复发性流产肾虚证小鼠子宫蜕膜组织miRNA表达谱检测及生物信息学分析

目的 探讨微小RNA（microRNA，miRNA）在复发性流产（repeated spontaneous abortion，RSA）肾虚证小鼠子宫蜕膜组织中的表达特征。方法 运用基因芯片技术对所采集的正常对照组和RSA小鼠蜕膜组织进行miRNA检测，运用Genespring软件对miRNA进行筛选及功能分析。应用生物信息学方法分析差异表达的miRNA及其靶向基因在RSA发生、发展中的作用。结果 芯片检测结果显示正常对照组和RSA肾虚证组筛选出差异表达的miRNA共有63条（22条上调、41条下调），实时荧光定量PCR验证的miRNA的表达情况与miRNA芯片结果一致。京都基因与基因组百科全书通路富集分析及基因本体分析显示，其差异表达的miRNA涉及到PI3K-Akt信号通路、细胞吞噬通路、癌症通路、黏着斑通路、肌动蛋白细胞骨架调控通路、轴突导向信号、MAPK信号通路、PAP-1信号通路等。结论 RSA肾虚证小鼠子宫蜕膜组织中存在差异表达的micro RNA，可能涉及RSA肾虚证的发生、发展。     

补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号通路Nurrl、SMO mRNA及其蛋白表达的影响

目的 探讨补肾生髓方和益气活血方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号转导通路Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达的影响。方法 采用线栓法复制右侧大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血再灌注大鼠模型，将大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组和益气活血方组。脑缺血2 h后，持续灌注7 d。采用PCR检测额顶叶皮质Nurr1、SMO mRNA表达水平，采用Western blot检测其蛋白表达水平。结果 与假手术组比较，模型组Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达水平均明显上调（P<0.05）；益气活血方组和补肾生髓方组Nurr1 mRNA及其蛋白、SMO蛋白相对表达水平均较模型组明显下调（P<0.05）；模型组、益气活血方组和补肾生髓方组SMO mRNA相对表达水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；益气活血方组与补肾生髓方组Nurr1、SMO蛋白表达水平有显著差异（P<0.05）。结论 补肾生髓方和益气活血方促进脑组织修复的作用与其下调Notch信号转导通路中Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达有关。     

益气活血通络方对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性因子表达的影响

目的 研究益气活血通络方含药血清对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)炎性因子白细胞介素-1β（interleukin-1 beta, IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1）及金属基质蛋白酶-1（metal matrix proteinase-1, MMP-1）表达的影响，探讨益气活血通络方对脐静脉内皮细胞的保护作用。方法 选择SD大鼠30只，中药灌胃，制备含药血清。体外培养HUVECs，MTT法检测不同时间点、不同浓度葡萄糖对细胞存活率的影响；将HUVECs随机分为5组，即空白对照组，模型组，益气活血通络方低、中、高浓度组，高糖刺激后，分别加入不同浓度益气活血通络方含药血清干预，收集上清及细胞，ELISA法检测IL-6的表达，Western Blot法测定IL-1β、TNF-α、MCP-1及MMP-1蛋白的表达。结果 细胞培养48 h 后，33.3 mmol/L高糖组（模型组）细胞活力显著降低（P＜0.05）；高糖刺激可引起IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1及MMP-1蛋白的高表达(P＜0.05），益气活血通络方含药血清显著抑制IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1及MMP-1蛋白的高表达（P＜0.05)。结论 益气活血通络方可抑制炎性因子的高表达，对高糖损伤的HUVECs有一定的保护作用。     

艾灸对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察艾灸三阴交、关元穴对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs)中Wnt/β-catenin信号通路的影响，探索艾灸影响骨代谢的内在机制。方法 将60只6月龄SD大鼠随机分为正常组（20只）和去卵巢组（40只），采用去卵巢法复制大鼠骨质疏松症模型，将去卵巢组再随机分为模型组、雌二醇组和艾灸组，每组10只。采用MTT法检测大鼠BMMSCs活性，酶联免疫吸附法检测大鼠BMMSCs中骨钙素（bone glaprotein,BGP）含量，实时荧光定量PCR法测定Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（low density lipoprotein receptor associated protein-5，LRP-5）、LRP-6、Dkk1、β-连环蛋白（β-catenin）和T细胞因子（T-cell factor, TCF）mRNA相对表达水平，Western blot法测定Wnt3a、Dkk1、β-catenin、TCF蛋白的表达水平。结果 在体外培养第12、16天时，艾灸可显著提高骨质疏松症大鼠降低的BMMSCs活性。艾灸可显著升高骨质疏松症大鼠BMMSCs中降低的BGP含量，显著上调BMMSCs中降低的LRP-5、LRP-6 mRNA的表达水平，显著上调降低的Wnt3a、β-catenin和TCF mRNA及其蛋白的表达水平，显著下调升高的Dkk1 mRNA及其蛋白的表达水平，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 艾灸三阴交、关元穴增加去卵巢大鼠BMMSCs活性，提高BGP含量，其机制与干预Wnt/β-catenin信号通路有关。     

