彗星试验检测死后DNA降解推断PMI的参数选择研究

目的筛选出彗星试验检测死后DNA降解推断死亡时间（PMI）的合适彗星参数。方法大鼠断颈处死后置于10℃和20℃环境中44h，每4h取材脑和骨髓组织制成细胞悬液进行彗星电泳，CASP软件测量彗星参数，线性回归分析和比较各参数与PMI的相关关系。结果死后DNA随PMI的延长逐渐降解，彗星头和尾DNA百分比、尾DNA、Olive尾矩、尾面积、尾矩等参数与PMI呈稳定的线性相关关系。结论彗星头和尾DNA百分比、尾DNA、Olive尾矩、尾面积、尾矩等参数是彗星试验检测死后DNA降解推断PMI的合适参数。     

单细胞凝胶电泳检测大鼠死后肝细胞核DNA降解

目的应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测大鼠死后肝细胞核DNA降解规律,分析与死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断提供新的方法。方法在大鼠死后30h内,每隔3h取肝组织样本进行单细胞凝胶电泳,用共聚焦显微镜摄取彗星图像,应用彗星图像分析软件(IM I1.0)进行图像分析,并作统计学分析。结果死后大鼠的肝细胞在电泳图像上出现明显的彗星形拖尾,其尾长(TL)、尾矩(TM)在一定的时间范围内(0~18h)随死亡时间的延长而逐渐增大,二者均与死亡时间(PM I)呈现一定的相关回归关系。结论单细胞凝胶电泳技术可应用于早期死亡时间的推断。     

死后小鼠脑组织细胞核DNA变化规律的研究

目的研究DNA降解变化与死亡时间的关系,为法医学推断死亡时间提供一种比较准确可靠的新方法。方法应用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定了111只小鼠在死后72h内不同时间点小鼠脑组织细胞核头半径（HeadRadius,HR）、尾长度（Tail Length,TL）、头DNA（HeadDNA）含量比例、尾DNA（Tail DNA）含量比例、尾矩（Tail Moment,TM）、Olive矩（Olive Moment,OM）、头面积（Head Area,HA）、尾面积（Tail Area,TA）8项参数的变化值。结果在个体死亡72h内,测定的8项参数指标中尾DNA含量比例、彗星尾长、尾矩、Olive矩、尾面积都呈增加趋势,头半径,头DNA含量比例,头面积均呈下降趋势。上述参数均与死亡时间具有高度的相关性。并将每个参数的测量值进行了多项式运算,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程（P〈0．001）和多元回归方程（P〈0．001）,均具有高度的统计学意义。结论应用本研究提供的72h内脑组织DNA变化与死亡时间之间呈线性关系的各组回归方程,为法医学推断死后经过时间提供了一种新的、客观的、精确的方法和参考依据。     

运用猪眼视网膜细胞DNA降解程度推断死亡时间

目的运用单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis,SCGE）技术观察猪眼视网膜细胞DNA降解规律,推断死亡时间（postmortem interval,PMI）。方法猪死后取眼球放置于避光、温度（15±2）℃、湿度（50±5）%条件下,分别于2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h提取猪眼球视网膜细胞,进行SCGE,荧光显微镜采集图像,并运用单细胞凝胶电泳图像分析系统（IMI 1.0）进行图像分析。结果死后2～24h,视网膜细胞DNA降解程度随着PMI延长而增加;头DNA含量（%）、LT/LH、IT/IH与PMI的回归方程分别为y=92.227-5.188 x＋0.019 x^2＋0.001 x^3（R^2=0.971）、y=0.035e^0.191x（R^2=0.947）、y=0.099 e^0.264x（R^2=0.955）。结论运用SCGE检测视网膜细胞DNA降解情况有助于推断PMI。     

大鼠死后肌动蛋白降解与死亡时间的相关性

目的观察大鼠死后不同时间心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌肌动蛋白（actin）的降解规律,为晚期死亡时间（postmortem interval,PMI）的推断寻找客观指标。方法28只SD大鼠随机分为7组,经机械性窒息致死后．分别置于20℃恒温箱内,于0、24、48、72、96、120和168h后剖取以上器官,应用免疫印迹技术检测各组织内actin的含量,SPSS11．5软件对所得数据进行方差分析。结果大鼠死后上述各器官actin含量均随PMI的延长而逐渐下降,与PMI相关,决定系数（R2）均在0．75以上。但actin在上述各器官内的降解速度有显著差异（P〈O．05）,在脑组织中降解速度最快,其余依次为肺、脾、肝、肾、心肌和骨骼肌。结论尽管大鼠死后心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌actin的降解规律具有组织差异性,但是actin在上述组织中的含量变化与PMI相关．有助于较晚期PMI的推断。     

