HLA—A基因座分步PCR—SSP分型研究

目的使HLA基因分型能应用于法医常见检材的个人识别。方法 建立检测HLA—A基因座的分步PCR—SSP方法。先用一对HLA—A基因座特异的引物作第一次扩增,以所得产物为模板,分别用对HLA—A30、A31、A33特异的3对引物作第二次扩增,二次扩增的产物经电泳判型。结果 1130例血清分型为HLA—A30、A31、A33的血痕,其PCR—SSP分型和血清分型的不符合率为29％;室温保存2年的精斑、唾液斑,保存18年的血痕第一次扩增均获得满意的结果。结论法医亲子鉴定和个人识别宜用基因分型替代血清分型。HLA—A基因座分步PCR—SSP基因分型适用于法医检材。     

多聚酶链反应(PCR)在法医生物学检材鉴定中的应用

法医物证学的鉴定客体主要是生物学检材，其形式是多种多样的：如在各种载体k的血痕，精液与阴道液的混合斑，毛发，骨组织，被害人指甲缝中残留的组织成份等．对这些检材进行检验的中要目的就是根据检验结果确定该生物学检材是谁所留．以往所采用的检验方法主要包括红细胞血型和蛋白质遗传标记分型等检测方法．现在我们可以在DNA水’【‘对有关生物学检材进行遗传多态性的检验，因为每一个个体（除非同卵双生）从遗传学上来看都是独一无二的，在DNA水平对生物学检材进行遗传标记的分型检测，可望达到接近个体绝对认定的结果．目前有两种…     

血痕载体对ABO血型检验的影响

在一些刑事案件中,由于受到案发现场与当时环境所限,有时还缺乏对血痕规范化提取的认识和把握,从而致使现场提取的血痕所用载体种类各异,不仅给检验过程带来了诸多不必要的麻烦,而且对检验结果的判定也会造成不同程度的影响。本文就检案过程中经常遇到的检材载体作一初步对比分析。1　检　材随机抽取既往办案过程中保留存放下来的检材138份:其中医用纱布为载体的检材77份;化纤类为载体的检材2 7份;脱脂棉为载体的检材16份;卫生纸为载体的检材18份。2　试剂及方法血清采用公安部物证鉴定中心制备的标准抗A、抗B、抗H血清。指示红细胞采用新…     

鸡血清异种凝集素的应用研究

通过实验研究，证明家养鸡血清小含有“抗Ａ”、“抗Ｂ”及“抗Ｈ”三种异种凝集素。鸡血清中“Ｈ”凝集素能应用于体液班（唾液斑、精燃）Ｈ物质的检测。我们已在教学及检案实践小使用，效果良好。     

D20S161和D8S384两个基因座在法医学中的应用

评估D2 0S16 1和D8S384两个基因座在法医学中的应用价值。用自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒 ,对人血、人精液、人唾液、动物血、人血与动物血的混合检材和人血痕、人精液斑、人唾液斑、动物血痕、人血与动物血的混合斑痕检材 ,以及陈旧血痕检材进行检测分型 ,并用这两个基因座PCR引物序列与DNA数据库进行联网对比分析。自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血、人精液、人唾液、人血与动物血的混合检材分型 ,而动物血没有PCR产物 ;自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血痕、人精斑、人唾液斑和人血与动物血的混合斑痕检材正确分型 ,而动物血痕没有PCR产物 ;斑痕检材分型结果与对应体液检材分型结果无差异 ;5 0份陈旧血痕检材全部获得阳性分型结果。DNA数据库联网比较提示 ,D2 0S16 1和D8S384基因座引物除了能与各自的模板序列发生特异性扩增外 ,理论上不能与DNA数据库中 6 0 6 36 4种已知序列产生PCR产物。D2 0S16 1和D8S384两个基因座具有高度的种属特异性 ,抗污染能力强 ,不易受降解的影响 ,是解决法医现场生物检材个人识别和亲子鉴定的理想手段     