二参真武汤调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制心肌纤维化的体外实验研究

目的 探究二参真武汤抑制心肌细胞纤维化的作用机制。方法 采用灌胃给予SPF大鼠二参真武汤、贝那普利7 d的方法制备含药血清，从出生3 d内的乳鼠心脏中提取原代心肌成纤维细胞，采用免疫荧光和台盼蓝染色法鉴定细胞纯度与成活率，采用CCK-8法确定二参真武汤含药血清的最佳给药浓度与给药时间，采用血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）刺激原代心肌成纤维细胞复制心肌纤维化模型，将原代心肌成纤维细胞分为正常组、模型组、二参真武汤组、贝那普利组，采用ELISA法检测胶原蛋白（collagenase,Col）-Ⅰ和Col-Ⅲ含量，采用Western blot法检测平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin，α-SMA）、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平，qRT-PCR法检测α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达水平。结果 提取的原代心肌成纤维细胞纯度与成活率均达到95%以上。与正常组比较，模型组、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量显著升高（P＜0.05），α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白及mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，二参真武汤组原代心肌成纤维细胞中α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白及mRNA表达水平均显著降低（P＜0.05）。结论 二参真武汤抑制心肌纤维化的机制与调节PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。     

补肾安胎冲剂调控VHL/HIF-1α信号通路改善复发性流产小鼠母胎界面血管生成的实验研究

目的 研究补肾安胎冲剂对复发性流产小鼠蜕膜组织中希佩尔-林道抑癌基因（Von Hippel-Lindau, VHL）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α）的影响，探讨其降低胚胎丢失率的作用机制。方法 以CBA/J雌鼠与BALB/C雄鼠合笼复制正常妊娠小鼠模型，以CBA/J雌鼠和DBA/2雄鼠合笼复制复发性流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)小鼠模型，将其随机分为模型组，黄体酮组，补肾安胎冲剂高、中、低剂量组，每组10只。妊娠第1天，正常组与模型组采取蒸馏水灌胃，黄体酮组以26 mg/（kg·d）灌胃，补肾安胎冲剂高、中、低剂量组分别按35.1、11.7、3.9 g/（kg·d）灌胃。连续干预15 d后处死小鼠，收集样本，采用ELISA检测各组小鼠血清VHL、HIF-1α水平，采用荧光定量PCR、免疫组织化学法、Western blot法分别检测各组小鼠蜕膜组织中VHL、HIF-1α mRNA及其蛋白表达水平。结果 补肾安胎冲剂显著降低RSA小鼠胚胎丢失率(P＜0.05)，降低血清和蜕膜组织中VHL水平和VHL mRNA表达水平（P＜0.05），升高血清和蜕膜组织中HIF-1α水平和HIF-1α mRNA表达水平（P＜0.05），呈现明显的剂量依赖性（P＜0.05）。结论 补肾安胎冲剂降低RSA小鼠流产率的机制可能与激活VHL/HIF-1α信号通路有关。     

电针对脑缺血大鼠缺血皮质区内皮型一氧化氮合酶及血清中一氧化氮含量的影响

目的 观察电针对大脑中动脉缺血大鼠缺血皮质区内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）及一氧化氮（nitric oxide，NO）的调控作用。方法 取SPF级健康雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组，每组14只，利用改良线栓法制备脑缺血大鼠模型，电针组选取“百会”“风府”“内关”“心俞”4个穴位，从第1天术后4 h开始治疗，每日1次，共治疗7 d。干预结束后，比较各组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、脑缺血皮质区细胞病理表现、缺血皮质区eNOS蛋白的表达、血清NO的含量。结果 与假手术组比较，模型组大鼠神经功能缺损体征明显（P<0.05），梗死范围显著，脑缺血皮质区eNOS蛋白表达显著下降（P<0.05），血清NO含量升高（P<0.05）；与模型组比较，电针组大鼠神经功能缺损评分降低（P<0.05），脑梗死体积明显缩小（P<0.05），脑皮质缺血区eNOS蛋白表达水平显著上升（P<0.05），血清NO含量升高（P<0.05）。结论 电针可促进局灶性脑缺血大鼠神经功能的恢复并缩小脑梗死体积，其机制可能与调控血管新生相关因子eNOS、NO表达增多有关。     

