硅珠法提取PCR模板DNA

本文介绍一种提取ＰＣＲ模板ＤＮＡ的方法 ,基本上可以克服以上缺点。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　样品　所有样品均来自日常受理的案件。1 1 2　主要试剂　二氧化硅 (Ｓｉｌｉｃａ ,ＳＩＧＭＡ) ;硫氰酸胍 (ＧｕＳＣＮ ,ＰＲＯＭＥＧＡ) ;十二烷基肌氨酸钠 (ＳＩＧ ＭＡ)。1 1 3　主要仪器　高速台式离心机 (ＳＩＧＭＡ1 13) ;ＰＥ2 4 0 0扩增仪。1 2　方法1 2 1　试剂的配制　 (1)吸附液 :12 ｇＧｕＳＣＮ溶于10ｍｌ 0 1ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌ (ｐＨ6 4 ) ,加入 0 8ｍｌ0 5ｍｏｌ/ＬＥＤＴＡ和 0 5ｍｌＴｒｉｔｏｍＸ 10 0 ;(2…     

荧光标记复合扩增对中国汉族群体8个STR基因座的多态性

应用ＳＴＲ复合扩增技术对ＦＢＩ推荐的 8个ＳＴＲ基因座 ,即Ｄ5Ｓ818,Ｄ13Ｓ317,Ｄ7Ｓ82 0 ,Ｄ16Ｓ539,ｖＷＡ ,ＴＨ0 1,ＴＰＯＸ ,ＣＳＦ1ＰＯ ,进行荧光复合扩增 ,其产物经ＡＢＩ377ＸＬ序列分析仪检测 ,对 110名中国汉人无关个体进行频率调查 ,为大规模ＤＮＡ数据库的建立提供有益探索。1　材料和方法1 1　实验材料无关个体血样来自本室日常检案积累 ;扩增及检测试剂购自美国ＰＲＯＭＥＧＡ公司 ;ＡＢＩ377ＸＬ序列分析仪。1 2　实验方法〔1、2〕　1 2 1　ＤＮＡ模板的制备　 5%ｃｈｅｌｅｘ10 0 (Ｂｉｏ ｒａｄ)2 0 0ｍｌ处理 ,56℃孵…     

贵州汉族人群6个STR基因座的多态性

参照美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司的方法 ,应用ＳＴＲ复合扩增技术对 6个ＳＴＲ基因座 ,即ＣＳＦ1ＰＯ、ＴＰＯＸ、ＴＨ0 1、Ｄ7Ｓ82 0、Ｄ16Ｓ5 39、Ｄ13Ｓ317的基因频率分布进行调查 ,以获得贵州汉族人群的多态性资料 ,为实际检案提供参考数据。对贵州 (地区 ) 10 8份汉族无关个体的血样 ,用Ｃｈｅｌｅｘ 10 0法提取ＤＮＡ ,按Ｐｒｏｍｅｇａ公司试剂盒操作手册进行上述6个基因座的复合扩增。经ＤＮＡ分型和统计学分析 ,10 8份检材 6个基因座的累计个人识别率为 :0 99999887。所有基因座经 χ2检验 ,符合Ｈａｒｄｙ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡。本…     

福建汉族群体3个VNTR基因座的多态性及其在亲子鉴定中的应用

为了获得福建汉族群体Ｄ2Ｓ4 4、Ｄ10Ｓ2 8、Ｄ4Ｓ16 3三个ＶＮＴＲ基因座的遗传信息 ,提高亲子鉴定的准确性 ,本文作者应用ＲＦＬＰ技术 ,Ｌｉｆｅｃｏｄｅｓ公司提供的试剂 ,首次对福建省上述 3个基因座的多态性进行调查和用此基因座检测的亲子鉴定案进行分析 ,现报告如下。1　材料及方法1 1　样本来源10 3份样本来源于世代居住在福建省区域的汉族健康无关成年个体 ;15例亲子鉴定案例为本站近年检测。每份样本均采血 1ｍｌ,用ＥＤＴＡ抗凝 ,由本站保存于超低温冰箱 (- 80℃ )中。1 2　方法1 2 1　提取样本中ＤＮＡ　取ＥＤＴＡ抗凝血样 5…     