张家口地区汉族人群G2m(23)因子频率调查及血痕G2m(23)检出时限

1993年以来，时有G2m（23）因子在中国不同人群中分布的报道。本文验测张家口地K600名汉族无关健康人血清及室温保存1～16年的94份人血痕的G2m（23）因子，旨在了解本地区议人群体G2m（23）分布规律及血痕中G2m（23）因子的检出时限。材料与方法600份血清样大来自本市血站，均系无血缘关系且健康的汉族男女。血样置4℃冰箱保存，12小时内检测。94份血痕样本为室温保存1～16年的受检案件剩余检材，检测前用PI3S－T浸泡，4C冰箱过夜。用酶标单克隆抗GZm（23）抗体（由公安部物证鉴定中心血清室提供）．技文献方法对上述样本进行检测。结…     

玻片法快速鉴定微量血痕种属的应用分析

采用杨军意报道方法[1]，笔者检测了1993年至1995年24例实际案件共75件血痕检材，获得满意的效果。现将应用情况作一回顾分析。案例应用1．案件性质24例实际破案，凶杀16例，抢劫2例，伤害2例，交通肇事4例。共提取可疑血痕检材75件。2．载体条件水泥墙上ZO件，石灰墙上10件，铁器上15件，木质上8件，衣服上Ic件，玻璃上2件，纸张上3件，橡胶上2件，皮革塑料上5件。3．血痕时间最短1天，最长1年，一般3天至2周。4．检村提取能直接提取的直接提取，不能直接提取的转移到脱脂纱线上。5．检验及结果按杨氏‘’文中介绍方法，配成聚乙二醇一抗…     

直接扩增法在血痕、肋软骨和唾液检材中的应用

目的采用Identifiler Direct PCR试剂盒直接扩增法进行棉签擦拭血痕、肋软骨和烟蒂唾液斑DNA分型检验,并评价其应用价值。方法收集棉签擦拭血痕、烟蒂各20份,肋软骨10份,采用Identifiler Direct PCR试剂盒进行直接扩增及分型检验,以相同检材采用磁珠法/Chelex-100法提取模板DNA后扩增检验结果作为对照,对两组所得结果进行比较分析。结果棉签擦拭血痕和肋软骨一次检测完整分型率均为100%,分型结果与对照组一致;烟蒂上唾液斑有2份检材第一次未能完整分型,调整方法再次检验后获分型成功。结论实际检案中的棉签血痕、肋软骨和烟上唾液斑,采用直接扩增法检测,方法简单、快速、稳定、检材用量小,可在实际检案中选择使用。     

北京汉族群体线粒体DNA高变区的多样性

应用ＰＣＲ产物直接测序法研究北京汉族 10 0名无关个体线粒体ＤＮＡ序列特征 ,并对其进行统计学分析 ,现报道如下。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　样本　无关个体血液样本 10 0份 ,取自本实验室日常办案的检材。1 1 2　引物　对ＨＶⅠ、ＨＶⅡ及其周围区域 ,根据Ａｎｄｅｒｓｏｎ[1] 序列 ,并参考文献 [2 ]自行设计引物。引物序列 (由ＧＩＢＩＣＯＬ公司合成 )为 :ｍｔ 1Ｈ5′ ＧＡＡＴＣＧＧＡＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＴＡＡＧ 3′Ｌ 5′ ＴＡＧＣＧＧＴＴＡＴＴＡＴＡＧＧＧＴ 3′ ;ｍｔ 0Ｈ5′ ＣＡＴＧＧＧＧＡＡＧＣＡＧＡＴＴＴＧ 3′…     

