猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——带毒细胞传代及其适应能力的观察

前报试验结果表明:猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,能大量释放病毒,收液含毒滴度的高低与种毒的质量和用量有密切关系,接入大量良好的种毒,毒价可稳定地达到20000～50000倍合格的要求,降低种毒质量和用量,毒价随之下降,毒价的起伏,似乎又说明猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,并未完全适应。为了了解病毒在牛肾细胞上的适应情况,提高病毒的适应能力,我们试图通过带毒细胞传代进行观察,同时探索带毒细胞培养及产毒能力。鉴于8305批等几批细胞经过长期离体培养和多次接毒、收毒,仍能正常繁殖,所以选用8305批细胞(以下简8305)进行了上述试验观察,其结果报告如下。     

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——猪瘟病毒在牛肾细胞上的培养及影响毒价因素的观察

用免疫荧光法对猪瘟兔化弱毒(以下简称兔毒)在牛肾细胞上繁殖释放过程的研究证明,兔毒虽然能够在牛肾细胞上繁殖释放,但接毒后96小时,感染细胞量仅50％,培养物中毒价甚低。为此,我们对猪瘟兔毒在牛肾细胞上的培养及提高其毒价和影响毒价的因素进行了探讨。     

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——以免疫荧光法对猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上繁殖释放过程观察

文献记载,猪瘟病毒的自然感染谱只限于猪属动物。在实验条件下能使不同家畜和实验动物感染,并能在多种动物细胞中繁殖,但在牛肾细胞上的繁殖、释放情况未见报告。设想如能用牛肾细胞培养猪瘟兔化弱毒(以下简称兔毒),并掌握其繁殖释放过程,对研究猪瘟牛肾细胞疫苗将具有重要     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞旋转培养制造冻干苗的试验

为了克服用仔猪肾细胞生产猪瘟弱毒潜在致病的危险性,弥补猪瘟兔化弱毒乳兔苗大量剖杀动物成本高,不易控制污染的缺点,1981年11月我们开始把初生犊牛肾细胞用于猪瘟兔化弱毒培养试验,结果证明,猪瘟兔化弱毒可以在犊牛肾细胞上连续增值,猪兔效力平行试验效果良好,但是细胞产毒不稳定。1982年11月我们又开展了初生犊宇睾丸细胞培养猪瘟弱毒的试验,通过2年研究,解决了影响毒价的关键问题。于1984年11月,转入中试验阶段。     

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——疫苗试制、检验、保存及区域试验

自1981年初开展猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究以来,先后完成了一系列基础实验。在1983年试制第1批牛肾细胞苗的基础上,又重复试生产6批苗,经效检,均合乎标准。现将疫苗试制、检验、保存及区域试验结果报告如后。材料与方法(一)种毒 系农业部成都药械厂提供的480代冻干毒和F505代兔脾毒(湿毒),经本室复壮,选择定型热兔脾脏作为种毒,要求毒价不低于2×10~(-5)ID/ml。也可选用5万倍合格的细胞毒做种毒,脾毒和细胞毒以新鲜者为佳。     

同一份组培细胞繁殖(复制)两种病毒的研究

用同一份仔猪肾组培细胞先繁殖猪瘟病毒(中国猪瘟兔化弱毒),再繁殖口蹄疫O型病毒,猪瘟组培细胞毒兔检可达5 ×10~4ID/1毫升。O型口蹄疫细胞毒鼠测毒价可高达≥10~(8·5)“MLD_50/0.1毫升。 被猪瘟病毒感染后的细胞不发生细胞病变(cpe),大量繁殖猪瘟病毒后的细胞(即3～5次收毒后的细胞),再感染口蹄疫O型病毒,细胞病变率几乎达100％。从而说明猪瘟病毒与口蹄疫O型病毒是可以先后在同一份细胞内复制的。     

CDV疫苗毒在Vero细胞内包涵体形成规律的研究

采用Vero细胞生产CDV(犬瘟热)弱毒疫苗是目前国内外生产CDV疫苗的主要方法。若提高CDV疫苗的效价,必须掌握细胞株的选择、培养方法、收毒时间、疫苗的保存及疫苗的使用时机。为了把好疫苗的培养及收毒时间关,我们进行了CDV疫苗毒在Vero细胞内生长规律的试验。CDV病毒可在细胞内产生包涵体,用G和HE染色后在普通显微镜下即可进行检查。本试验结果表明,CDV疫苗毒在Vero细胞中生长,从接毒后第3天     

