骨髓移植引出的个体识别问题

骨髓移植,即造血干细胞移植,是通过异体或自体的造血干细胞植入受体内而获得造血和免疫功能重建的医疗手段。异体移植时,由于康复后的患者体内拥有的是供者的造血系统,其血液系统的DNA多态型将改变成同供者相一致,这无疑将使法医学的个体识别遇上难题。自1999年以来,我们先后对六例骨髓移植患者进行了术前9个STR基因座的基因型留档,术后9个STR基因座的基因型跟踪随访,并对由此引出的个体识别问题进行了探讨。1材料和方法1.1检材6例骨髓移植病例均由上海市第一人民医院血液科提供。检材包括供者血样、患者术前血样和术后血样、以及骨髓、…     

异基因骨髓移植后基因型分析

近十年来,采用外周血干细胞、脐血干细胞以及骨髓移植术治疗各种血液恶性疾病病例逐年增加[1]。本文对2001~2005年受理鉴定的73例异基因骨髓移植患者的DNA分型资料进行分析。讨论骨髓移植后STR标记变化对个人识别和亲权鉴定可能出现的影响。1材料与方法1.1材料2001~2005年我室受理73例骨髓移植患者(男性48例,女性25例;年龄最小8岁,最大50岁,平均年龄31.75岁)的资料,检测样本由武汉市同济医院、协和医院及市中心医院血液内科送检。73例移植病例中,骨髓移植9例,外周血干细胞移植56例,骨髓、外周血干细胞混合移植3例,脐血干细胞移植4例,脐血…     

干细胞移植患者不同组织STR基因型分型比较

<正>近年来,异基因造血干细胞移植术在血液系统及自身免疫系统疾病治疗中得到广泛应用。为有效监测患者体内移植干细胞的生长情况,判断移植是否成功,常采用能有效区分患者及供者基因分型的PCR-STR技术进行参考。除再生障碍性贫血患者外,如检测结果中患者外周血液中基因型呈完全嵌合型(供者细胞嵌合率95%)或为供体-受体嵌合型(供者细胞嵌合率5%~95%),表示移植手术成功;如为受者型(供者     

50例强奸案混合斑中精子ABO基因分型

自 1990年Yamamoto[1] 报道了ABO基因的核苷酸序列以来 ,国内外学者们致力于建立ABO基因型的测定方法 ,如PCR RFLP法[2 ] 、PCR 直接测序[3] 、PCR SSCP法[4 ] 等。但由于ABO基因分型操作烦琐 ,个体识别率低 ,很少被应用于法庭科学实践。本研究对HerrinG[5] 方法进行改良 ,运用PCR RFLP技术 ,检测 5 0例经STR认定的强奸案混合斑中的精子ABO基因型和犯罪嫌疑人血痕的ABO基因型 ,并探讨ABO基因分型在实际检案中的可信性及应用价值。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　样本　 5 0例强奸案中的混合斑检材和案犯血痕 (北京市公安…     

云南怒族人群HPRTB、DXS7423、DXS101基因座遗传多态性

HPRTB、DXS7423、DXS101是X染色体上常见的3个STR基因座,定位于Xq22.1-Xq28,其核心序列分别为AGTA、TCCA和CTT-ATT,本文对3个X-STR基因座的等位基因频率和基因型频率数据进行调查,为法医学检案提供基础遗传频率数据。1材料与方法1.1样本采集100份无血缘关系的怒族健康个体静脉血在云南随机采集,每份3m l,EDTA抗凝,-70℃保存[1]。1.2方法1.2.1 DNA提取及扩增Chelex-100法提取基因组DNA[2]。3个基因座引物序列及扩增条件见表1。表1 3个基因座的引物信息及扩增条件基因座PCR引物序列(5’to3’)变性退火延伸循环数HPRTBA…     