D2S1338和D19S433基因座的多态性及其法医学应用

为了寻找在法医学上更有应用价值 ,且适用于国内外实验室交流的ＳＴＲ标记系统 ,本文作者应用ＰＣＲ复合扩增和四色荧光技术对Ｄ2Ｓ1338和Ｄ19Ｓ4 33基因座进行了研究 ,并初步将其运用于法医学检验。现将结果报道如下。1　材料与方法1 1　样本收集 160名华东地区汉族无关个体血样 ,制成血斑纱布 ,用于频率调查 ;5 0个两代家系血样 ,用于家系调查 ;及本室近期收检的 90例亲子鉴定和 7例个体识别案生物学检材 ,用于案例检验。1 2　方法用Ｃｈｅｌｅｘ法提取血样ＤＮＡ ,扩增用ＰＥＡｍＰＦ1ＳＴＲＳＧＭＰｌｕｓ试剂盒 (方法见说明书 )。ＰＣ…     

云南彝族、瑶族、壮族及回族群体3个STR基因座的遗传多态性

采用ＳＴＲ ＰＣＲ技术从血痕中提取ＤＮＡ ,复合扩增ＣＳＦ1ＰＯ、ＴＰＯＸ和ＴＨ0 13个基因座 ,对云南彝族、瑶族、壮族和回族群体的等位基因进行基因频率分布调查 ,现报道如下。1　材料与方法1 1　样本云南峨山县彝族 172人 ,云南勐腊县瑶族 10 0人 ,云南蒙自县壮族 137人 ,云南澄江县回族 112人。均为健康、三代无与其他民族通婚史 ,彼此间无血缘关系。1 2　ＤＮＡ提取取 5× 5ｍｍ血痕纱布 ,剪碎放入 1 5ｍｌＥｐｐｅｎｏｒｆ管 ,加入消化液 30 0 μｌ (ＡＧＴＣＩｎｃ) 2 0 μｌ蛋白酶Ｋ溶液 ,2 0 μｌ 1 0ｍｏｌ/ＬＤＴＴ ,37℃过夜 …     

浙江汉族人群9个STR基因座的遗传多态性调查

利用四色荧光标记复合扩增的方法 ,在同一反应管内复合扩增Ｄ3Ｓ1358、ｖＷＡ、ＦＧＡ、Ｄ8Ｓ1179、Ｄ2 1Ｓ11、Ｄ18Ｓ51、Ｄ5Ｓ818、Ｄ13Ｓ317及Ｄ7Ｓ82 0九个ＳＴＲ基因座。扩增产物用ＡＢＩ310型基因分析仪进行毛细管电泳分离 ,自动荧光检测予以分型。经对2 0 0名浙江汉族无关个体进行群体遗传学调查 ,获得该 9个ＳＴＲ基因座的频率分布 ,以及各基因座的杂合度 (Ｈ)、个人识别能力 (ＤＰ)、偶合率 (ＰＭ)、非父排除率 (ＥＰＰ)和多态性信息总量 (ＰＩＣ)等群体遗传学参数 ,为法医学应用提供理论依据 ,现报告如下。1　材料与方法1 1　实验…     

亲子鉴定中2个STR基因座突变1例

目前 ,国内外亲子鉴定案例中多采用ＳＴＲ基因座分型方法。由于ＳＴＲ序列核心序列短 ,在遗传过程发生变异的机会较高 ,已引起法医分子生物学和遗传学工作者的重视[1] 。但在父子二代的一家中有 2个ＳＴＲ基因座同时突变较为罕见 ,现报道如下。1　案情与检验结果1例因移民要求做亲子鉴定的案件 ,受检者争议父 4 0岁 ,母 37岁 ,子 10岁 ,均为东莞汉族人。用Ｃｈｅｌｅｘ 10 0提取新鲜血的ＤＮＡ。先用ＧｅｎｅｐｒｉｎｔＰｏｗｅｒｐｌｅｘ[ＴＭ ] 16ｓｙｓｔｅｍ试剂盒 (Ｐｒｏｍｅｇａ公司 )检测Ｄ3Ｓ135 8、ＴＨ0 1、Ｄ2 1Ｓ11、Ｄ18Ｓ5 1…     

