNA检验结果分析1例

1案例资料 1.1简要案情 2011年6月15日,本市警方发现1具高度腐败无名男性尸体,为确定尸源,提取该无名尸体肋软骨、张某(嫌疑为其子)及母亲血样进行亲缘鉴定. 1.2 DNA检验 上述3份检材均采用Chelex-100法提取DNA.分别使用Sinofiler试剂盒、GoldenEye20A试剂盒和Y-filer试剂盒进行复合扩增,扩增产物用ABI-3130遗传分析仪进行电泳分析.     

指甲DNA的STR分型研究

目的 研究尸体所处环境、指甲DNA提取部位及提取方法对STR分型的影响。方法 对案件中不同条件腐败尸体指甲,使用不同部位、不同体系和时间消化,酚-氯仿法提取指甲核DNA,进行PCR扩增及STR分型。结果 提取指甲甲体、甲根部位均可获得STR分型。结论 指甲是法医检案中一类具有实用价值的检材。     

1例土埋2年半尸体的指甲DNA检验

在日常检案中，DNA检验人员通常根据尸体的腐败程度来决定提取那种检材以及采取何种方法得到足够的遗传信息。据高俊薇等报道。当检验腐败尸体的心血、肌肉等组织无法得到STR分型结果时，拔取其指甲进行STR分型往往能得到满意的效果。指甲检验成功率与保存环境有关．土埋1个月以上尸体的指甲DNA经有机法提取成功率不高。本例在处理一起土埋2年半、完全白骨化的尸体时，以指甲作为检验对象，分别以有机法、硅珠法和磁珠法对经Chelex-100提取后的模板DNA进行纯化浓缩。并对其效果进行比较。     

1例土埋2年半尸体的指甲DNA检验

在日常检案中,DNA检验人员通常根据尸体的腐败程度来决定提取那种检材以及采取何种方法得到足够的遗传信息。据高俊薇等[1]报道,当检验腐败尸体的心血、肌肉等组织无法得到STR分型结果时,拔取其指甲进行STR分型往往能得到满意的效果。指甲检验成功率与保存环境有关,土埋1个月以上尸体的指甲DNA经有机法提取成功率不高。本例在处理一起土埋2年半、完全白骨化的尸体时,以指甲作为检验对象,分别以有机法、硅珠法和磁珠法对经Chelex-100提取后的模板DNA进行纯化浓缩,并对其效果进行比较。一、样本来源2005年7月中旬,在距本市某内陆河入海…     

用于DNA提取的磁性纳米技术

众所周知,DNA提取技术是法医DNA检验的第一个步骤,也是最关键的步骤.可以说,能否成功进行DNA检验的前提就是能否从生物检材中获得高质量DNA.尤其对于腐败、变质、污染等各种条件下的现场生物检材,DNA的提取质量将直接关系到DNA检验的成败.就我国DNA提取技术发展现状来讲,主要存在以下两个问题:一是技术发展滞后.现在采用的DNA提取技术仍然停留在Chelex100法、有机提取法、硅珠法等常规方法,存在着提取DNA不纯,效率低、耗时,不能自动化,不能定量,扩增成功率较低等诸多缺点,因此直接影响DNA检验的整体流程和效能的发挥.     

骨骼脱钙后DNA含量损失问题初探

骨骼是一类特殊的生物检材,是一种致密的结缔组织,相对于人体其他的组织脏器腐败降解得更慢。对高度腐败及白骨化的尸体,骨骼是进行DNA检验的唯一检材,但由于骨骼的特殊组织结构及环境因素的影响,使骨骼DNA的提取较困难。因此,为使骨组织中DNA易于释放,在提取中往往采用单独EDTA脱钙的步骤,以去除羟基磷灰石中的钙元素[1-2]。     

用二步消化法提取指甲DNA

<正>在日常检案工作中，对腐败尸体的指甲进行DNA检验，扩增效果有时不稳定，特别是埋于泥土、弃于粪坑、污水等环境中的指甲检材，常需多次反复处理才能得到满意DNA检测结果。究其原因，可能与没有得到有效的DNA模板有关。作者采用“二步消化法”，可以去除表层降解DNA，减少PCR抑制物，从而可有效地提高了DNA模板质量，提高了指甲DNA的检验成功率。     

