应用PCR-SSCP技术检测PGM1基因型

目的应用PCR-SSCP技术分型PGM1基因型.方法提取156份武汉地区汉族无关个体的血样DNA,分别扩增PGM1基因外显子4和外显子8的多态性靶DNA,用SSCP分析PCR产物,判断基因型.结果两种PCR产物均检出了两个等位基因、三种基因型,DP值分别为0.5620、0.4405.综合外显子4和8的PCR-SSCP结果,分出8种PGM 1基因型,DP值为0.731 8.应用本法对保存10年的陈旧血痕和精斑PGM1分型成功.结论用PCR-SSCP分型PGM1基因型在法医物证检验中具有实用价值.     

PCR-RFLP技术鉴定ABO基因型的法医学应用研究

目的 建立 PCR－ RFLP、非变性 PAG胶垂直电泳和银染技术进行 ABO基因分型的方法体系,并对 200名广东汉族人群 ABO基因型频率进行了调查。方法 用 Chelex－ 100和酚、氯仿抽提法处理样本, PCR扩增后用非变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳和银染技术检测分型。结果 ABO位点特异性扩增片段长度为 175bp～ 210bp, 6种基因型频率分布为 0.025 0～ 0.430 0,杂合度 H值为 0.516 2,个体识别力 DP值为 0.711 1。结论 该方法可成功运用于血液、血痕、精斑、毛发、骨组织和混合斑等检材的个体识别及亲权鉴定的检验。     

用FLDAS-PCR和PCR-RFLP检测汉族人群GPT的多态性

目的 建立片段长度差异等位基因特异性PCR(FLDAS-PCR)检测GPT基因型的新方法,并调查武汉地区汉族人群GPT多态性分布。方法 应用FLDAS-PCR、PCR-RFLP分别对武汉地区248例汉族个体进行GPT基因型分型。结果 FLDAS-PCR与PCR-RFLP分型结果完全一致,GPT的3种基因型分型明确,基因频率GPT*1=0.5423,GPT*2=0.4577,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论 FLDAS-PCR和PCR-RFSP分型GPT在法医学鉴定中有实用价值。     

KCNQ1内含子1a中STR基因座遗传多态性及PIA分型

目的调查汉族群体KCNQ1基因内含子1a中STR基因座的遗传多态性,并采用PIA分型技术确定等位基因的亲代来源。方法用PCR-STR分型技术对230例武汉汉族无关个体样本进行KCNQ1基因内含子1a中STR基因座分型检测;同时选用两种甲基化敏感的限制酶（msRE）HhaI和HpaⅡ对家系中孩子的基因组DNA进行消化后,采用PIA分型技术检测父源等位基因。结果KCNQ1内含子1a中STR基因座在汉族人群中检出10个等位基因、24种基因型,其个体识别能力（PD）、多态性信息含量（PIC）和非父排除率（PE）分别为0．852、0．66和0．484。HhaI和HpaII可消化个体的母源等位基因,PIA分型仅能检测出单一的父源等位基因。结论KCNQ1内含子1a中STR基因座在汉族群体具有较高的遗传多态性,PIA分型技术可以确定个体等位基因的亲代来源,具有较高的法医学应用价值。     

线粒体DNA的PCR-RFLP分型法医学应用研究

目的建立PCR RFLP技术检测mtDNA序列多态性的方法,调查武汉汉族人群mtDNAHVⅠ区段限制性片段长度多态性,并对PCR RFLP技术在毛干、指甲等生物检材的个体识别案件中的应用进行评估。方法应用nest PCR技术和RFLP技术建立检测mtDNAHVⅠ区段限制性片段长度多态性的方法,调查150例武汉汉族人群无关个体,同时对实际案件中的毛干、陈旧骨骼、水浸血痕等不同种类、不同保存时间和条件的生物检材进行检测。结果RsaⅠ酶切检出4种表型,频率分别为0.760、0.167、0.066和0.007,遗传差异度(GD值)为0.393,随机匹配概率(P值)为0.607。应用PCR RFLP对毛干、20年陈旧骨骼、水浸血痕进行了检测以及在个体识别及母子关系亲子鉴定案例中应用。结论用PCR RFLP法检测mtDNA序列多态性在法医物证检验中具有应用价值。     

PCR－RFLP技术鉴定ABO基因型的法医学应用研究

目的建立PCR－RFLP、非变性PAG胶垂直电泳和银染技术进行ABO基因分型的方法体系,并对200名广东汉族人群ABO基因型频率进行了调查。方法用Chelex－100和酚、氯仿抽提法处理样本,PCR扩增后用非变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳和银染技术检测分型。结果ABO位点特异性扩增片段长度为175bp～210bp,6种基因型频率分布为0.0250～0.4300,杂合度H值为0.5162,个体识别力DP值为0.7111。结论该方法可成功运用于血液、血痕、精斑、毛发、骨组织和混合斑等检材的个体识别及亲权鉴定的检验。     