电针时间对急性心肌缺血大鼠保护作用及心肌核转录因子-κB表达水平的影响

目的 观察电针时间对急性心肌缺血大鼠心脏保护作用及对心肌核转录因子-κB(nuclear transcrip-tic factor-κB,NF-κB)表达的影响,探讨电针干预急性心肌缺血的机制.方法 将SD大鼠随机分成正常组、模型组和电针即刻组、电针1d组、电针3d组、电针5d组、电针7d组,每组6只.采用结扎心脏冠状动脉左前降支法制备急性心肌缺血大鼠模型.电针心经"神门-通里"段,每次30 min,频率2 Hz、强度为1 mA的断续波分别进行即刻、1 d、3 d、5 d、7 d的电针治疗.用PowerLab 16导生理记录仪记录心电图;酶联免疫法检测血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、缺血修饰白蛋白(ischemia modified albumin,IMA)水平;Western blot检测心肌组织NF-κB蛋白表达水平,荧光定量PCR检测NF-κB mRNA表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠ST段抬高,血清CK、CK-MB、IMA水平显著升高(P<0.05),NF-κB蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05).与模型组比较,即刻电针组大鼠血清IMA水平差异无统计学意义(P>0.05),CK、CK-MB水平显著降低(P<0.05),其他各电针组CK、CK-MB、IMA水平逐渐降低,以电针7 d组降低最为显著(P<0.05);即刻电针组、电针1 d组大鼠心肌组织中NF-κB蛋白及mRNA差异无统计学意义(P>0.05),电针1 d、3 d、5 d、7 d组表达水平呈下降趋势,以电针7 d组下降最为显著(P<0.05).结论 电针心经从第3天开始改善急性心肌缺血,且在治疗7 d后效果最为明显,其机制可能与逆转心肌组织NF-κB表达有关.     

程氏蠲痹汤加减方含药血清对佐剂性关节炎大鼠外周血单核细胞TNF=α和IL-1β表达的影响

目的 探讨程氏蠲痹汤加减方含药血清对体外培养的佐剂性关节炎（adjuvant arthritis, AA）大鼠外周血单核细胞中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1 beta,IL-1β）表达的影响。方法 将清洁级雄性SD大鼠随机分成6组：胎牛血清组、程氏蠲痹汤加减方（JBT）组、雷公藤多苷片（TGT）组、JBT+sc-13143组、正常大鼠血清组以及阴性对照组。采用皮内注射弗氏完全佐剂和冷水吹风刺激的方法复制风寒湿痹阻型AA模型。检测各组大鼠血清培养基中外周血单核细胞TNF-α和IL-1β的表达水平。结果 JBT组大鼠外周血单核细胞TNF-α和IL-1β表达水平明显降低，与胎牛血清组、正常大鼠血清组以及阴性对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。JBT+sc-13143组与JBT组TNF-α、IL-1β表达水平相比，差异也有统计学意义（P<0.05）。结论 程氏蠲痹汤加减方能有效下调AA大鼠外周血单核细胞TNF-α和IL-1β水平。     