改良EVO150-8方法在DNA自动化检案中的应用

目的探讨改良EVO150-8方法在批量生物检材DNA检验中的应用价值,建立一种自动化、简单、快速的DNA提取方法。方法采用改良EVO150-8自动化核酸提取纯化仪器与DNA IQ磁珠法纯化试剂盒,对各现场提取的880份血迹、烟蒂、口香糖、精斑（混合斑）、组织、骨骼、脱落细胞等常见生物检材进行DNA提取与纯化,采用Identifiler试剂盒进行扩增检验,用3130XL电泳,GeneMapper ID V3.2分析软件进行分析比对。结果在880份生物检材中,有836份检材成功获得STR分型;检验92份检材仅需时128min。结论改良EVO150-8适合批量生物检材的自动化提取。     

用Chelex100法及有机溶剂提取法联合提取DNA扩增STR基因座的比较研究

为了比较不同方法提取DNA扩增STR基因座的成功率 ,本文用Chelex10 0法及Chelex10 0法联合有机溶剂提取法分别提取性犯罪案件 6份血斑及 6份混合斑中精子DNA ,并用PE公司ProfilerPlus系统复合扩增 ,ABI 310型基因分型仪检测。结果表明 ,常规采用Chelex10 0法提取血斑及精斑等生物检材DNA作STR基因座检验失败或所检测的位点较少时 ,应对Chelex10 0法提取的DNA上清液再用有机溶剂提取法提取 ,可极大提高DNA检验成功率。采用本文建立的Chelex10 0法联合有机溶剂提取法 ,提高了PCR扩增阳性率 ,对实际检案很有帮助 ;在PCR扩增前应常规进行DNA定量检验 ,否则对于重要检材应进行梯度扩增。     

改良直接扩增法应用于生物检材DNA检验

Identifiler（R） Plus试剂盒性能卓越,PCR反应液经过优化,抗抑制剂能力强,适用于案件生物检材DNA检验[1].本文利用纳米银溶液和生物物证提取棉签、植绒拭子对案件常见的血痕类、唾液斑和肋软骨等进行检材转移,采用Identifiler（R）Plus扩增系统配以Prep-n-Go Buffer进行直接扩增检验,以探讨直接扩增技术对此类检材的有效性和可靠性.     

男性样本Amel基因座Y片段引物结合区变异1例

1案例资料 1.1 简要案情 2011年11月23日在某地发现1具无名尸体,经解剖仅具有男性生理特征,现场有1处血迹.提取无名尸血样及现场血迹进行DNA分型检验. 1.2 DNA检验 采用Chelex-100法提取尸体及现场血迹样本DNA.采用ID试剂盒进行PCR复合扩增,扩增产物经3130遗传分析仪进行毛细管电泳,用GenemapperID v3.2软件分析各基因座的基因型.2份检材的分型结果一致,提示为同一人,但牙釉质蛋白基因座(amelogenin gene,Amel)分型显示为女性(图1).     

快速PCR扩增检验体系的建立及技术指标验证

目的建立PCR快速扩增程序和体系,并对其技术指标进行验证。方法运用快速扩增酶Fast Start与DNA TyperTM15 plus primer mix组合并优化建立快速扩增体系,对50份静脉血卡和35份案例检材提取的DNA进行扩增,并对体系检测结果的准确性、稳定性和检材适应性进行验证;采用不同稀释浓度的标准品9947,采用快速扩增方法进行检测,验证体系的灵敏度。结果模板DNA浓度达到0.50ng/μL,采用快速扩增体系可能获得准确分型;扩增耗时仅为69min,比常规扩增方法明显缩短;不同种类检材,经检测均获得良好分型图谱,同一份样本重复实验结果一致、稳定。结论本文建立的快速扩增体系可显著提升检测速率,其灵敏度、准确性、稳定性、检材适用性等技术性能,可满足实际检验的需求。     

