补体结合试验诊断环形泰勒虫病的研究

用含环形泰勒虫的血液接种除脾牛，将红细胞中的虫体制成抗原，建立了总量为０．６ｍｌ的补体结合试验方法。人工感染牛血清中的抗体在感染后５ｄ即可检出，３０ｄ达到最高峰，持续８个月。检测４３头已知感染牛，４２头呈阳性反应，检出率为９７．５６％；３５份安全区牛血清，均呈阴性，没有假阳性反应。环形泰勒虫抗原与瑟氏泰勒虫血清有轻微的交叉反应，与双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、牛边虫、伊氏锥虫、日本分体吸虫病牛的血清无交叉反应。利用该方法对不同地区的１２７５份牛血清进行了环形泰勒虫病血清学调查，表明其敏感性、特异性良好，可用于口岸检疫、流行病学调查及临床诊断     

甘肃张家川牛卵形巴贝斯虫的分离及补充传播试验

利用甘肃张家川牛体所采集的长角血脾饱血雌虫的次代幼虫，叮咬除脾健康易感牛，于第９天的未稍血液涂片中，发现了典型的卵形巴贝斯虫，第１２天染虫率达到３．１２％的高峰，随后下降至带虫水平。这是在甘肃省首次发现并分离出的一株卵形巴贝斯虫。试验证实，长角血脾雄虫也具有传播卵形巴贝斯虫的能力，卵形巴贝斯虫也可以通过长角血脾隔代垂直传播，这两个结果尚属首次报道。在自然感染牛体采集的饱血雌虫血淋巴涂片中也观察到了卵形巴贝斯虫大裂殖子。     

牛血孢子虫单一种分离技术及其保藏方法的研究——牛边缘边虫纯种虫株的分离

本文叙述了牛边缘边虫的分离方法和步骤。将洁净微小牛蜱幼虫培育在接种含边缘边虫混合种虫血的牛体上,叮咬17天后,摘取600只(雌雄各半)未饱血成虫,人为地移至另一头易感健康牛体上。于继续叮咬后13天,在该头牛的血液涂片中发现了典型的边缘边虫。至33天时染虫率达到高峰,为53.11％,个别红细胞 内的感染强度高达9～10个虫体。35天染虫率降至41.34％,牛只死亡。在该头牛虫体出现至死前23天的涂片中,只见到了单一的边缘边虫,未发现其他形态的虫体。同时对感染牛只的血红蛋白、红白细胞数及临床症状等进行了观测。为了使染虫率升高,在本试验中采用了肌注氢化泼尼松的办法,起到了与手术除脾差不多的效果,且省事安全。     

四川省汶川县两种牛梨形虫的分离鉴定

自四川省汶川县黄牛体表采集长角血蜱的饥饿或半饱血成虫,带回实验室感染除脾牛。血液涂片检查发现,感染后第10 d,病牛血液中出现一种大型巴贝虫,感染后第24 d,出现一种小杆形的泰勒虫。形态学观察和18 S rRNA基因测序和进化关系分析证明,它们分别为卵形巴贝虫与瑟氏泰勒虫。     

牛大巴贝西虫在我国的发现及其媒介蜱的确定

首次在我国发现和分离出一株牛的大巴贝西虫并确定了其媒介蜱为长角血蜱。1988年4月,从河南省卢氏县同一群黄牛体上采集到长角血蜱饱血雌虫4只和微小牛蜱饱血雌虫16只,然后分别用其第二代幼虫、若虫和成虫感染除脾小牛。结果证明长角血蜱饱血雌虫能经卵传递大巴贝西虫,第二代幼虫对牛具有感染力,若虫和成虫不能感染。微小牛蜱的幼虫、若虫和成虫各期都不能传播这种巴贝西 虫。长角血蜱幼虫感染的小牛,红细胞内的虫体稍小于双芽巴贝西虫,大于牛巴贝西虫,双梨子形虫体较宽,其量度为3.1～3.7×1.5～2.3μm,长宽指数为1.87。     

双芽巴贝斯虫牛体内培养研究

作者用液氮保存的双芽巴贝斯染虫血和微小牛蜱饥饿幼蜱保存的同一虫株,感染健康摘脾小牛,然后以适当的剂量连续快速通过另外3头摘脾小牛,进行牛体内培养双芽巴贝斯虫,第2头牛感染后5天获得7.4％染虫率的带虫血,第3头和第4头牛在感染后2天内均达到40～45％的染虫率。     