线粒体DNA的PCR-RFLP分型法医学应用研究

目的建立PCR RFLP技术检测mtDNA序列多态性的方法,调查武汉汉族人群mtDNAHVⅠ区段限制性片段长度多态性,并对PCR RFLP技术在毛干、指甲等生物检材的个体识别案件中的应用进行评估。方法应用nest PCR技术和RFLP技术建立检测mtDNAHVⅠ区段限制性片段长度多态性的方法,调查150例武汉汉族人群无关个体,同时对实际案件中的毛干、陈旧骨骼、水浸血痕等不同种类、不同保存时间和条件的生物检材进行检测。结果RsaⅠ酶切检出4种表型,频率分别为0.760、0.167、0.066和0.007,遗传差异度(GD值)为0.393,随机匹配概率(P值)为0.607。应用PCR RFLP对毛干、20年陈旧骨骼、水浸血痕进行了检测以及在个体识别及母子关系亲子鉴定案例中应用。结论用PCR RFLP法检测mtDNA序列多态性在法医物证检验中具有应用价值。     

应用免疫酶组化法测定混合斑中精子ABO型

应用免疫酶组化法测定混合斑中精子ＡＢＯ型李荣华，吴梅筠华西医科大学法医血清学教研室（６１００４１）精液与阴道液混合斑的检验，一直是强奸案件中的棘手问题之一。传统的中和试验由于不能排除阴道分泌物中ＡＢＨ物质对精液ＡＢＯ血型测定结果的干扰，个人识别能力有...     

一种改良Chelex地方法提取血痕DNA

对于新鲜或量足的血痕,采用文献报道的Chelex-100直接处理提取DNA,一般都能获得满意结果,但在日常检案过程中,陈旧而量少的血痕检材经常遇到,而且载体可能有泥沙、色素或吸附力强等PCR扩增抑制物的存在.这类检材DNA采用普通的Chelex-100快速提取法,有时很难奏效.针对以上问题,本文结合两例检案,对血痕DNA的Chelex-100快速提取法进行了一些改良,显著提高了检出率,使检案成功,报告如下:1 材料与方法1.1 材料:取自本实验室检验的两案例中的22份血痕.     

用X-Y同源引物扩增鉴定人血痕性别的研究及应用

本文根据牙釉蛋白(Amelogenin)基因在x染色体第一内含子有6bp缺失的特性,用一对x-y同源引物.扩增x-y染色体特性DNA片段分别为106及112bp,并用PAGE电泳银染显带的方法检测扩增产物.本方法灵敏度高,实用性强.可对2mm~2血痕检材提取的DNA液1/10作出性别判定.对现场提取的生物检材.特别是微量、腐败、陈旧检材,均能较好的作出性别鉴定.室温放置16年的血痕也可检验.实际检案显示本方法简便、有效、无毒,易于推广.     

法医学难检样品的处理及检测方法研究

在法医物证检验中常常会遇到一些量微而保存条件差的检材,这类检材的成功分析对案件的调查和侦破常起着至关重要的作用,其关键在于能否正确提取和处理检材、并采用适当的分析方法进行检测.笔者结合多年的物证检验经验和研究,综述了常见的牙齿、烟头、毛发、微量血痕等检材的有效处理方法.     

应用免疫斑点法检验微量陈旧血痕种属的实验

检验血痕种属的方法很多。从古老的沉淀环到目前所应用的ELISA法、主要适用于比较新鲜的血痕，而对陈旧血痕及其它受物理因素影响的血痕效果不佳。本文提出一种用1／氨水液提取血痕，ELISA法检验种属的较佳方法。经反复试验，以肉眼观察颜色变化判断结果，可以测得长达33年陈旧血痕，而各种动物实验对照无非特异性反应，给种属检验提供一个新的途径。材料和方法l．试剂l％低脂奶粉；兔抗人IgG酶标抗体（北京生物制品所）PHg．6的CBS和PH74的TBS缓冲液；1％氟水溶液；O．85％生理盐水；国产硝酸纤维素膜（NC）。2．检材室温保存11…     