消肿方对骨关节炎兔软骨下骨成骨细胞OPG及RANKL mRNA表达的影响

目的 观察消肿方对骨关节炎兔软骨下骨成骨细胞骨保护素（osteoprotegerin，OPG）及核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand，RANKL）mRNA表达的影响。方法 将30只新西兰大耳白兔随机分为空白对照组，模型组，消肿方低、中、高剂量组，每组6只。采用改良Hulth法复制膝关节骨关节炎模型，消肿方低、中、高剂量组分别给予40、80、160 g/kg消肿方煎剂灌胃，空白对照组和模型组分别以等容积生理盐水灌胃，共28 d。光镜下观察兔膝关节关节软骨下骨成骨细胞形态，采用RT-PCR法检测OPG、RANKL mRNA的表达。结果 空白对照组与模型组OPG mRNA表达水平比较，差异无统计学意义（P<0.05）；消肿方高、中、低剂量组OPG mRNA表达水平均较模型组显著升高（P<0.05），具有明显的剂量依赖性。模型组RANKL mRNA表达水平低于空白对照组，消肿方低、中、高剂量组RANKL mRNA表达水平较模型组逐渐降低，但差异均无统计学意义（P>0.05）；消肿方高剂量组RANKL mRNA表达水平显著低于低剂量组（P<0.05）。结论 消肿方可上调骨关节炎动物模型软骨下骨成骨细胞OPG mRNA表达，下调RANKL mRNA表达。     

补肾壮骨颗粒对原发性骨质疏松症大鼠生化指标和骨密度的影响

目的:探讨补肾壮骨类中药补肾壮骨颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松症的预防作用.方法:用切除卵巢的方法复制大鼠骨质疏松症模型,检测灌服高、中、低3种剂量的补肾壮骨颗粒后大鼠血清生化指标、尿生化指标、骨矿含量及骨密度指标的变化,并与模型组、假手术对照组和阳性对照组进行比较.结果:与模型组比较,3个剂量组的血清雌二醇(E2)和骨钙素(BGP)水平增高,尿钙/肌酐(Ca/Cr)、脱氧吡啶酚(DPD)和血清甲状旁腺素(PTH)水平降低,股骨钙(Ca)、磷(P)和骨密度亦增加.结论:补肾壮骨颗粒对去卵巢造成的大鼠骨质疏松症有明显的防治作用.     

补肾密骨片对去卵巢骨质疏松大鼠胫骨生物力学的影响

目的 探究补肾密骨片治疗骨质疏松的机制.方法 选择10月龄Wistar 大鼠,采用去除卵巢饲养1个月的方法复制骨质疏松症模型,模型复制成功后,采用补肾密骨片进行治疗,治疗4周和8周后,分别取各组胫骨测定抗弯强度、刚性系数、弹性模量最大挠度和韧性系数.结果与西药组和模型组比较,治疗4周后中药组胫骨抗弯强度和弹性模量显著增...     

卵巢老化相关基因筛选及针刺"肾俞"的干预作用

目的:筛选卵巢老化及针刺“肾俞”干预的相关基因。方法:建立自然的更年期大鼠模型,实验动物包括青年组、更年组、针刺组,采用mRNA差异显示PCR技术,筛选卵巢中差异表达的基因,其中部分进行克隆、测序,并与NCB I相关数据库进行同源性比较。结果:获得16条差异表达明显的cDNA片段,其中已测序的6条均为未知功能基因。结论:卵巢老化及针刺“肾俞”的干预效应可能是多基因参与作用的结果,对分离到的cDNA进一步研究有助于揭示其分子机制。     

补肾抗松丸对绝经后骨质疏松症患者骨密度的影响

目的:观察补肾抗松丸对绝经后骨质疏松症患者骨密度(BMD)的影响.方法:将84例绝经后骨质疏松症患者随机分为2组,观察组42例用补肾抗松丸加碳酸钙片治疗,对照组42例只用碳酸钙片治疗,疗程为6个月.治疗前后检测正位腰椎BMD,取第2-4腰椎BMD平均值,检查设备使用GE Lunar Prodigy型双能X线骨密度仪.结果:BMD与绝经年数的相关性分析显示,用药前两者呈显著负相关(r=0.254,P＜0.05),用药后两者无相关关系(r=-0.159,P＞0.05).观察组BMD自身前后比较显著增加(t=3.976,P＜0.01),与对照组比较,差异有显著性(t=3.297,P＜0.01;95%CI(0.010,0.042)).结论:绝经后骨质疏松症患者BMD呈逐年下降趋势,补肾抗松丸能逆转这个趋势,单纯服用钙片不能增加其BMD.     

