用斑点ELISA方法检测p30确证人类精斑

作者建立了检测精浆特异性抗原p30的斑点ELISA试验方法,确证人类精斑。p30最小检出量为0.4ng。用该法盲测了室温存放1年的生物性斑痕180例,无一例假阳性和假阴性,证明用此法确证人类精斑的敏感性和特异性均优于传统的方法,具有操作简便、快速,检材用量小,结果准确等优点。     

用胶乳凝集抑制试验鉴定人类精斑

作者用人类精浆致敏的胶乳和人初乳吸收后的抗人精液血清,采用胶乳凝集抑制试验凹玻板法盲测了180份生物性斑痕,结果表明此法确证人类精斑的敏感性,准确性均高于精子检出法,而与抗 p30血清琼脂双向扩散结果一致,且可用于混合斑的检验,具有快速、准确、简便等优点。     

人类精浆特异性抗原P_(30)的研究进展

<正> 在受理强奸案件和其他性犯罪案件时,常需检验精液斑。由于精液斑的确证试验尚有不足之处,法医学者一直在探索建立更好的检验方法。近年来,国外学者报道人类精液中含有一种被称之为 P~(30)的精浆特异性抗原,其抗血清可用于检验人类精液斑。现将讨论 P~(30)的有关文献综述于后。     

用人血清-唾液-初乳斑痕吸收免疫抗血清制备特异性抗人精液血清

本研究采用人血清-唾液-初乳混合液斑痕吸收抗人精液免疫血清,以消除抗血清的外器官特异性交叉反应。吸收后的抗人精液血清,仅和人精液及附睾和前列腺组织提取液发生反应,和人血清、唾液、初乳、阴道分泌液及尿液等5种人类体液分泌液及22种人体组织浸取液无交叉免疫反应;和8种动物精液也无交叉反应,具有良好的器官及种属特异性。获得的抗血清清亮透明,效价高。血清吸收方法简便易行,成本低,易于普及推广。     

胶乳凝集试验及其在精斑检验中的应用

<正> 精斑检验在鉴定法医学性犯罪案件中有很重要的作用,精斑确证试验的方法主要有:形态学方法、化学方法、生物化学方法及免疫学方法。这些方法各有其优点和一定的局限性,目前仍较多地采用精子检出法和抗人精液血清琼脂双扩,而输精管结扎术者及精子缺乏症者其精斑中无精子,抗人精液血清特异性不够好便难以检出。近几年来用特异性抗-P30血清作     

人类岩藻糖基转移酶5特异性分布及其在精细胞的表达与定位

目的研究人类岩藻糖基转移酶5(fucosyltransferase 5,FUT5)的特异性分布及在精细胞的表达与定位。方法收集健康志愿者的精液(分离精细胞并提取精细胞膜蛋白)、阴道拭子、唾液及静脉血,应用免疫印迹方法检测FUT5在人类精细胞膜、精浆、阴道液、唾液及血清中的表达量,采用免疫荧光技术检测FUT5在精细胞中的表达与定位。结果免疫印迹方法结果显示FUT5在精细胞膜及血清中有较高表达,但在精浆、阴道液及唾液中未被检测到。免疫荧光实验结果显示FUT5主要存在于精细胞头部。表明人类精细胞膜存在一定表达量的特异性FUT5,可采用抗原-抗体反应分离精液和阴道液混合斑中的精细胞。结论人类FUT5表现出分布特异性,可应用到法医学性犯罪案件中混合斑的鉴定。     

制备抗人精液特异蛋白P30血清的研究

作者以精浆特异蛋白P30为抗原免疫新西兰白兔、豚鼠和鸡三种实验动物,制备了抗P30血清。用双向琼脂扩散法检测兔和豚鼠的抗 P30血清,其特异性和敏感性均达到目前国外同类产品的水平。抗 P30血清与阴道分泌物,血清、唾液、尿液、初乳以及羊精液、鸡精液均不出现交叉反应。用抗 P30血清检测混合的人精浆,其抗原效价为1:160;P30含量可测到12.5ug/ml。在三种动物的抗血清中,豚鼠抗 P30血清的抗体效价最高。以不同浓度的 P30测豚鼠、兔和鸡抗 P30血清抗体效价豚鼠平均滴度可达52.50,兔次之,鸡的抗 P30血清最差。经作者制备的抗 P30血清可用来确证精液。     