大鼠死后骨骼肌细胞核DNA降解的彗星电泳检测

目的探讨彗星电泳检测大鼠死后骨骼肌细胞核DNA降解碎片与死后时间的关系。方法建立SD大鼠死亡模型,18只雌性大鼠断颈处死,在25.1℃分别于死后6、12、24、36、48、60提取大鼠骨骼肌组织进行彗星电泳,荧光显微成像系统采集图像,同时获取多个分析参数(Comet4.0),并进行统计学处理。结果在死后6～48h,彗星尾长(TL)在死后各时间点的均数依次为11.56±0.10、17.76±0.18、18.82±0.21、21.68±0.18和23.33±0.07;Oliver尾矩(TM)在各时间点的均数依次为1.63±0.46;2.12±0.90;2.15±1.03;2.22±0.76;3.35±0.80;尾DNA(TDNA)在各时间点的均数依次为29.57±8.42;32.36±10.92;30.11±12.55;37.81±12.03;54.76±8.60。结论细胞DNA降解随着死后时间的延长而增加;彗星尾长用于推断死后时间优于Oliver尾矩和尾DNA。     

小鼠心肌细胞核DNA变化与死亡时间的关系

目的监测小鼠死后细胞核DNA降解的情况,探讨死后细胞核DNA降解的一般规律。方法应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定111只小鼠在死后72h内不同时间点小鼠心肌组织细胞头半径、尾长度、头DNA含量比例、尾DNA含量比例、尾矩、Olive矩、头面积、尾面积八项参数的变化值。结果在个体死亡72h内,测定的八项参数指标均显示细胞核DNA降解速率和程度与死亡时间具有高度的相关性,并获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程和多元回归方程,均具有高度的统计学意义。结论应用72h内心肌组织DNA变化与死亡时间之间呈线性关系的各组回归方程,可为法医学推断死后经过时间提供一种新的、客观的、精确的方法和参考依据。     

大鼠脑细胞DNA含量与死亡时间关系的图像分析

应用计算机图像分析技术 ,测定 15只大鼠死后 48h内不同时间点大鼠脑细胞核DNA含量的面积(Area)、等效直径 (Mean Dia ,MD)、异形指数 (Indexofdensity ,ID)、平均光度 (Averageopticaldensity ,AOD)、积分光度 (Integralopticaldensity ,IOD)、密度变化数 (L Den Coe ,LDC)和平均灰度 (Averagegray ,AG)等七项参数的变化值。结果证明 ,在大鼠死亡后 2 8h内 ,其脑细胞核DNA降解速率与PMI具有一定相关性。将每个参数的测量值进行多项式运算 ,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程。其结果表明 ,应用计算机图像分析技术 ,测量机体死后DNA含量变化 ,将会成为推断PMI精确、客观的新方法。     

大鼠肾细胞核 DNA含量与死亡时间关系的研究

目的 研究 DNA含量与死亡时间关系。方法 应用计算机图像分析技术,测定了 15只大鼠在死后 48h内不同时间点大鼠肾细胞核 DNA含量的面积（ Area）、等效直径（ Mean－ Dia, MD）、异形指数（ Index of density, ID）、平均光度（ Average optical density, AOD）、积分光度（ Integral optical density, IOD）、密度变化数（ L－ Den－ Coe, LDC）和平均灰度（ Average gray, AG）等七项参数的变化值。结果 在大鼠死亡的相对早期（ 48h内）,其细胞核 DNA降解速率与 PMI具有一定相关性。本实验并将每个参数的测量值进行了多项式运算,获得了更能体现 DNA降解趋势的二项式回归方程。结论 应用计算机图像分析技术,测量机体死后 DNA含量变化,将会成为推断死亡时间精确、客观的新方法。     

大鼠死后视网膜细胞核DNA含量变化的图像分析

目的分析死后不同时间大鼠视网膜细胞核DNA含量变化图像,探讨视网膜细胞核DNA降解与死亡时间（PMI）的关系。方法90只成年健康雌性SD大鼠,随机分成15组,死后0—28h内（20℃）,每2h提取视网膜细胞进行Feulgen-Vans染色;采用图像分析系统检测视网膜细胞核的异形指数（ID）、积分光密度（IOD）和平均光密度（AOD）,并运用SPSS12．0软件对测量数据进行线性回归分析。结果视网膜细胞核AOD和IOD随死亡时间的延长逐渐下降,ID则呈上升趋势。28h内各参数变化的回归方程如下：YAOD=-0．009XAOD＋0．590,R^2=0．949,Y100=-0．097X。＋18．903,R^2=0．968,Y10=0．122X10＋2．246,R^2=0．951。结论大鼠死后视网膜细胞核DNA含量随着死亡时间的延长而呈规律性降解,并与PMI具有良好的相关性。     