牛血孢子虫单一种的分离技术及其保藏方法的研究——牛边缘边虫的超低温保藏

感染有单一种边缘边虫的试验牛,当染虫率达53.11％时,自颈静脉采抗凝血,在无菌条件下离心,弃上清液,将红细胞压积分为三组:①直接加入DMSO,使终浓度为5％;②用0.2％低渗盐水使红细胞裂解,在虫体沉淀物中加入等量含10％DMSO的改良阿氏液;③加入等量上述阿氏液。分别封装于安瓿,悬于液 氮罐气相状态下0.5～1小时,然后缓缓浸入液氮。储藏至90天取出,在自来水下冲淋解冻,分别经颈部皮下各接种1头未除脾易感健康牛。三种悬液的感染均获成功,潜伏期为15～16天,染虫率分别为21.87％、12.7％、9.93％。前两组试验牛痊愈,后者死亡。     

绵羊巴贝虫单一种的分离及其繁殖特性观察

利用某些虫种在宿主体内带虫期具有显著差异的这一生物学特性,从绵羊巴贝虫和一种大型巴贝虫的混合种感染羊体,分离出１株绵羊巴贝虫单一种;同时对该种在除脾山羊、除脾绵羊、未除脾绵羊和感染后再除脾绵羊体内的繁殖特性进行了观察。结果显示,山羊对该种不敏感,只是处于带虫水平;绵羊巴贝虫在未除脾绵羊体内亦不能大量繁殖,染虫率最高为０．８０％,临床上只有轻微的体温反应和贫血;在除脾绵羊体内该种能达到较高的繁殖水平,试验羊最高染虫率达１２．５４％,临床上出现明显的体温反应、贫血和消瘦。在红细胞内圆环形虫体大多靠边是该种的特征之一,圆环形和单梨籽形虫体约占总数的８０．００％,双梨籽形虫体不超过１０．００％。     

微小牛蜱对牛巴贝西虫和双芽巴贝西虫传播能力的研究

河南省卢氏县为午巴贝西虫和双芽巴贝西虫的混合感染地区。将该地区自然感染的微小牛蜱的饱血雌虫置28℃产卵和孵育,然后分别用其次代幼虫、若虫和成虫感染除脾牛,结果证明微小牛蜱能经卵传递牛巴贝西虫和双芽巴贝西虫。幼虫不仅能传播牛巴贝西虫,同时也能传播双芽巴贝西虫。若虫和成虫只能传播双芽巴贝西虫,对午巴贝西虫不再具有传播能力。用若虫感染除蜱牛分离出1株纯双芽巴贝西虫。     

甘肃省宁县两种羊巴贝斯虫的传递试验

将采自甘肃省宁县湘乐镇柏树底村自然感染绵羊的含虫血，用液氮保藏，带回实验室后解冻，经颈部皮下以５０ｍＬ分别接种未除脾绵羊１只，除脾山羊１只。用采自疫区羊体的半饱血若虫和成虫（后经鉴定系森林革蜱和长角血蜱）、饱血若虫（在实验室蜕化为成虫，系长角血蜱）、森林革蜱次代幼虫，各自分别叮咬感染１只未除脾绵羊。结果含虫血接种的绵羊和山羊均被感染，在血液涂片中观察到了两种巴贝斯虫，一种是大型的巴贝斯虫未定种，另一种是小型的绵羊巴贝斯虫，潜伏期为９～１１ｄ。蜱叮咬的羊只均未感染成功。     

补体结合试验诊断边虫感染牛的研究

利用边缘边虫DS-1株接种除脾易感牛,制备出补反诊断抗原。所制备的抗原具有良好的特异性和敏感性,并建立了总量为0.6ml的补反诊断方法。对试验条件下人工感染牛的补反检出率为100％,安全区无假阳性反应。人工感染牛第5天出现补反抗体,感染后20～50天血清抗体达到高峰,以后开始下降,7个月后补反抗体消失。所制备的补反抗原与双芽巴贝西虫、牛巴贝西虫、大巴贝西虫,环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫、伊氏锥虫和日本血吸虫等几种血液寄生虫抗血清之间没有交叉反应。抗原保存期达一年以上。所制备的抗原达到了国外同类产品的水平。     

