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正石蜡包埋骨组织切片标本是临床病理和法医鉴定中重要的个人实物档案,由于特殊需要,有时需对石蜡骨组织切片标本进行同一认定,与常规的血痕、唾液斑及新鲜组织不同,骨组织经甲醛等化学试剂固定、脱钙处理后的DNA更容易降解,石蜡包埋的骨组织切片能否有效提取出DNA是成功进行同一认定的 相似文献
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Triton X-100快速提取甲醛固定、石蜡包埋组织内DNA的方法 总被引:8,自引:0,他引:8
目的建立一种快速提取甲醛固定、石蜡包埋组织内DNA的方法。方法利用TritonX-100一步提取甲醛固定、石蜡包埋组织内DNA,并具体研究了不同浓度TritonX-100对提取后DNA-STR分型效果的影响。结果成功地一步提取出甲醛固定、石蜡包埋组织内DNA,浓度为1%的TritonX-100提取效果较好。结论利用TritonX-100提取甲醛固定、石蜡包埋组织内的DNA,为快速提取DNA提供了有效的途径,是法科学领域中一种值得推荐的方法。 相似文献
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甲醛固定石蜡包埋组织STR分型检测 总被引:3,自引:1,他引:2
目的评估10%甲醛固定石蜡包埋组织STR分型结果的影响因素。方法采用QIAGEN法、IQ法、Chelex法对2具新鲜尸体在尸检时常规制备的心、脑、肝、脾、肾、肺、胃、肠石蜡包埋组织进行DNA提取,用AmpFlSTR Identifiler试剂盒进行PCR扩增,在3100-Avant上完成片段分析。另外对15个案例中室温保存1~5年的心、肝、肺、肠存档石蜡包埋组织共56份采用同样的方法进行STR分型。以STR基因座检出率评估分型有效性。结果各种组织DNA片段均随着保存时间延长而持续降解,其中心、肺组织STR基因座检出率与保存时间存在线性相关。相同保存时间时,各种组织基因座检出率差异有统计学意义。其中以肺组织在不同保存时间中基因座检出率最高。结论在甲醛固定时间一定的条件下,存放时间、组织类型、DNA提取方法和PCR模板质量浓度是影响石蜡包埋组织STR分型的重要因素。 相似文献
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目的比较甲醛固定石蜡包埋尸检组织中三种提取DNA的方法对DNA质量的影响,寻找一种操作简便、污染较少、经济实用的石蜡包埋组织中提取DNA的方法。方法选取经甲醛固定石蜡包埋的心肌组织20例,分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒法提取DNA,进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280值及PCR扩增。结果改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法抽提DNA法、二甲苯脱蜡-酚氯仿法分别与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较,均有显著性意义(P〈0.01)。二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所提取DNA的A260/A280值相比较,无显著性意义(P〉0.05)。以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板,扩增的目的条带亮度与阳性对照相当。结论结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法。 相似文献
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福尔马林固定石蜡包埋组织中DNA提取 总被引:4,自引:0,他引:4
由于甲醛介导的DNA损伤和石蜡对DNA提取的阻碍作用,使得常规DNA提取方法很难从福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中获取高质量的DNA。近年来,众多学者的研究表明,通过改良预处理方法,优化蛋白酶K消化作用,简化DNA提取步骤,纯化DNA提取物等,可以有效提高FFPET中提取的DNA质量,为FFPET的DNA分析奠定了基础。 相似文献
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目的探讨普通甲醛对人体组织DNA的影响及提高STR检出率的手段。方法取少量石蜡包埋组织,65℃水浴脱蜡,Chelex-100法提取DNA,PCR扩增,循环次数分别为28次和28 6次,扩增产物经310型测序检测。结果普通甲醛固定5d以内的组织基本上可检出Amel及15个STR基因座,固定时间延长,检出率下降;PCR循环次数增加,灵敏度增加,但有错误分型的情况。结论普通甲醛固定时间长短直接影响PCR-STR的检验,减少模板量有利于PCR反应成功,PCR次数为28 6时,灵敏度增加,但应谨慎判读结果,以免错误分型。 相似文献
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目的 探讨普通甲醛对人体组织DNA的影响及提高STR检出率的手段。方法 取少量石蜡包埋组织。65℃水浴脱蜡。Chelex-100法提取DNA,PCR扩增,循环次数分别为28次和28+6次,扩增产物经310型测序检测。结果 普通甲醛固定5d以内的组织基本上可检出Amel及15个STR基因座,固定时间延长,检出率下降;PCR循环次数增加,灵敏度增加,但有错误分型的情况。结论 普通甲醛固定时间长短直接影响PCR—STR的检验,减少模板量有利于PCR反应成功,PCR次数为28+6时,灵敏度增加。但应谨慎判读结果,以免错误分型。 相似文献