Analysis of postmortem DNA degradation by single-cell gel electrophoresis

One of the most important longstanding problems in the field of forensic medicine is the determination of the time of death upon the discovery of a possible homicide victim. With a majority of homicide victims discovered within the first 48h, it is critically important to be able to determine time of death quickly, and with accuracy and precision. Current methods of determining postmortem interval (PMI) vary, but none can provide better than an 8-h window time estimate. In this paper, the potential application of single-cell gel electrophoresis (SCGE), also known as the comet assay, to evaluate postmortem cell death processes, specifically nuclear DNA fragmentation, is assessed. Upon the death of an organism, internal nucleases contained within the cells should cause chromosomal DNA to degrade into increasingly smaller fragments over time, and if these fragments can be isolated and visualized, the fragmentation should prove to be measurable and quantifiable. An original study providing proof of the concept of postmortem DNA fragmentation between early and late time periods was conducted using human leukocytes. With an established trend seen in the leukocyte results, this study was then expanded using a porcine animal model, over a longer time period, with more frequent time-points evaluated. DNA degradation in all samples was revealed by SCGE and quantified by the use of DNA-specific quantitative stains, as measured by digital camera affixed to a microscope. The comet 'tail-moment' gave a measure of the proportion of fragmented to non-fragmented DNA, while the 'tail-length' provided the relative size of degraded DNA fragments. In both models, an increase in DNA fragmentation was found to correlate with an increased PMI from 0 to 56h postmortem, as evaluated by comet-tail-moment and by comet-tail-length, with tail-length providing the strongest statistical correlation, based upon regression analysis. The postmortem DNA fragmentation observed in this study, reveals a sequential, time-dependent process with the potential for use as a predictor of PMI in homicide cases.     

小鼠骨骼肌细胞核DNA降解与死亡时间的关系

目的　监测小鼠死后骨骼肌核内DNA降解的情况 ,探讨死后细胞核DNA降解的一般规律。方法　建立小鼠死亡模型 ,在死后 72h内 ,以 12h的间隔取骨骼肌样本进行单细胞凝胶电泳 ,在荧光显微镜下测量彗星图像 ,并作统计学分析。结果　机体死后 ,骨骼肌细胞在电泳图像上出现了明显的彗星形拖尾 ,L/W比值随死亡时间而逐渐增大 ,二者呈一定的线性关系。结论　单细胞凝胶电泳技术可以应用于早期死亡时间推断。     

牙髓细胞DNA含量与死后经过时间的相关性

目的探讨死后不同环境温度下离体牙的牙髓细胞平均DNA含量变化与死后时间(PM I)的相关性。方法采用细胞图像分析系统(PIPS-2020),测定离体即刻至15d牙齿在低温环境(10~15℃)和高温(30~35℃)环境下牙髓细胞DNA含量变化值,并对其数据进行统计学分析。结果在不同的环境温度下,牙髓细胞DNA降解的速度有所不同,温度的升高有加速牙髓细胞DNA降解的趋势,且DNA降解存在一个平台期。低温组牙髓细胞平均DNA含量与PM I之间的相关系数r=0.953,相关指数R2=0.917;高温组的相关系数r=0.991,相关指数R2=0.971。结论牙髓细胞平均DNA含量与PM I之间具有高度相关性,测定牙髓细胞的DNA变化情况对推断3d(高温环境)或6d(低温环境)后的PM I有参考价值。     

离体人胸骨骨髓DNA降解与腐败尸体死亡时间推断的初步研究

目的研究死后胸骨骨髓DNA的降解与较长死后间隔时间(PMI)的关系。方法采用改良Feulgen染色及计算机图像分析技术对离体人胸骨(取材后分别室温搁置0,1,3,5,7d)骨髓DNA含量进行定量检测。结果在较长PMI范围内,人胸骨骨髓DNA含量仍呈现下降规律。结论人胸骨骨髓DNA降解规律可望应用于较长PMI的推断。     

人体死后肝细胞DNA含量与死亡时间关系的研究

目的研究人体死后肝脏细胞DNA含量变化与死亡时间的关系及影响因素。方法选取46例已知死亡时间的人体肝脏,根据离体肝脏所处的环境温度分为12—19％（A组）和20—27％（B组）两组,每组23例。在死后24～72h内每隔4h穿刺取肝组织1次,制成细胞悬液,经RNA酶消化,PI染色后,用流式细胞仪测定被检测细胞中含不完整DNA的细胞数所占百分比,所得数据经Exp032V1．2软件计算N值。结果死后24～72h肝细胞N平均值,A组从10．91％增至49．72％,B组从16．22％增至69．63％。两组N平均值随死亡时间的延长均逐渐增高,与死亡时间有相关性,A组r值为：0．598,B组r值为0．77357。并且建立了不同环境温度对应的回归方程。结论在不同环境温度下,死后24～72h内人体肝脏细胞DNA降解均随死亡时间的延长和环境温度的升高而逐渐加快,相关数据可望为死亡时间推断提供一定参考依据。     

利用不同温度下人肝细胞DNA降解参数推断早期PMI

目的对不同温度下人体肝细胞DNA降解状态进行多参数定量分析,得出温度相关的多元回归方程。方法选取13例已知PMI的人体离体肝脏,在死后13～34h内,分别在10℃、20℃及30℃条件下,每隔1h取材,进行细胞学涂片,Feulgen-Vans染色,选用图像分析系统检测几何参数（ID）及灰度参数（AOD）指标,对不同温度的检测指标进行多元回归分析,得出相应的回归方程。结果温度相关的肝细胞DNA降解推断死亡时间的回归方程：Y=25.789-0.656XT-41.958XAOD＋3.262XID（XT=10,20,30）。结论温度及反映DNA含量的各个参数与PMI存在较强的相关性,可以将温度作为参数引入方程用于推断PMI。