内异止痛方直肠用药对子宫内膜异位症痛经患者血清癌抗原125和血管内皮生长因子的影响

目的 观察内异止痛方直肠用药治疗子宫内膜异位症痛经的临床疗效及其对血清癌抗原125（cancer antigen 125, CA125）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的影响。方法 将60例子宫内膜异位症痛经患者随机分为治疗组与对照组各30例。治疗组予内异止痛方灌肠，对照组予散结镇痛胶囊口服。两组均以15 d为1个疗程，连续治疗3个疗程，随访3个月后评估临床疗效及治疗前后CA125、VEGF的变化。结果 两组治疗后血清CA125、VEGF水平均较治疗前明显下降（P<0.05），治疗组CA125、VEGF水平下降程度明显大于对照组（P<0.05）；治疗组临床疗效优于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 内异止痛方直肠用药通过降低血清CA125和VEGF水平治疗子宫内膜异位症痛经。     

补肾颗粒延缓衰老作用研究

目的：研究补肾颗粒延缓衰老作用。方法：大鼠、小鼠以D—半乳糖皮下注射50d复制模型成亚急性衰老模型动物,观察灌胃给予补肾颗粒对亚急性衰老模型小鼠的耐低氧、抗疲劳、学习记忆能力的影响及对模型大鼠血清自由基指标的影响。结果：补肾颗粒可显著延长模型小鼠的耐低氧时间和游泳时间,显著延长跳台试验触电潜伏期、减少错误反应次数,显著升高模型大鼠血清超氧化物歧化酶活力水平、降低血清丙二醛含量。结论：补肾颗粒具有显著延缓衰老作用,其作用机制可能与其清除自由基有关。     

心通口服液治疗急性心肌梗死的代谢组学研究

目的 应用非靶向代谢组学技术，筛选得到急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）模型大鼠与心痛口服液治疗后AMI模型大鼠的差异代谢物及代谢通路，探讨心通口服液治疗AMI的作用机制。方法 通过左冠状动脉前降支结扎手术建立AMI大鼠模型，对动物进行分组给药，评价心通口服液的治疗效果，运用超高效液相色谱—四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱对实验动物血清进行代谢组学分析，利用软件分析以及数据库检索筛选差异代谢物以及代谢通路。结果 大鼠心脏组织病理切片显示，模型组大鼠心肌细胞排列紊乱，心通口服液可明显逆转AMI对心肌细胞的损伤；代谢组学结果显示，心通口服液可以使胆碱、甜菜碱、硬脂酸、棕榈酸等16个代谢物发生改变，通过代谢通路富集分析发现心通口服液的治疗作用可能与不饱和脂肪酸的生物合成，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢以及花生四烯酸代谢等代谢通路有关。结论 心通口服液能够改善AMI大鼠心脏组织的病理变化，通过调控相关代谢通路及相关代谢产物的表达，达到平衡脂质代谢与氨基酸代谢的目的，达到对AMI的治疗作用。     

健脾补肺化痰方通过调节肠道菌群及其代谢产物组胺治疗小鼠缓解期支气管哮喘

目的 观察健脾补肺化痰方对支气管哮喘缓解期小鼠肠道微生物群的影响。方法 通过卵白蛋白联合Al(OH)3致敏雾化建立缓解期哮喘模型，将模型复制成功的小鼠随机分为模型组、健脾补肺化痰方组、孟鲁司特钠组，每组8只，分别予以生理盐水、健脾补肺化痰方溶液、孟鲁司特钠溶液，另设空白组8只。采用肺通气功能试验检测第1秒用力呼气量/用力肺活量、用力呼气量为25%~75%肺活量时的平均流量/用力肺活量；苏木精—伊红染色观察肺组织与结肠组织的病理变化；夹心酶联免疫吸附试验检测血清、粪便中组胺水平；采用16S rDNA高通量测序对肠道菌群进行检测。结果 与空白组比较，模型组小鼠结肠组织与肺组织存在病理改变，肺通气功能显著下降(P<0.05)，血清中组胺水平明显升高(P<0.05)，粪便中组胺水平与拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)、普氏菌科(Prevotellaceae)群落丰度降低(P<0.05)，厚壁菌门(Firmicutes)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)群落丰度明显升高(P<0.05)。与模型组比较，健脾补肺化痰方组结肠组织与肺组织的病变得到缓解，肺功能提高(P<0.05)，血清中组胺水平下降(P<0.05)，粪便中组胺水平与拟杆菌门、放线菌门、普氏菌科、紫单胞菌科(Porphyromonadaceae)群落丰度升高(P<0.05)，厚壁菌门和毛螺菌科群落丰度下降(P<0.05)。拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门与肺功能、组胺水平具有相关性。结论 健脾补肺化痰方可通过调节肠道菌群及其代谢产物组胺治疗缓解期支气管哮喘。