用新设计引物调查武汉汉族Penta D和Penta E基因座遗传多态性

目的　研究PentaD和PentaE基因座分型引物设计 ,调查PentaD和PentaE基因座在武汉汉族人群中的遗传多态性。方法　用重新设计的PentaD和PentaE基因座分型引物 ,采用热启动PCR和PAGE技术对 2 81名武汉地区汉族无关个体进行分型调查 ,并将其分型结果与Promega公司的PowerPlexTM16系统荧光标记复合扩增试剂盒分型结果进行比较。结果　新设计引物扩增产物的片段大小范围分别为 15 3～ 198bp和 10 7～ 2 12bp ,其分型结果与PowerPlexTM16系统的分型结果完全一致 ,且用银染法检测的灵敏度显著提高 (由 0 5ng提高到 0 2ng)。PentaD和PentaE基因座在武汉汉族群体分别检出 10个和 2 1个等位基因 ,其基因型频率分布均符合Hardy Weinberg平衡。家系调查证实了其等位基因的传递符合孟德尔遗传规律。两基因座的个体识别能力 (DP)分别为 0 92 62、 0 9860 ,非父排除率 (PE)分别为 0 665 1、 0 83 2 5。结论　新设计引物用于PentaD和PentaE基因座的分型检测准确可靠 ,两基因座多态性程度高 ,在法医学个人识别和亲子鉴定中具有使用价值。     

50例强奸案混合斑中精子ABO基因分型

自 1990年Yamamoto[1] 报道了ABO基因的核苷酸序列以来 ,国内外学者们致力于建立ABO基因型的测定方法 ,如PCR RFLP法[2 ] 、PCR 直接测序[3] 、PCR SSCP法[4 ] 等。但由于ABO基因分型操作烦琐 ,个体识别率低 ,很少被应用于法庭科学实践。本研究对HerrinG[5] 方法进行改良 ,运用PCR RFLP技术 ,检测 5 0例经STR认定的强奸案混合斑中的精子ABO基因型和犯罪嫌疑人血痕的ABO基因型 ,并探讨ABO基因分型在实际检案中的可信性及应用价值。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　样本　 5 0例强奸案中的混合斑检材和案犯血痕 (北京市公安…     

中国北方汉族和南方黎族RHCE基因分型

目的建立应用PCR技术进行RHCE基因分型的方法。方法应用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)检测200例中国北方汉族、南方黎族个体的RHCE基因型,同时对5例亲子鉴定样品进行检测。结果2个民族个体RHCE基因分型结果与血清学分型结果完全一致;其中中国北方汉族RH基因型频率分布为RHCCEE1例,RHCCEe3例,RHCCee88例,RHCcEE4例,RHCcEe20例,RHCcee54例,RHccEE1例,RHccEe22例,RHccee7例;中国南方黎族RH基因型频率分布为RHCCEE2例,RHCCEe2例,RHCCee106例,RHCcEE7例,RHCcEe62例,RHCcee10例,RHccEE3例,RHccEe8例。亲子鉴定样品RHCE基因型检测结果与13个STR位点联合鉴定结论一致。结论PCR-SSP技术能准确判断中国北方汉族和南方黎族个体的RHCE基因型。     

武汉汉族人群STR基因座D3S1358、D13S317、D12S391的多态性研究

目的　调查中国武汉地区汉族人群STR基因座—D3S1 358、D1 3S31 7、D1 2S391基因频率分布和群体遗传数据。方法　从 2 0 8个汉族无关个体收集血液标本 ,应用PCR技术及聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳对D3S1 358、D1 3S31 7和D1 2S391基因座分型。结果　D3S1 358检出 7个等位基因和 4 1个基因型。三基因座基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。观察 2 31次减数分裂均未发现突变基因。另外 ,调查结果计算显示D3S1 358、D1 3S31 7和D1 2S391基因座的杂合度 (H)分别为 0 70 98、 0 80 56和 0 84 0 0 ;三个人识别能力 (DP)分别为 0 851 6、 0 9332和 0 952 3;非父排除率 ( pE)分别为 0 4 463、 0 60 1 6和 0 681 8。结论　D3S1 358、D1 3S31 7和D1 2S391基因座在群体遗传学研究和法医学亲子鉴定及个人识别中具有较高实用价值     