用特异兔抗人精蛋白抗体间接ELISA法检测人精斑

本文报告利用抗人精血清进一步精制而得的特异兔抗人精蛋白抗体进行间接ELISA试验检测人精斑的方法。经用61例各种常见体液斑检材及多人不同浓度的精液、唾液、乳汁、血液等体液稀释液进行测试,结果正确检出精斑的准确率达100％。对混合多人精液稀释液的最高检出稀释度为1/10000,非精斑检材均不出现阳性反应。该法的特异性完全适合精斑确证检验鉴定的需要,其灵敏度明显高于传统的精斑确证检验方法。本法操作简单,无需特殊仪器设备,使用的抗体来源方便,便于应用。     

用酶免疫斑点法快速检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

作者用自制的辣根过氧化物酶标记的抗精浆特异蛋白P_(30) 单克隆抗体,建立了简便快速检测精斑中P_(30) 鉴定人精斑的斑点法。通过颜色变化判定结果,阳性为紫蓝色斑点,阴性为无色。结果表明,仅人类精斑和前列腺浸液出现阳性斑点,人体其他体液及组织器官浸液均为阴性。对动物血、精斑也无交叉反应。标定精斑稀释到1600倍亦可得到阳性结果。     

ELISA检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

<正> 1978年美国Sensabaugh分离出精浆特异蛋白P30,并成功的制备出相应的抗P30血清。1987年我国也研制出抗人精浆特异蛋白P30血清,并应用该种抗血清建立了几种琼脂扩散和电泳方法鉴定人精斑。由于人精液中P30含量不高,平均为1.52±0.676mg/ml,鉴定微量精斑存在困难。为了更有效的提高方法的灵敏度。我们建立了鉴定微量人精斑的ELISA固相P30抗体法,现报告如下。     

抗人精浆特异蛋白血清的制备与纯化

本文报导检验混合斑中精斑ABO 血型所用抗人精浆特异蛋白(anti-human seminal peculiarprotein,ASPP)血清的制备及用溴化氢活化琼脂糖4B 为载体的亲和层析纯化抗血清方法,并指出纯化时的最佳条件。该血清可准确地分离混合斑中精斑的ABO 血型。     

人精浆蛋白双向谱型特征及其器官特异性的研究

本文应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D—PAGE）技术分析了60例正常人精浆中的蛋白成分。阐明了人精浆蛋白双向电泳谱型的特征，并将人精浆蛋白双向电泳谱型与其他体液蛋白双向谱型进行了比较，证明人精浆蛋白双向电泳谱型具有器官特异性。本文还用2D－PAGE对不同条件下保存的精斑进行了认定。并将其应用于强奸案的鉴定。     

高效价鸡抗人精液血清的制备和应用

本文介绍一种制备高效价鸡抗人精血清的方法。给10只2kg 以上的公鸡同时静脉和肌肉注射5～10％混合人精液7～8次,获得特异性很强,效价达50,000倍左右的抗血清。通过实验和检案证明,对由于腐败污染、水浸或水洗而含微量精斑的检材,均能检出。     

抗P30胶体金免疫试纸条灵敏度和特异性探讨

抗P30胶体金免疫试纸条(又称精斑试纸条)是利用免疫学方法和色谱层析技术对前列腺特异性抗原(PSA,又称P30)进行特异性检测的一种简便方法[1]。由于操作简单、耗时短、无需特殊设备和结果易判读等优点而被广泛用作法医学实际检案中的精斑确证试验。但在实际案件中,有时会出现精斑试纸条检测呈现阳性结果,却检测不到精子或无法扩增男性DNA的情况,为验证及比较灵敏度及特异性,本文进行了一些探讨,现报道如下。1材料和方法1.1材料精斑试纸条:购自美国E-boat Dallas公司。样品:10支阴道棉签拭子取自一周内无性生活的女性志愿者,阴道分泌液斑…     