HLA 及其在法医学上的应用

HLA 是迄今人类最复杂的遗传多态性系统,其在法医学上的应用,包括亲子鉴定和个人识别的重要性日益被认识。作者等对血痕、血清和唾液的 HLA 测定的研究结果证明:(1)血痕中存在较强的抗补体作用。应用淋巴细胞毒抑制试验测定血痕的 HLA 时,增加补体用量可使测定的正确率达100%,经90天的血痕仍能完全正确检出 HLA 型。(2)血清的 HLA 测定是可行的,这对远道送检血清及尸体血清测定 HLA 有一定价值。(3)唾液中有可溶性 HLA 抗原存在。     

ABO基因分型与多重STR联合检测在法医学中的应用

目的建立ABO基因型和Goldeneye16A试剂盒联合检测的方法,并评价其在法医学实践中的应用价值。方法将6种ABO基因型(A/A,A/O,B/B,B/O,A/B,O/O)的序列特异性引物(PCR-SSP)检测方法与Goldeneye16A试剂盒相整合进行同步分型。通过对460份男性个体血痕样本、9947A DNA及90份案件样本进行检测,考察方法的一致性、灵敏度及对法庭科学检材的适用性。结果应用本文方法可同时检出6种ABO基因型和15个常染色体STR基因座及性别决定基因座,检测灵敏度为125pg,其中ABO基因检测灵敏度达63pg。460份男性血痕和90份案件检材证实该联合分型方法用于各类检材结果准确、稳定。结论本文ABO基因分型与多重STR联合检测方法,适用于各类含有核细胞的生物检材,在法庭科学DNA鉴定中有较好的应用前景。     

琼脂单向免疫扩散法在洗涤剂污染血痕检材中的应用

在血痕种属检验中,通常采用较为灵敏和快速的环状沉锭法。当遇有被肥皂、洗衣粉等污染的血痕检材时则往往得不到正确结果。我们采用琼脂单向免疫扩散法对常见洗涤剂污染的血痕检材进行实验,取得了满意的结果。 1 器材与试剂 (1)人血样品(医院血库提供)。 (2)抗人血红蛋白血清(华西医科大学法医系提供,效价:1∶10000)。 (3)琼脂糖,1.5％和5％的肥皂液,1.5％和5％伪洗衣粉液,1.5％和5％的餐具洗洁精液(以上液体均用自来水配制而成)。 (4)加热磁性搅拌器、冰箱、培养皿。 2 方法     

ABO血型的基因型与法医学应用

ＡＢＯ血型系统是 1 90 1年由Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ首先发现的第一个人类遗传标记。由于ＡＢＯ血型抗原不仅存在于组织细胞 ,也存在于体液中 ,抗原相对稳定 ,保存较持久 ,分型已标准化 ,群体资料丰富 ,故在法医学上一直有着重要的地位。传统的ＡＢＯ分型采用血清学方法 ,但其抗原属糖蛋白易失活 ,自然界中广泛存在类似的物质 ,都会影响检验效果。因ＤＮＡ特殊结构 ,使得稳定性比蛋白更高 ,是携带遗传信息的物质 ,因此 ,从ＤＮＡ水平对ＡＢＯ基因进行分型更能准确地反映个体的差异 ,尤其是ＰＣＲ技术对微量检材的检验 ,ＡＢＯ血型系统的分…     

硅珠法提取骨组织DNA

骨骼是硬组织 ,抗腐蚀性好 ,当其它软组织完全腐败后 ,骨组织在鉴定中可发挥重要作用。但由于骨组织中细胞含量少[1] ,加上环境因素的影响 ,使陈旧骨骼的ＤＮＡ提取成为鉴定工作的难点[2 ] 。本文研究了骨组织ＤＮＡ的硅珠提取法 ,并将其运用于法医物证检验。1　材料与方法1 1　样本收集75例骨骼样本来自本实验室受理的刑事案件检材 (检材保存时间最久为 14年 )。1 2　试剂脱钙液 :0 2ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ溶液 10 0ｍｌＥＤＴＡ Ｎａ2 10 ｇ ,ｐＨ 7 0 [3] 。裂解液 :12 ｇ ＧｕＳＣＮ + 10ｍｌ0 1ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌｐＨ 6 4 + 2 2…