磁珠直接吸附法对体态检材游离DNA的提取

目的采用磁珠直接吸附法对人体尿液、唾液、血液3种体态生物检材中的游离DNA进行提取检验,为法医物证中游离DNA的研究及检验工作提供参考。方法对3种生物检材采取离心吸取上清液的方法分离游离DNA,然后采用磁珠直接吸附法进行提取纯化,Identifiler-Plus试剂盒进行复合扩增后常规STR检测。结果在3种检材中均检出了游离DNA,其中血液中游离DNA检出率为100%,唾液为90%,尿液为70%。结论人体体态生物检材中存在游离DNA,同时磁珠直接吸附法可高效、快捷的提取生物检材中的游离DNA。     

MiniM48试剂盒在腐败尸体DNA检验中的应用

在法医学检案中,经常遇到腐败、微生物污染的检材,为DNA个体识别带来网难。本文应用MiniM48试剂盒纯化浓缩DNA,对腐败尸体检材进行STR分型,并比较检出效果,以期为相关法医学实践提供参考。     

一种牙齿DNA的提取方法

<正>在高度腐败及白骨化的未知名尸源鉴别中,牙齿检材因其自身的组织结构特性而往往优于骨骼检材,而成为DNA工作人员优先检验的样本。在牙齿检验中,手工提取及自动化提取方法在文献中均有报道~([1-2]),本文在参照牙齿传统手工DNA提取方法的基础上进行了改良,形成了一种既快速又适合所有DNA试验室的牙齿DNA提取方法。现介绍如下。     

PowerPlex~18D直扩法与磁珠法用于血斑检验的比较

<正>直接扩增法可以免去提取的繁琐步骤,采用商品化直扩试剂盒,省时省力,能有效降低成本,因而被广泛用于DNA数据库建设。笔者对本实验室1年内受理案件的血斑检材采用直接扩增(简称直扩法)和经过磁珠法提取后再进行扩增(简称磁珠法)两种方法检验,比较两种方法对血斑类检材的检验效果,以期为相关检验提供参考。     

运用CTAB与磁珠提取法检验1例焚烧骨骼

焚烧案件现场中肌肉组织往往难以留存,但是一般可能有骨骼存在。对残存骨骼进行DNA检验,确定尸体身源,进行个人识别对案件侦破具有重要价值。本案例中为一焚烧后骨骼,运用CTAB裂解、磁珠纯化、STR荧光复合扩增、ABI310测序仪检测,得到理想检验结果,报告如下:1案例资料2001年10月,山东省某市发生一起杀人焚尸案,焚尸现场经勘查仅提取到残存肱骨,在第一杀人现场提取到可疑血迹。要求进行DNA检验,确定焚烧尸体与现场血迹是否为同一人所留。对于骨骼检材,首先在紫外灯下照射1小时,用钻头钻取粉末,加入CTAB提取缓冲液裂解1,得到DNA提取…     

两种DNA提取法对不同色泽肋软骨STR分型成功率的比较

目的比较两种DNA提取法对不同色泽肋软骨的DNASTR分型结果的影响。方法利用Chelex-100法和酚-氯仿法,分别对30例不同色泽的腐败尸体肋软骨进行DNA提取,STR复合扩增,ABI3100型基因分析仪对扩增产物进行检测。结果用酚-氯仿法提取的30例腐败尸体肋软骨,均检测到全部STR基因座的等位基因型。用Chelex-100法提取的肋软骨中,22例(11例白色、8例淡黄色、3例黄色)检测出全部STR基因座的等位基因型;7例(3例黄色、4例黄褐色)检测出部分STR基因座的等位基因型;1例黑灰色的腐败尸体肋软骨,未检测出STR基因座的等位基因型。结论根据肋软骨的色泽,选择适宜的DNA提取方法。对于颜色较深的肋软骨,用酚-氯仿法进行DNA提取有助于提高其STR基因座的检出率。