牛血孢子虫单一种的分离技术及其保藏方法的研究——牛巴贝斯虫纯种虫株的分离

本试验对感染双芽巴贝斯虫和牛巴贝斯虫混合种的牛连续注射1％台盼蓝溶液3天,用其脑匀浆滤液接种健康易感牛,未分离出牛巴贝斯虫单一种。将洁净微小牛蜱幼虫释放到牛体叮咬10天后,用混合种含虫血感染牛,收集饱血雌虫,置28℃、相对湿度约90％的条件下产卵孵化,用次代幼虫分批感染健康易感牛5头,准确地于幼虫释放后5、4、3天,用杀虫剂杀死正在吸血的幼虫终止感染,对试验牛逐日耳尖采血涂片检查,仅3天杀死幼虫的牛只感染有牛巴贝斯虫单一种。试验结果表明,台盼蓝不能杀灭双芽巴贝斯虫;脑涂片中尽管有大量牛巴斯虫,但它不是寄生于该部位的唯一种;叮咬3天的次代幼虫仅传播牛巴贝斯虫。     

边缘边虫在除脾牛体内的药物分离

本文采用药物杀虫法,从几种血液寄生虫混合感染的除脾牛体内,分离出两株边缘边虫。瑟氏泰勒虫和边缘边虫混合感染牛,连续投给磷酸伯氨喹片杀灭瑟氏泰勒虫,分离出一株边缘边虫DS-1株;双芽巴贝西虫、牛巴贝西虫和边缘边虫混合感染牛,注射台盼兰和贝尼尔杀灭血液中的双芽巴贝西虫和牛巴贝西虫,分离出另一个边虫株一边缘边虫DS-2株。地塞米松能进一步降低除脾牛的抵抗力,促进边虫在血液中的繁殖。药物杀虫分离法程序简单,作为分离边虫虫株的方法,在我国尚未见报道。     

山羊边虫病的研究——病原鉴定和临床症状观察

内蒙古自治区额济纳旗自1972年以来,在山羊群中流行一种季节性的传播性疾病,临床上以贫血,黄染和消瘦为主要特征,直接影响着养羊业的发展。1985年兰州兽医研究所对额济纳旗兽医站送检的病羊的血片做了检查,在红细胞中发现大量的虫体,经鉴定为绵羊边虫(Anaplasma ovis Lestoguard,1924),从而确诊额济纳旗山羊群中流行的疾病为绵羊边虫病。我们利用所分离的虫株人工感染山羊获得成功。健康山羊红细胞染虫率不超过4％,除脾山羊可达71％。并对病原形态、临床症状及病理剖检做了详细观察。     

牛血孢子虫单一种的分离技术及其保藏方法的研究——微小牛蜱对边缘边虫的传递试验

将洁净微小牛蜱幼虫释放到感染有边缘边虫的牛体上,摘取正在吸血的半饱成虫、饥饿成虫、半饱稚虫,分别人为地转移到3头健康易感牛体上事先用锌明胶贴好的布袋中。使其继续叮咬,试验牛均遭感染,其潜伏期分别为13天、13天、19天。最高染虫率分别达53.1％、12.0％、8.6％,用从感染牛体脱落饱血雌虫的次代幼虫,叮咬4头健康易感牛,检查时间最短的为30天,最长的达180天,在整个检查过程中,4头试验牛的血液涂片,始终均未发现边缘边虫。试验证明,边缘边虫不能通过微小牛蜱经卵传递,只有当代各变态期的蜱,由感染牛体转移到易感牛且继续叮咬时,才能使边缘边虫得以传播。     