哈尔滨地区汉族人群G1m(3)因子的基因频率分布调查

<正> 应用Dot—ELISA法对哈尔滨地区汉族人群738名无关个体的G1m(3)因子的基因频率分布进行了调查,现报道如下。1材料与方法1.1样品的采集与处理 当地医院血库提供的哈尔滨地区738名无关个体的健康人静脉血,滴加在96孔培养板的各孔内,置室温干燥后备检。1.2试剂与检测方法 酶标抗G1m(3)单克隆抗体,由公安部物证鉴定中心提供。检测方法按文献[1]进行。1.3基因频率计算[2]:基因频率计算按公式进行,即G1m(3)基因频率= (3)因子频率;识别能力(DP)=1-各表型频率平方和。     

DYS413基因座单倍型在山西汉族人群中的频率分布

1997年Malaspina[1] 报道的DYS4 13(YCAIII)STR基因座 ,在不同个体重复次数不同 ,具有个体差异性。随后Kayser等[2 ] 和Scozzari等[3] 对其在不同人群中的分布频率进行了调查 ,Kayser等[4 ] 还对其突变情况进行了研究 ,证实DYS4 13具有很好的遗传多态性和稳定性 ,是法医学和人类遗传学研究的理想遗传标记。国内郑秀芬[5] 也对DYS4 13的基本特性进行了报道。本文作者通过对 180例山西汉族无关个体DYS4 13基因座的分布频率进行调查 ,为其在法医学和人类遗传学方面的研究和应用提供了依据 ,现报道如下。1　材料和方法采集 180例山西…     

HUMCYAR04基因座扩增片段长度多态性

HUMCYAR04基因座是Holly等人[1]报道的一个短串联重复序列（STR）基因座。笔者根据本实验室的条件，以中国人为研究对象，进行了此基因座的扩增和频率调查，并用于法医物证常见的血痕、混合斑的检验，取得了较好的效果。材料和方法一、实验材料1．血液取自昆明及玉溪地区191名无关汉族个体的静脉血，构椽酸钠抗凝；2混合斑及组织决、血痕血样实验室办案中积累；3．家系血样自愿者提供；4HUMCYAR04序列[1]：5’GGTAAGCAGGTACTTAGTTAGCTAC－3’；5’－GTTACAGTGAGCCAAGGTCGTGAG－3’。由北京赛百盛（美国）生物工…     

江苏地区汉族人群15个STR基因座频率调查

采用五色荧光标记引物复合扩增技术 ,对江苏地区 12 0名汉族无关个体进行了 15个STR基因座的基因分型 ,旨在为法医学应用提供基础资料。1　材料和方法12 0例无关汉族个体的血样均系本实验室日常检案积累 ;所有样本的DNA均用硅珠法[2 ] 或Chelex[1]法提取后 ,参照AmpF1STRIdentifiler试剂盒 (PE公司 )及ABI310型遗传分析仪的使用说明书进行扩增和检测 ,并分别计算 15个基因座的基因频率、杂合度(H)、个体识别率 (Dp)及多态信息量 (PIC)。2　结果和讨论12 0例无关个体的 15个STR基因座的等位基因频率见表 1。对每个基因座进行 χ2 …     

中国北方汉族和南方黎族RHCE基因分型

目的建立应用PCR技术进行RHCE基因分型的方法。方法应用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)检测200例中国北方汉族、南方黎族个体的RHCE基因型,同时对5例亲子鉴定样品进行检测。结果2个民族个体RHCE基因分型结果与血清学分型结果完全一致;其中中国北方汉族RH基因型频率分布为RHCCEE1例,RHCCEe3例,RHCCee88例,RHCcEE4例,RHCcEe20例,RHCcee54例,RHccEE1例,RHccEe22例,RHccee7例;中国南方黎族RH基因型频率分布为RHCCEE2例,RHCCEe2例,RHCCee106例,RHCcEE7例,RHCcEe62例,RHCcee10例,RHccEE3例,RHccEe8例。亲子鉴定样品RHCE基因型检测结果与13个STR位点联合鉴定结论一致。结论PCR-SSP技术能准确判断中国北方汉族和南方黎族个体的RHCE基因型。     