16个线粒体DNASNP复合检测体系的建立

目的建立一种复合检测线粒体DNA（mtDNA）单核苷酸多态性（SNP）分型的方法。方法通过设计等位基因特异性引物并结合毛细管电泳分型技术平台,建立包含16个mtDNASNP位点的复合扩增检测体系。对50名汉族无关个体血样进行mtDNASNP检测,并通过直接测序法对其分型结果进行验证。结果50个样本经本检测体系复合扩增后,均得到清晰的SNP分型结果,当模板量在0．5～10pg时能得到较理想的分型图谱。样本的复合检测结果与直接测序法结果完全一致。结论建立的复合检测体系检测mtDNASNP方法灵敏度高、操作简便、分型准确,为针对mtDNA进行简便、有效的中高通量多态性分型提供了一种新方法。     

PCR-RFLP在mtDNA多态性分析中的应用

目的探讨PCR-RFLP法在mtDNA多态性分析中的应用价值。方法应用限制酶RsaI和MnlI消化mtDNA D-LOOP区（HVI16106～16297）PCR扩增产物,聚丙烯凝胶电泳进行RFLP分型,对不同PCR-RFLP分型扩增产物进行测序,并对150例辽宁汉族随机个体及30例真三联家系血样进行检验。结果在150例随机个体中,RsaI和MnlI酶切分别发现3和8种表型,DNA测序结果和PAGE分型结果一致,GD值分别为0.107,0.670。联合两种酶切,发现12种表型,GD值为0.708。在30个家系中,母子的RFLP带型完全相同。结论 PCR-RFLP法适合在基层实验室mtDNA分析中应用。     

3种国产化试剂盒与Identifiler^TM试剂盒检验结果比较

目的比较3种常用国产化PCR扩增试剂盒与IdentifilerTM试剂盒的检验结果。方法对455份中国汉族无关个体血样,分别用IdentifilerTM、DNA TyperTM15、GoldenEye 16BT、AGCU17＋1 4种试剂盒进行检测,对其中共有的11个基因座位分型结果进行比较,并对有差异的样本进行测序分析。结果 3种国产化试剂盒在455份样本中,发现4例样本的分型结果有差异,差异率为0.88%。其中,DNA TyperTM15试剂盒CSF1PO基因座发现1例等位基因丢失,AGCU17＋1试剂盒D18S51基因座发现1例等位基因扩增不平衡,测序结果表明,2例均系点突变导致;GoldenEye16BT试剂盒D21S11基因座发现2例假3峰型,其中1例测序未发现碱基突变,分析3峰原因可能是stutter滑脱峰所致。结论与IdentifilerTM试剂盒比较,3种国产化试剂盒均有分型差异现象,成因不同,在实践中应给予注意。     

ABO genotyping by polymerase chain reaction.

ABO blood group system's genotyping by polymerase chain reaction in genomic DNA level is developed. The positions of nucleotide 258 and 700 of cDNA from A transferase were used to distinguish A, B, and O alleles by restriction enzyme digestion. To identify the 258th nucleotide, a 199- or 200-bp DNA fragment was amplified by PCR and digested with Kpn I. For the 700th nucleotide, a 128-bp PCR amplified fragment was designed and digested with Alu I. By examining the DNA fragment digested patterns, ABO genotypes were easily determined. Results obtained using this method on 20 ABO-known peripheral blood samples showed that this new technique could provide accurate ABO genotype. Biologic forensic samples, such as, blood stains, saliva stains, semen stains, hair, bone tissue, and semen contaminated with vaginal secretion were also successfully typed. This rapid, sensitive and reliable method should be applicable not only in forensic identification but also in medical examination.     

印记基因KCNQ1的遗传多态性及在亲权鉴定中的应用

目的为了调查印记基因KCNQ1的STR位点在中国汉族人群中的遗传多态性，利用亲源印记等位基因（parentally imprinting allele，PIA）分型法确定孩子的等位基因亲代来源，为亲权鉴定提供新的侯选STR位点。方法应用Chelex法提取153例佳木斯地区汉族健康无血缘关系个体DNA，用QIAamp Blood Kit（Qiagen）法提取3个家庭10个个体DNA，PCR扩增，凝胶电泳分型，ABIPRISM^TM 3730XL DNA测序仪测序；甲基化敏感性限制性内切酶消化孩子基因组DNA，PCR扩增，确定孩子等位基因的亲代来源。结果发现在中国佳木斯地区汉族人群中KCNQ1基因的STR有7个等位基因，多态信息含量为0．662，且KCNQ1基因的STR位点呈父源印记。结论印记基因KCNQ1的STR位点有很好的多态性，可为亲权鉴定提供新的侯选遗传标记，其亲源特异性甲基化标记有望应用于单亲鉴定中。     