免疫抗A、抗B、抗H沉淀素血清的制备

本文介绍了用浓缩的分泌型人唾液免疫鸡,经吸收精制获得鸡抗A、抗B、抗H沉淀素血清的方法。用本法制备的抗血清,对相应血型人唾液的特异性沉淀价可达1:512倍以上,对非相应血型者的分泌液不出现非特异性沉淀反应。应用该血清进行环状沉淀试验、单向琼脂扩散试验等免疫学试验,可简便、准确地鉴定人唾液斑、精液斑等分泌液斑的ABO血型。     

人精浆特异蛋白P_30的分离纯化与鉴定

本文介绍人精浆特异蛋白P_(30)分离纯化及鉴定的方法。人精浆经蒸馏水透析后经Sephadex G100、G150和G75三种不同的柱层析即可获得精浆特异蛋白。SDS-PAGE、免疫电泳、免疫双扩散证明其纯度和特异性均符合要求。它与已知抗P_(30)血清呈强阳性反应,用其免疫制备的抗血清和已知抗P_(30)血清,在免疫电泳中只与精浆或精浆特异蛋白形成一条完全相同的沉淀线,SDS-PAGE测得分子量约为30,000。故笔者将其亦定名为P_(30)。     

人精浆SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳谱型研究

本文采用SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳(SDS-PAGGE)研究了102例中国正常男子精浆蛋白的电泳谱型,得到了具有精液特征性的,可与人阴道液、唾液、初乳及血清进行鉴别的人精浆蛋白电泳谱型,并可作为精斑的确证。另发现一种-83kd 变异型。频率为8. 82±2. 81%。提高了精斑的个人识别机率,在实际应用中取得了初步成效。     

精斑检验干扰因素的研究

目的研究精斑检验中预试验与确证试验结果的关系,以及取材时间、生活习惯对确证检验结果的干扰。方法取376例阴道拭子,用酸性磷酸酶(ACP)染色法、斑点ELISA法和抗人精PSA金标试纸法检测检测精斑。结果ACP阴性时,可检出P30、精子,性生活后精斑确证检验大部分阳性检出分布在48小时以内样本中,结果经X2检验,P<0.01,差异性显著,而不同的生活习惯对P30检测具有显著性差异。结论研究结果对精斑的检验以及检材的提取具有推广应用和指导性意义。     

mRNA荧光复合扩增系统鉴别正常和异常精液初探

目的构建mRNA荧光复合扩增体系,实现对不同种类精液(尤其是无精症精液)的区分鉴别。方法收集正常、少精症及无精症的精液样本,制备精斑样本后提取细胞总RNA,利用逆转录PCR技术扩增2个精子特异mRNA标记(PRM1、PRM2)、2个精浆特异mRNA标记(TGM4、SEMG1)和2个管家基因mRNA标记(TEF、UCE)。结果正常精液样本可检测到全部精液mRNA标记表达;少精症精液样本虽然可检测到全部mRNA标记表达,但精子特异mRNA标记表达量较低;无精症精液样本不能检测到精子mRNA标记,只能检测到精浆特异mRNA标记。结论利用mRNA荧光复合扩增系统可以实现对正常和无精症精液的区分,而正常精液和少精症精液相比差异无统计学意义。     

分泌抗人精子单克隆抗体的鼠—鼠杂交瘤

<正> 为了获得可用于检验性犯罪案件中人类精斑所需的特异性抗人精液血清,我们建立了生产抗人精子单克隆抗体(SMAB)的杂交瘤技术。将BALB/C小鼠的Sp2/o-Ag14骨髓瘤细胞与用洗涤人精子免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合。192个融合孔中,171孔有杂交瘤细胞生