应用PCR-RFLP调查武汉汉族人群PGM1基因型

目的PCR RFLP技术调查武汉地区汉族人群PGM 1基因型。方法应用PCR RFLP技术检测PGM 1基因型 ,调查 3 0 0例汉族无关个体。扩增PGM 1基因外显子 4和 8中的靶片段 ,并分别经过Bg1Ⅱ和NlaⅢ限制酶消化。酶切片段经聚丙烯酰胺凝胶电泳分型。结果PGM 1 RFLP技术可分出 9种基因型 ,在汉族人群 ,PGM 1 RFLP系统的个体识别能力为 0 745 0。与传统的PAGE酶型检测比较 ,本法不能区分 1+ 2 -和 1-2 +型 ,不能检测出PGM 1稀有基因 ,但克服了IEF无法分析微量、陈旧材料的缺点 ,对保存 2 5年陈旧血痕及 0 1ng模板DNA均能成功分型。 结论PGM 1 RFLP技术在法医个体识别中有实用价值     

超出等位基因阶梯范围的基因峰与三带型等位基因的鉴别

目前国内外法医学亲子鉴定和个体识别的主要技术方法是短串联重复序列(STR)基因座分型方法[1]。随着技术的不断进步,市场上出现多种商业STR荧光标记复合扩增试剂盒,所标记的STR基因座也在不断增加[2-5]。常染色体上单个STR基因座在PCR扩增正常情况下,纯合子个体的毛细管电泳图谱表现为1个基因峰,杂合子个体表现为2个基因峰。极少数个体的STR分型图谱会出现三带型,即出现3个基因峰[6-9]。法医工作者需要有丰富的经验对在实验中所发现的单个基因座上出现3个基因峰的情况进行分析,并判断3个峰的真实性。     

5个Y-STR基因座复合扩增及其单倍型

多个Y STR基因座复合扩增在国内外已得到应用[1、2 ] 。本文作者报道用银染法复合扩增DYS389II、DYS389I、DYS390、GATA A7 2和DYS393等 5个Y STR基因座 ,并对广东汉族 4 15名无关男性个体进行基因分型调查。1　材料和方法1 1　材料4 15份广东汉族无关男性个体血样来自本室日常检案标本 ,用Chelex 10 0法提取DNA。1 2　引物序列DYS389Ⅱ、DYS389Ⅰ、DYS390、GATA A7 2和DYS393等 5个基因座引物序列见文献 [3、 4 ],由上海生物工程有限公司合成。1 3　PCR扩增条件总体积 2 5 μl,内含dNTP 4 2 0 μmol/L ,MgCl23 0mm…     

哈尔滨(地区)汉族人群F13A01、FESFPS、vWA基因座多态性

参照美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司Ｇｅｎｅｐｒｉｎｔ试剂盒提供的方法 ,采用Ｆ13Ａ0 1、ＦＥＳＦＰＳ、ｖＷＡ三基因座复合扩增技术 ,对哈尔滨 (地区 )汉族人群中 16 3个无关个体的 3个基因座进行基因频率分布调查 ,现报告如下。1　结果与讨论通过对 16 3名无关个体的血样经酚、氯仿萃取法提取ＤＮＡ ,ＰＣＲ扩增 ,用标准等位基因作参照物 ,电泳分离 ,银染检测后 ,进行ＤＮＡ分型和统计学分析。Ｆ13Ａ0 1基因座观察到 4个等位基因 ,9个基因型 ;ＦＥＳＦＰＳ基因座观察到6个等位基因 ,13个基因型 ;ｖＷＡ基因座观察到 8个等位基因 ,2 3个基因型 ;…     

盐城地区汉族人群15个STR基因座的遗传多态性

本文利用复合STR技术,应用PowerPlex(16System试剂盒对213名盐城地区汉族无关个体进行15个基因座的遗传多态性调查。现报道如下:1材料与方法213名盐城地区汉族无关个体血样,全部为本实验室办案积累。chelex法[1]或硅珠法[2]提取血样DNA,应用PowerPlex(16System试剂盒复合扩增,扩增体系10μl,热循环参数和电泳体系各组份配比按试剂盒所附操作手册设置。主要仪器:ABI9700扩增仪、ABI3100-Avant基因分析仪。对基因型数据作χ2检验。利用PowerStats分析软件对群体数据进行处理,得到15个STR基因座的杂合度(H)、个体识别能力(DP值)、偶…     