广西壮族人群2个Y-STR基因座多态性研究

1999年Ｗｈｉｔｅ等[1] 报道了 7个Ｙ ＳＴＲ基因座 ,其核心重复序列均为ＧＡＴＡ。本文作者对其中Ａ10、Ａ7 1两个基因座在中国壮族人群中的分布频率进行了调查 ,报告如下。1　材料及方法1 1　样品及其ＤＮＡ提取来源于广西壮族无关男性个体血斑 10 0份 ,4℃低温保存。采用Ｃｈｅｌｅｘ 10 0快速提取法[2 ] 。离心后4℃低温保存。1 2　引物合成与标记根据文献 [1]。由上海生物工程公司合成如下引物序列。Ａ10和Ａ7 1引物的 5′端用ＦＡＭ标记。1 3　ＰＣＲ扩增及其产物检测10 μｌ反应体系 ,包括 10×ＰＥＢｕｆｆｅｒⅡ (Ｐｅｒｋｉｎ Ｅ…     

中国黎族人群13个STR基因座的多态性调查

应用四色荧光标记引物复合扩增技术 ,对 2 13名黎族无关个体的 13个ＳＴＲ基因座进行分型研究 ,计算中国黎族 13个ＳＴＲ基因座的基因频率 ,统计分析各基因座的杂合度 (Ｈ)、多态信息总量 (ＰＩＣ)、个体识别机率 (Ｄｐ)及累积个体识别率、累积非父排除率。1　材料和方法1 1　材料黎族无关个体血样 2 13份 ,取自海南省琼中黎族自治县、陵水黎族自治县等黎族居住地。抽取静脉血液涂布于滤纸上 ,阴干保存。1 2　方法1 2 1　ＤＮＡ提取　所有检材均应用Ｃｈｅｌｅｘ 10 0法提取ＤＮＡ。1 2 2　ＰＣＲ试剂　用ＡＢＩ公司Ｐｒｏｆｉｌｅｒ Ｐｌ…     

武汉汉族人群D14S608、D16S3253、D21S1437基因座多态性

利用ＰＣＲ和ＰＡＧＥ技术 ,对武地区汉族人群Ｄ14Ｓ60 8、Ｄ16Ｓ3 2 5 3、Ｄ2 1Ｓ14 3 73个ＳＴＲ基因座进行调查。2 80例武汉地区汉族无关个体抗凝血样取自同济医院血库。ＤＮＡ提取、ＰＣＲ扩增产物检测 ,基因型命名及群体数据参照杨庆恩方法[1] ,3个ＳＴＲ基本特征和其引物参数文献[2 ] 。武汉汉族人群Ｄ 14Ｓ60 8、Ｄ 16Ｓ3 2 5 3和Ｄ2 1Ｓ14 3 7等位基因频率分布见表 1。Ｄ14Ｓ60 8、Ｄ16Ｓ3 2 5 3和Ｄ2 1Ｓ14 3 7基因座Ｈ、ＤＰ、Ｐｍ和ＰＩＣ值见表 2。　　为了从众多的ＳＴＲ位点中筛选出频率更好、分型稳定的ＳＴＲ基因座。选取了…     

河南地区汉族群体9个STR基因座的频率分布调查

应用ＰＣＲ技术 ,对 9个ＳＴＲ基因座分三组 (Ⅰ组 :ＣＳＦ1ＰＯ ,ＴＰＯＸ ,ＴＨ0 1;Ⅱ组Ｆ13Ａ0 1,ＦＥＳＦＰＳ ,ｖＷＡ ;Ⅲ :Ｄ16Ｓ539.Ｄ7Ｓ82 0 ,Ｄ13Ｓ317)进行复合扩增 ,对河南地区汉族 10 0例无关个体血样ＤＮＡ进行群体调查 ,得到 9个基因座的基因频率。计算出各基因座及 9个基因座综合的杂合度 (Ｈ)、多态性信息总量(ＰＩＣ)、鉴别机率 (Ｄｐ)、匹配概率 (Ｐｍ)和非父排除率 (ＰＥ) ,并在常规的办案中应用三组 9个ＳＴＲ基因座对各类案件进行检验 ,结果报告如下。1　结果与讨论9个基因座的分型结果经 χ2 检验 ,均符合Ｈａｒｄｙ…     