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株复合实时荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立

根据GenBank中的猪瘟病毒强毒和弱毒株基因组序列设计了1对针对猪瘟病毒的通用引物和2条分别针对猪瘟病毒强毒和猪瘟兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan水解探针,建立了一种能区分猪瘟病毒强毒和兔化弱毒疫苗株的复合实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法能将我国大陆流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株完全区分开来,而不与其他猪源病毒发生非特异反应,分别可检测到初始模板中41.8和81.5个拷贝的病毒RNA,与已建立的复合RT-套式PCR的敏感性相近,两种方法对152份样品检测的符合率达96.9%~100%。通过对8份猪瘟兔化细胞疫苗效价的检测,证实本方法与兔体反应热测定法有一定的相关性,可用于猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗的定量和鉴别检测。     

卫可和泛福露益消毒剂抗猪瘟病毒试验

卫可 (Ｖｉｒｋｏｎ’ｓ)和泛福露益 (Ｆａｒｍｆｌｕｉｄ’ｓ)是英国生产的 2种兽用消毒剂 ,本试验仅在实验室条件下检测了其对猪瘟病毒的杀灭效果。1　试验材料1 .1　消毒剂卫可和泛福露益为Ａｎｔｅｃ产品 ,均由中国台湾省府泉实业有限公司提供。本试验按产品使用说明操作。1 .2　猪瘟兔化弱毒用农业部兰州生物药厂生产的猪瘟弱毒疫苗毒(Ｃ株 ) ,2 0倍稀释后用于本试验。1 .3　试验动物体重 2～ 3ｋｇ的健康兔 ,由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物场提供。1 .4　传代细胞和试剂ＰＫ 1 5细胞购自中国兽药监察所。培养细胞的营养液为…     

应用单克隆抗体ELISA抑制法检测细胞培养中的猪瘟兔化弱毒

应用2种针对不同抗原决定簇的抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体建立了检测细胞培养中猪瘟兔化弱毒的ELISA抑制试验。对20份不同批次的猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞培养物的测定结果表明,该法可较准确地反映病毒在细胞培养中的产量;将病毒培养物置4℃、25℃和37℃3天、超声裂解、冻融3次和6次等不同方法处理对试验结果无显著影响(P>0.05);通过与兔体接种试验比较,探讨分析了猪瘟兔化弱毒疫苗生产工艺中的问题。     

猪瘟弱毒与鸡新城疫(Ⅰ系)弱毒在同一份猪肾细胞的相互激化作用

从用同一份组培细胞繁殖两种病毒的研究获得结果后,我们又对繁殖过猪瘟弱毒的原代仔猪肾细胞再繁殖鸡新城疫Ⅰ系弱毒进行了研究。我们设想:是否可以在生产猪瘟弱毒疫苗多次收毒后的组培细胞上再生产NDV疫苗。NDV有无促进被猪瘟弱毒感染后的猪肾细     

猪瘟病毒石门株与兔化弱毒疫苗株之间抗原差异的单克隆抗体分析

采用间接免疫荧光方法,用19株抗猪瘟病毒单克隆抗体对猪瘟病毒石门株与疫苗株(兔化弱毒株)的抗原性进行分析.结果显示,9株抗猪瘟病毒E2蛋白的单抗中有4株与2株病毒均反应,但反应程度略有差别;9株抗猪瘟病毒Erns蛋白的单抗中只有3株与2株病毒都反应,其他6株在识别石门株与兔化弱毒株之间存在差别;抗猪瘟病毒NS2/3蛋白的单抗只识别弱毒株.表明,抗猪瘟病毒单抗可用于猪瘟病毒石门株与兔化弱毒疫苗株抗原性差异的分析.     