酶联免疫吸附试验诊断环形泰勒虫感染牛的研究

用层析法制备的牛环形泰勒虫（Ｔｈｅｉｌｅｒｉａａｎｎｕｌａｔａ）抗原用于ＥＬＩＳＡ试验，检测６２头份带虫牛血清，阳性符合率９６．６７％；在疫区检测１５０头份牛血清，阳性率８０．４３％；在瑟氏泰勒虫流行区检测４５４头份牛血清，有交叉反应，阳性率２８．１９％；检测８９头份安全区牛血清阴性符合率１００％。用正常红细胞抗原和环形泰勒虫抗原分别对人工感染和自然感染牛作了特异性试验，结果ＥＬＩＳＡ前者ＯＤ值为阴性，后者ＯＤ值为阳性。２头人工感染牛于接种后１４～２０天测出抗体，３０天达到高峰，然后下降．其中１头牛接种后１２个月ＥＬＳＡ值仍明显高于健康于。环形泰勒虫抗原与双芽巴贝西虫、牛巴贝西虫、大巴贝西虫、边缘边虫、日本血吸虫、伊氏锥虫、肝片吸虫抗血清不发生交叉反应。检测瑟氏泰勒虫血清，有３／４的阳性反应率，证实环形泰勒虫与瑟氏泰勒虫有密切的血清学关系。     

体外培养牛巴贝斯虫致病力的观察

体外培养的牛巴贝斯虫，经液氮保存５个月后取出，迅速解冻，皮下接种于二头去脾水牛犊（含虫均为２×１０￣８个）。接种后二头牛分别从第１１天和第１７天体温升高，最高达４０℃和３９．８℃，红细胞压积分别降为２９％和２６％，血红蛋白含量最低分别降为５０ｇ／Ｌ和４０ｇ／Ｌ。接种后第１５天和第１９天，外周血液中虫体含量最高，红细胞染虫率分别达５％和６％，试验牛出现明显的临床症状，如贫血、结膜黄染、粪便稀薄、食欲减退、精神不振，其中１头死亡。说明体外连续培养２０、３０天的牛巴贝斯虫，其毒力没有下降，对牛具有感染性并能使其发病，与自然发病的强毒株人工感染牛没有差异。     

伊氏锥虫灭活苗对役牛的免疫效果观察

用从湖北当地水牛分离的伊氏锥虫制备伊氏锥虫灭活苗,在湖北省当阳市以10 mL/头剂量免疫接种役牛12 500头.免疫后1个月,随机抽取其中15头免疫牛,每头经皮下攻虫1×104条,仅有1头牛出现虫血症,保护率为99.33%(14/15).其余免疫牛中有22头出现虫血症,保护率为99.82%;免疫牛血清间接血凝效价为18～11280.药物预防组的12 407头牛中,有763头出现临床症状和虫血症,其中12头死亡,保护率为93.87%.     

莫氏巴贝斯虫和羊巴贝斯虫在我国的分离及形态学观察

在甘肃省庆阳地区的发病及病愈的小尾寒羊血液中分离出２种巴贝斯虫并进行了形态学观察，初步证实该地区“坏肠子”病的病原为巴贝斯虫，一种小型虫体鉴定为羊巴贝斯虫（Ｂａｂｅｓｉａｏｖｉｓ）。另一种为大型虫体，鉴定为莫氏巴贝斯虫（Ｂａｂｅｓｉａｍｏｔａｓｉ）。含羊巴贝斯虫的血液注射给除脾羊后，第１４ｄ血涂片中红细胞的染虫率达最高点（为０．５％），之后逐渐下降，感染羊自然耐过。含有混合虫种的血液注射给易感除脾羊后，红细胞染虫率迅速上升至３０．０％，感染后第６ｄ羊因巴贝斯虫病死亡。对２种虫体做了量度和形态学描述，并与欧洲的相同虫种作了比较。     

牛血孢子虫单一种分离技术及其保藏方法的研究——双芽巴贝斯虫纯种虫株的分离

本文报道了牛双芽巴贝斯虫纯种虫株的分离方法和步骤。将洁净微小牛蜱幼虫饲喂在事先人工感染的混合种带虫牛体上,收集感染的饱血雌虫,俟次代幼虫孵出后,将其释放到另一健康易感牛体上,自行叮咬18天之后,从该头牛体上摘下450只半饱雄虫,人为地移至另一健康牛体上,使其继续叮咬。雄虫叮咬后的第13天,在该头牛的血液涂片中,出现了典型的双芽巴贝斯虫,在其后30天的检查过程中,未发现其他种虫体。感染后第13天,体温开始升高,最高达39.6℃,持续3天;第20天染虫率达到6.11％的高峰;第27天出现血尿。同时对红白细胞进行了计数,并观测了某些临床症状。