中国汉族人群D2S1328基因座的遗传多态性研究

采用ＰＣＲ和ＰＡＧ垂直电泳技术 ,对中国河北180名汉族无关个体和 10个家系进行调查 ,获得汉族人群Ｄ2Ｓ132 8基因座群体遗传学数据 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　血样180名汉族无关个体的ＥＤＴＡ抗凝血由河北省中心血站提供。 10个家系二代人 30份血样由河北省人民医院提供。1 2　引物Ｄ2Ｓ132 8特异性寡核苷酸引物 ,由上海生物工程公司合成。引物的序列为 5′ ＴＧＧＣＡＣＡＴＧＴＡＣＡＣＣＡＧＡＡＣ 3′和 5′ ＧＴＧＧＣＴＴＴＧＧＡＧＧＡＡＣＡＣＴＡ 3′。1 3　ＤＮＡ提取根据文献 [1]的方法有所改进。ＰＣＲ扩增体系 …     

北京地区汉族人群PentaE、PentaD遗传多态性

ＰｅｎｔａＥ、ＰｅｎｔａＤ基因座分别位于人类第 15号和第 2 1号染色体长臂上 ;核心序列均为ＡＡＡＧＡ。目前国内尚未报道。本文作者运用扩增片段长度多态性分析技术 ,对北京地区汉族 2 0 1份无关个体血样(取自本实验室日常案件的样本 )进行上述两个基因座多态性调查 ,现报道如下。2 0 1份血样 ,按Ｐｒｏｍｅｇａ公司ｐｏｗｅｒＰｌｅｘＴＭ16Ｓｙｓｔｅｍ试剂盒的方法进行检验 ,其中ＰｅｎｔａＥ基因座片段大小分布于 379～ 4 74ｂｐ之间 ,检出等位基因 19个 ( 5～ 2 4 ,其中 9等位基因未检出 ) ,基因型 2 10个 ,基因频率分布在 0 0 0 …     

一种改良的骨组织DNA提取方法

骨组织耐腐败 ,当其他软组织已完全腐败后 ,只能用骨组织进行种属鉴定 ,性别鉴定和个人识别。骨组织ＤＮＡ提取是骨组织ＤＮＡ分析的关键。作者曾用多种方法提取过骨组织ＤＮＡ ,本文报道一种改良的骨组织ＤＮＡ提取方法。方法1 去除骨骼表面的异物及残留的腐败软组织 ,用钢锯锯开骨组织 ,锯下骨松质骨片 2ｃｍ× 2ｃｍ× 0 5ｃｍ一块。2 ＥＤＴＡ脱钙 3天 ,每日更换一次脱钙液 ,(ＥＤＴＡ脱钙液 :0 2ＭＴｉｓ溶液 1 0 0ｍｌ +ＥＤＴＡ -2Ｎａ2 1 0 ｇ,用ＮａＯＨ缓慢调整ＰＨ7 0 )。3 剪碎已脱钙的海绵状骨松质于 2只 1 5ｍｌ消毒离心…     

甲醛固定及石蜡包埋组织的DNA分型及其应用

目的：建立甲醛固定及石蜡包埋组织ＤＮＡ的基因分型方法并使之应用于实际检案。方法：用Ｃｈｅｌｅｘ和有机溶剂提取法提取ＤＮＡ,以ＰＣＲ与反向探针杂交技术作ＰＭ和ＨＬＡ－ＤＱＡ１位点分型。结果：２６份包埋组织块有２４份能得到理想的分型结果。结论：本法可用于法医学个人识别和亲子鉴定     