大连地区汉族人群4个STR基因座的多态性

采用 310型DNA全自动测序仪 ,选用商品化试剂盒AmpFeSTRTM Confiler (PE公司 ) ,复合扩增D16S5 39、CSF1PO、TPOX和TH0 14个STR基因座 ,对大连地区汉族人群进行了基因频率调查 ,现将调查结果报道如下。1　材料和方法6 10份血液来源于大连市中心血站无关个体 ,采用chelex 10 0法[1] [2 ] 提取DNA后采用 310型DNA全自动测序仪 ,按AmpFeSTRTM Confiler试剂盒说明书进行扩增和检测。用GenescanTM 分析软件分析结果并自动比对。2　结果与讨论4个STR基因座的等位基因在大连地区汉族人群中的分布频率见表 1;杂合度 (H)、H期标…     

STR基因座三带型等位基因的统计学分析

目的探讨STR基因座三带型等位基因的统计学方法。方法对8846份无关个体的静脉血或血痕样本利用磁珠法提取血液DNA，通过复合荧光扩增和毛细管电泳得到STR基因型，采用GeneMapperIDv3．2软件分析STR基因型，并通过直接计数法检测三带型基因型频率，公式计算三带型等位基因频率，并推导三带型统计学分析在亲缘鉴定及个体识别中的公式。结果8846份样本中，共检出4例三带型等位基因和3种三带型基因型。且发现等位基因基因频率的乘积与实际发生率差异具有统计学意义，并成功推导出三带型在亲缘鉴定及个体识别中的公式。结论三带型等位基因某两个等住基因作为整体在群体中遗传的频率可用这两个等位基因频率的乘积进行估算。     

两种方法相结合获取衣物脱落上皮细胞DNA 1例

在DNA检验中,提取衣物上脱落细胞的方法很多,如剪取法、生物脱落细胞提取仪吸取法等。有时衣物这类载体上遗留的脱落细胞可能来源于两个或更多的个体,检测结果表现为混合样本,在没有供者样本的情况下,很难辨识其中的个体。本文结合了上述两种方法收集某案件中现场衣服上的脱落细胞,     

北京地区汉族人群SE33基因座遗传多态性

SE33基因座是短串联重复序列STR基因座,位于人类6号染色体长臂,核心序列为AAAG,片段大小在203~333之间。本文对北京地区汉族人群206例无关个体的血样进行SE33基因座多态性调查,现报道如下。1材料和方法206份北京地区汉族无关个体血样。Chelex-100法提取DNA;PowerPlex SE33基因座扩增试剂盒(Promega,美国)(详见试剂盒说明)、9700基因扩增仪扩增;产物用AB I 3100基因分析仪进行分离和检测;Genescan和Genetyper软件进行结果分析。运用统计学计算通用公式[1]进行统计学分析。2结果和讨论206例无关个体的SE33基因座分型结果见表1。表1…     

移植时间和检测方法与allo-HSCT受者的DNA嵌合率及法医学意义

影响allo-HSCT受者DNA嵌合率的因素有很多:如受者的疾病类型、移植前预处理方案、移植时病情的严重程度、造血干细胞来源、局部的GVHD、HLA是否相合等。本文主要讨论与法医学关系最为密切的2个影响因素,即移植后时间和检测方法的灵敏度。法医物证学工作者在检案实践中,对allo-HSCT受者进行亲权鉴定或个体识别时,需注意移植后时间和检测方法的灵敏度对嵌合率的影响。女性受者接受男性供者HSCT的情况下,受者毛囊中可以检出供者Y染色体DNA,检案实践中来源于犯罪现场的生物检材不能仅仅检测Y染色体特异遗传标记,以免导致错误判断。