中国北方汉族人群HLA-DQα基因型及其等位基因频率的分布

应用PCR和等位基因特异性寡该苷酸（ASO）探针杂交技术对中国北方汉族人群的HLA－DQα基因进行分型。在246例无关个体中观察到4种等位基因组成的10种基因型。等位基因频率分布在10．0～31．9％之间。基因型的分布符合Hardy－Weinberg定律。DP值为0．8669。对6个家系49个个体的调查表明，HLA－DQα基因按孟德尔方式遗传。不同人群HLA－DQα的DP值比较，中国人群高于其它人群。     

Y—STR基因座分型缺失分析

目的分析Y—STR基因座等位基因分型缺失数据,为法医学提供应用参考。方法收集浙江汉族4477名无关男性个体血样,自动工作站磁珠法提取DNA,Y—filer^TM试剂盒进行复合扩增,Gene Mapper IDv3．2分析软件分析Y-STR数据,统计出现基因分型缺失的概率。结果在4477名无关个体的Y—STR数据中,有来自23种单倍型的26个样本Y-STR分型各有1个短片段基因座的基因分型缺失,而其它长片段基因座的分型均完全正常。基因分型缺失的发生频率为0．518％。结论Y-STR基因座分型缺失具有一定的发生率,在日常检案中应注意防止误判。     

Application of HLA-DRB1 genotyping by oligonucleotide micro-array technology in forensic medicine

The human leukocyte antigen (HLA) system is known to be the most complex polymorphic system in the human genome. Among all of the HLA loci, HLA-DRB1 has the second largest number of alleles. The purpose of this study is to develop an oligonucleotide micro-array based HLA-DRB1 typing system for use in forensic identification, anthropology, tissue transplantation, and other genetic research fields. The system was developed by analyzing the HLA-DRB1 (DRB1) genotypes in 1198 unrelated healthy Chinese Han individuals originating from various parts of China and residing in Shanghai, China. METHOD: Polymerase chain reaction (PCR) coupled with the oligonucleotide micro-array technology was used to detect and type HLA-DRB1 alleles of the sample individuals. The reliability, sensitivity, consistency and specificity were evaluated for use in forensic identification. Furthermore, a meta-analysis was carried out by comparing the allele frequencies of the HLA-DRB1 locus with those of other Chinese Han groups, Chinese minorities and other ethnic populations. RESULTS: All the DNA samples yielded a 273 bp amplification product, with no other amplification products in this length range. The minimum quantity of DNA detected by this method is 15 ng in a PCR reaction system of 25 microl. The population studied appeared to be not in Hardy-Weinberg equilibrium. Observed heterozygosity (Ho), expected heterozygosity (He), expected probability of exclusion (PE), polymorphic information content (PIC), and discrimination power (DP) of the HLA-DRB1 locus from the Shanghai Han ethnic group were evaluated to be 0.8022, 0.8870, 0.7741, 0.8771, 0.9750, respectively. A total of 25 HLA-DRB1 alleles were identified. HLA-DRB1*09XX, *04XX, *12XX and *15XX were the most frequent DRB1 alleles, which were observed in 58.76% of the sample. One hundred and sixteen genotypes were found. The five most frequent genotypes were: *04XX/*04XX (0.0626), *09XX/*09XX (0.0593), *04XX/*09XX (0.0551), *09XX/*15XX (0.0384) and *08XX/*12XX (0.0351). The meta-analysis showed that there were uniquely distributed features of DRB1 alleles among various ethnic populations and among the studied population groups from various regions with the same ethnic origin. CONCLUSIONS: An HLA-DRB1 genotyping system has been developed and established based on the oligonucleotide micro-array technology. The HLA-DRB1 typing of the Han population in Shanghai has revealed a relatively high heterogeneity. Information obtained in this study will be useful for medical and forensic applications as well as in anthropology research. Large-scale micro-array detection is highly accurate and reliable for DNA-based HLA-DRB1 genotyping. These results suggest that HLA-DRB1 DNA polymorphisms and the database of the Shanghai Han group have useful applications in processing forensic casework (as personal identification, paternity test), tracing population migration and genetic diagnosis.     

D19S400基因座在中国3个汉族群体与日本人中的遗传多态性研究

为了解中国广州、吉林、成都三个地区汉族和日本人群体D19540O基因座基因频率分布，并获得中国三个汉族群体和日本群体D19M00基因座的群体遗传数据，比较它们之间的遗传学差异，探究在法医学应用中的意义。应用PCR扩增技术，聚丙烯酸胺凝胶垂直板电泳对D19S400基因座分型。在四个群体469个个体中共检出11个等位基因，45种基因型，基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡。各群体的观察杂合度为0.75～0.84，非父排除概率为0.6057～0.6582，个人识别机率为0．9301～0．9480。四个群体之间基因频率分布无显著性差异（P＞0．05）。结果表明，D19S400基因座在群体遗传学研究和法医学个人识别中有较高应用价值。