姨诈称母亲权鉴定1例

1　案情简介某机关干部刘某被举报超生第二胎 ,但其称小孩是收养的。为了证实该小孩是否刘某夫妇亲生 ,某鉴定单位对刘某、小孩及“母亲”(杨某 )的新鲜血进行了Ｄ17Ｓ30、ＨＬＡ ＤＱａ等基因座的多态性分析 ,难以定论。为慎重起见 ,该单位委托本所对以上检材进行复核。2　检验过程Ｃｈｅｌｅｘ 10 0处理血样 ,用荧光标记试剂盒 (ＧｒｅｅｎＩ、ＰｒｏｆｉｌｅＰｌｕｓ)中的 12个ＳＴＲ基因座引物扩增血样ＤＮＡ。扩增产物用ＰＥ公司的ＡＢＩＰＲＩＳＭ 377测序仪检测 ,检测结果用ＧｅｎｅＳｃａｎ软件分析 ,得到各样本的基因型 (表 1)。表…     

哈尔滨(地区)人群CSF1 PO-TPOX-TH01基因座的基因频率调查

参照美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司的方法 ,复合扩增ＣＳＦ1ＰＯ、ＴＰＯＸ、ＴＨ0 1基因座 ,并对 3个基因座的基因频率分布进行调查。1　材料和方法1 1　材料血样取自哈尔滨 (地区 )人群的无关个体。采耳血制成干血纱。1 2　方法1 2 1　引物　Ｐｒｏｍｅｇａ公司的ＣＴＴ复合扩增系统试剂盒提供。1 2 2　ＤＮＡ提取　用Ｃｈｅｌｅｘ〔1〕方法提取血纱ＤＮＡ。1 2 3　ＰＣＲ复合扩增　采用ＧｅｎｅｐｒｉｎｔＳＴＲｓｙｓｔｅｍＣＴＴ试剂盒 (ＰｒｏｍｅｇａＵＳＡ ) :2 5μｌ 10×ｂｕｆｆｅｒ(10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌｐＨ9 0 ,50 0ｍ…     

哈尔滨(地区)汉族人群F13A01、FESFPS、vWA基因座多态性

参照美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司Ｇｅｎｅｐｒｉｎｔ试剂盒提供的方法 ,采用Ｆ13Ａ0 1、ＦＥＳＦＰＳ、ｖＷＡ三基因座复合扩增技术 ,对哈尔滨 (地区 )汉族人群中 16 3个无关个体的 3个基因座进行基因频率分布调查 ,现报告如下。1　结果与讨论通过对 16 3名无关个体的血样经酚、氯仿萃取法提取ＤＮＡ ,ＰＣＲ扩增 ,用标准等位基因作参照物 ,电泳分离 ,银染检测后 ,进行ＤＮＡ分型和统计学分析。Ｆ13Ａ0 1基因座观察到 4个等位基因 ,9个基因型 ;ＦＥＳＦＰＳ基因座观察到6个等位基因 ,13个基因型 ;ｖＷＡ基因座观察到 8个等位基因 ,2 3个基因型 ;…     

硅珠法提取骨组织DNA

骨骼是硬组织 ,抗腐蚀性好 ,当其它软组织完全腐败后 ,骨组织在鉴定中可发挥重要作用。但由于骨组织中细胞含量少[1] ,加上环境因素的影响 ,使陈旧骨骼的ＤＮＡ提取成为鉴定工作的难点[2 ] 。本文研究了骨组织ＤＮＡ的硅珠提取法 ,并将其运用于法医物证检验。1　材料与方法1 1　样本收集75例骨骼样本来自本实验室受理的刑事案件检材 (检材保存时间最久为 14年 )。1 2　试剂脱钙液 :0 2ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ溶液 10 0ｍｌＥＤＴＡ Ｎａ2 10 ｇ ,ｐＨ 7 0 [3] 。裂解液 :12 ｇ ＧｕＳＣＮ + 10ｍｌ0 1ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌｐＨ 6 4 + 2 2…