新生仔猪接种猪瘟兔化弱毒疫苗抗体效价的测定

我们对新生仔猪在吮吸母猪初乳之前、后,给予接种猪瘟兔化弱毒疫苗,待60日龄后测定其抗猪瘟中和抗体效价,以观察母源抗体对仔猪免疫的干扰。 (一)材料和方法 1.试验猪:选自本省渭源县莲峰乡农户饲养的健康杂种母猪7头于分娩前一个月免疫注射猪瘟兔化弱毒疫苗(每猪1头份量)。然后,将其所产仔猪共65头供试验用。随机分为7个组, (1)哺乳前免疫组(简称A组):给刚出生的仔猪颈部肌肉注射猪瘟兔化弱毒疫苗。产     

安康地区常温使用猪瘟细胞疫苗免疫效果观察

猪瘟兔化弱毒是猪瘟强毒的变异株,不耐热,在高温环境极易灭活,因而应用猪瘟兔化弱毒制备的冻干疫苗,必须在低温条件下保存使用。但是大规模的猪瘟预防接种,都是在常温环境进行,尤其在高温季节常温     

猪瘟免疫抗体监测报告

为证实猪瘟疫苗免疫后实有抗体,将猪瘟兔化弱毒乳兔苗(下称乳兔苗)及猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗(下称细胞苗),用中和试验(SN)及猪瘟间接血凝试验(IHA)监测,结果报告如下。(一)材料与方法1.用农业部成都药械厂(下称本厂)生产的乳兔苗,在母猪空怀时以4头剂(600个免疫量)免疫,其所产亲代仔猪,于50～60日龄时,再以细胞苗750个对兔感染量(即部颁规程1头剂)免疫接种,俟免疫持续期至6～10个月,取血清作SN及IHA测定。     

猪瘟中和试验方法研究

作者自1980～1986年间,对猪瘟兔体中和试验方法进行研究,结果显示了一可定性,二可定量;并同步探索出中和价与抗猪瘟强毒成正相关平行线的滴度,为猪瘟免疫防制监测提供了依据。 材料与方法 (一)中和试验用种毒系农牧渔业部成都药械厂生产的猪瘟兔化弱毒淋脾冻干毒(F488、F495代,毒价达2×10~(-4))存-15℃冰箱备用。 (二)攻强毒猪用种毒系农牧渔业部成都药械厂生产用的猪瘟石门系强毒,脱纤冰冻保     

新型猪瘟疫苗的研究和应用前景

猪瘟 (ｓｌａｓｓｉｃａｌｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒ,ＣＳＦ)以出血和发热为主要特征 ,呈急性或慢性经过 ,是一种对猪危害性极大的传染病[1] ,被国际兽疫局 (ＯｆｆｉｃｅｏｆＩｎｔｅｒｎａ ｔｉｏｎａｌｄｅｓＥ’ｐｉｚｏｏｔｉｅｓ,ＯＩＥ)列为Ａ类动物传染病。在世界许多国家和地区 ,传统疫苗接种是控制猪瘟的重要手段。目前使用的弱毒疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本ＧＰＥ疫苗和法国的Ｔｈｉｒｅｖａｌ疫苗[2 ] 。我国的猪瘟兔化弱毒疫苗性能稳定、安全、免疫效果好 ,且无残留能力 ,是国际公认的唯一安全有效的弱毒疫苗 ,亦是国内…     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗保护剂的研究

自1988年我厂对冻干疫苗保护剂和冻干产品生产工艺进行了研究。以猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗为主进行了保护剂的筛选试验,找出一种保护剂配制方法、冻干曲线和时间及营养血清的配制等新工艺。用这种方法生产的猪瘟细胞的毒冻干苗在37℃环境中可保存10天,在22～25℃条件下可保存35天,0～4℃条件下可保护22个月,达到了国外同类苗的水平。     

猪传染性水泡病细胞弱毒疫苗试制试用

猪传染性水泡病在我国流行至今没能彻底控制。根据农林部提出用组织培养法生产疫苗的科研任务,我们在学习推广上海龙华四系鼠化弱毒疫苗的基础上,1974年底开展用国外引进的IB-RS-2猪肾传代细胞制取龙华毒细胞弱毒苗的研究。两年来,通过一系列试验,在北京郊区试用,1975年和甘肃省兽药厂协作,在大生产条件下,取得用大转瓶旋转培养试制     

猪瘟兔化弱毒犊睾细胞苗与乳兔苗相关平行免疫剂量的研究

用猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗750～1000个免疫量与乳兔苗4头剂(600个免疫量)进行免疫的猪只,接种后10个月攻猪瘟石门系强毒1ml均获得100％保护,试验表明两者是相关平行的。且在什邡全县19个乡使用9个批号猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗1000个免疫量,免疫558487头猪,观察6～13个月肥育出栏,没有1头发生猪瘟。随机抽取免疫猪血清作IHA与SN,其抗体水平均达抵抗猪瘟强毒的滴度以上。