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改良醋酸铵盐析法提取福尔马林固定石蜡包埋组织DNA 总被引:2,自引:1,他引:1
目的采用改良醋酸铵盐析法提取福尔马林固定石蜡包埋组织DNA,并评价其应用价值。方法取死后24h内人体肾组织用10%中性福尔马林溶液固定7d,石蜡包埋。采用酚/氯仿法、Chelex-100法及改良醋酸铵盐析法提取DNA。经用紫外分光光度计法、AGE及PCR-PAGE检测比较不同方法提取DNA的质量。结果改良醋酸铵盐析法、酚/氯仿法、Chelex-100法OD260/OD280比值分别为1.962±0.195、2.110±0.470、1.018±0.124,两两比较均有显著性差异(P<0.05);3种方法提取DNA含量(μg)分别为0.515±0.447、0.328±0.345、5.346±1.994;AGE电泳图谱可印证上述结果;PCR-PAGE检测显示改良醋酸铵盐析法提取DNA的谱带清晰度好于其它两种方法。结论改良醋酸铵盐析法更适合微量福尔马林固定石蜡包埋组织样本DNA的提取。 相似文献
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目的通过对X染色体SNP遗传标记的检测,探讨甲醛固定组织块的DNA分型策略。方法提取甲醛固定组织块的DNA,在用SinofilerTM试剂盒、MiniFilerTM试剂盒检测未能获得分型结果的情形下,采用多重PCR和飞行质谱技术对X染色体上的51个SNP位点进行分型检测。结果对于常染色体STR、miniSTR分型失败的甲醛固定组织块,X-SNP分型获得成功。结论对于甲醛固定组织块等微量、降解的生物学检材,若常染色体STR基因座分型失败,可尝试进行SNP位点的分型,以获得更多的遗传信息。 相似文献
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甲醛固定组织的DNA提取 总被引:4,自引:0,他引:4
在法医物证检验中,分子量大于23kb的DNA分子可以直接作出指纹图谱,部分降解的DNA分子可以通过PCR扩增进行检验。但对甲醛处理的组织,用上述提取方法,只能得到已严重降解的小分子DNA,并由于甲醛溶液的影响,无法进行VNTR-PCR检验。因此,如何从甲醛处理的各种组织中提取大分子DNA是一个迫切需要解决的问题。本文摸索出从甲醛处理的组织中提取大分子DNA的方法。同时研究了固定时间对提取DNA质量的影响,找到了适合DNA释放的最佳PK酶解条件,包括离子强度、反应体系、酶解时间、温度等。材料与方法1.组织的处理取自同一个… 相似文献
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6 DNA技术的法医学应用 DNA(deoxyribonucleic acid)系人类遗传基因中的脱氧核糖核酸分子,由于其独特的分子排列和具有某些遗传特性。1985年在英国首次将此技术用于犯罪调查中的个人识别与同一认定。许多学者认为:DNA技术的个人识别价值高于指纹。由于含DNA的生物检材分布广泛(几乎所有的人体组织和体液)、检验技术灵敏度高、特异性强,又具有其它法医物证检验方法所不具备的个人指认性,因此,DNA技术在法庭科学上的应用被誉为一场犯罪调查领域内的革命。 相似文献
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福尔马林固定石蜡包埋组织3种DNA提取方法比较 总被引:1,自引:1,他引:0
目的探讨经福尔马林固定1d石蜡包埋组织(FFPET)提取DNA的简易有效方法。方法比较水浴加热、微波加热和二甲苯脱蜡的效果。组织脱蜡后分别采用Chelex-100+层析柱纯化法、DNA IQTM试剂盒磁珠提取法和Chelex-100+磁珠纯化法提取DNA;实时荧光定量PCR技术定量DNA;荧光标记毛细管电泳技术进行STR分型。结果二甲苯脱蜡的效果好于其他两种加热的脱蜡方法(P<0.05)。Chelex-100+层析柱纯化所获得的DNA量显著高于其他两种方法(P<0.05)。结论二甲苯脱蜡、Chelex-100+层析柱纯化法是一种简单、有效的FFPET处理方法。 相似文献
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目的建立并优化HE染色切片组织STR分型方法,评估HE染色切片组织的STR分型有效性。方法用QIAgen法提取2例尸检人体的心、肝、肺、肠等8种组织的HE染色切片DNA,用TaqMan荧光探针法通过荧光域值循环数(Ct值)测定获得各提取液中的DNA质量浓度,以阳性内对照(internal posi-tive control,IPC)监测PCR过程中的抑制水平。再用Identifiler试剂盒扩增,在3100-Avant上进行STR片段分析。结果在本研究建立优化的STR分型技术条件下,8种人体组织的HE染色切片DNA提取液质量浓度均可达到1ng/μL以上,其IPC的Ct值提示无PCR抑制剂。HE染色切片组织的STR分型有效性与石蜡包埋组织相当,其DNA随时间延续而缓慢降解。结论在一定保存时限内,HE染色切片的DNA质和量可以满足STR分型检测需要,但受残余甲醛固定剂的影响,HE染色切片的分型成功率随保存时间延长而降低。 相似文献
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不同染色组织切片及不同组织固定方法对检测STR基因座的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
目的探讨不同染色组织切片及不同组织固定方法对DNA检验的影响。方法采用Chelex100法及浓缩纯化方法提取DNA,PCR扩增后310型遗传分析仪检测。结果福尔马林固定4天以内或70%乙醇、无水乙醇分别固定1年及15年的HE染色切片可以检见Amel及9个STR基因座。PTAH等5种特殊染色未能检出相应基因座DNA谱带。结论70%乙醇或无水乙醇固定组织,石腊包埋组织及HE染色切片可以作为DNA?STR检验鉴定的样本材料。 相似文献