MiSeq FGx~(TM)系统进行基因突变亲权鉴定1例

<正>1材料与方法1.1 DNA提取及定量样本来源于本实验室日常案件中经ID-PLUS检测存在STR遗传位点突变的三联体的FTA唾液口腔卡,并使用Qiagen DNA Investigator试剂盒(Qiagen公司)提取样本DNA。样本DNA采用Qubit?3.0荧光定量仪(Life Technologies公司)进行DNA浓度检测,并将浓度稀释到0.2ng/μL[1]。     

河南汉族群体4个X-STR基因座遗传多态性

本文报道河南汉族群体DXS6804、DXS6799、DXS7130、DXS67894个X—STR基因座基因频率调查。1材料与方法 1．1样本来源及DNA提取在知情同意情况下采集河南地区汉族135名无关男性和142名无关女性个体血样本,共计277份。用苯酚／氯仿方法提取基因组DNA。     

浙江汉族人群15个STR基因座遗传多态性

本文应用PowerPlex 16荧光标记复合扩增系统,对浙江汉族510名无关个体15个STR基因座进行遗传学调查,现报道如下:1材料与方法1.1样本510名浙江汉族无关个体的血样来自浙江全省各地,系本实验室日常检案积累。1.2实验方法所有血样均采用硅珠法提取DNA[1]。参照文献[2]采用10μl扩增反应体系,其中包括:Gold STR 10×Buffer 1μl,Taq Gold DNA聚合酶0.3μl,10×Primer PairM ix 1μl,模板DNA 1μl(DNA量控制在0.5~1ng),用无菌去离子水补足体系,混匀,稍加离心后置AB I 9700型扩增仪中进行扩增。热循环参数为:95℃11m in,96℃1m in,然…     

闽南地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性调查

本文通过对中国闽南地区汉族15个STR基因座遗传多态性的研究,旨在获得该地区人群的基因频率等遗传学数据,为完善我国STR基因数据库,广泛开展人类群体遗传学及法医个体识别等研究提供基础资料。1材料和方法1.1样本122份无关个体EDTA抗凝血样本采自调查证实三代以上居住于福建省安溪县与南安市的汉族群体,其中男性90例、女性32例。血样本用EP管分装,-30℃冰冻保存。1.2DNA提取及定量取血样3.5μl,常规Chelex-100法[1]提取DNA,溴化乙锭荧光法[2]测DNA含量。1.3PCR复合扩增采用AmpFLSTRIdentifilerPCR扩增试剂盒(美国ABI公司),…     

21三体综合征鉴定分析1例

本文笔者在2000多例亲子鉴定案例中检出1例21三体综合征（Down＇s syndrome）,其1个位于21号染色体的STR基因座图谱表现为3个峰,现分析如下。1案例资料1.1样本及DNA提取受理亲子鉴定案1例。样本：父亲（27岁）,母亲（31岁）,争议女儿（2岁）3人末梢血各一份,采用Chelex-100法提取DNA[1]。     

江苏地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性

<正>本文采用Identifiler荧光标记复合扩增系统,对江苏地区583名汉族无关个体15个STR基因座遗传多态性进行调查,为相关人群法医学个人识别和亲权鉴定提供基础数据。1材料与方法1.1样本583份无血缘关系汉族个体口腔FTA卡样本(男495份,女88份),均为本实验室DNA数据库和日常检案积累。1.2 DNA分型检验采用Chelex法[1]提取样本模板DNA;采用     

青海省蒙古族15个STR位点遗传分析

本文对居住在青海省蒙古族的126个无关健康个体,进行D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818和FGA等15个STR基因座遗传学调查,结果报告如下。1材料与方法样本青海地区的126个无关健康知情个体血痕(三代以内居住在本地区)。DNA提取及扩增基因组DNA用Chelex-100进行提取[1]。使用AmpFLSTR Identifiler试剂盒进行15个常染色体PCR复合扩增。扩增总体系10μl,其中0.9μl(2ng/μl)DNA样本,2.9μl双蒸水,4μl dNTP,0.2μl金牌酶,2.0μl引物。用…     

D1S1656基因座三带型等位基因分析1例

<正>1材料与方法1.1样本来源本研究样本为实验室某DNA建库人员口腔拭子以及其父母双亲的口腔拭子。1.2 DNA检验1.2.1 STR基因座检测使用打孔器在建库人员口腔拭子FTA卡(Whatman公司,英国)上取直径为1.2mm的样     

国产Goldeneye~(TM) 20A试剂盒性能指标验证

目的测试国产GoldeneyeTM20A试剂盒技术性能指标,评估其法医学应用能力。方法从方法学验证、准确性、峰值均衡性、灵敏度、批次间试剂及稳定性测试、耐受性、不同检材的适应性与一致性、种属特异性、混合样本等9个方面对GoldeneyeTM20A试剂盒进行测试。结果阳性DNA样本分型正确,内标和等位基因分型标准物符合要求;等位基因间的均衡性≥83%,同一荧光标记基因座间的均衡性≥55%,不同标记物间的均衡性≥52%;0.125ng DNA阳性样本可检出全部STR基因座分型,不同批次间和反复冻融后试剂盒测试可以获得正确分型,对降解检材和混有抑制剂的样本等具有一定的耐受性,能对案件中多种检材进行分型且分型结果一致,具有一定的种属特异性和混合DNA样本检测能力。结论国产GoldeneyeTM 20A试剂盒可用于法庭科学实际检案与建库。     

D2S1338基因座等位基因丢失1例

<正>1案例资料1.1样本与检测某区县公安局送检的未知名尸体心血(滤纸)。采用Chelex-100法提取样本基因组DNA,分别用Identifiler-Plus和MiniFiler复合扩增系统进行复合扩增,扩增产物用ABI 3130XL型DNA测序仪检测,数据收集及分析采用GeneMapper 3.2软件。     

甘肃甘南藏族人群21个非CODIS基因座的遗传多态性

正本研究采用AGCU 21+1荧光标记复合扩增系统对515例甘肃甘南藏族健康无关个体的21个常染色体非CODIS基因座进行遗传多态性分析,旨在为法医遗传学研究提供基础数据。1材料与方法根据知情同意原则,随机采集祖孙三代居住在甘肃甘南藏族自治州的藏族健康无亲缘关系个体FTA卡血痕样本515例,其中男性305例,女性210例。采用AGCU 21+1 STR荧光检测试剂盒(无锡中德美联生物技术有限公司)直接扩增血样DNA,样本     

压力循环技术用于人指甲DNA提取及方法学评价

目的将压力循环技术（PCT）用于指甲DNA提取,并对方法学进行评价。方法收集10份人指甲样本,剪碎约为1mm×1mm大小,采用10%漂白粉水,10%SDS,10%漂白粉水,无菌水清洗样本。10份样本各分成两组,1组用压力循环技术处理,另1组不作处理,提取DNA经复合扩增并进行STR分型检测,用于评价压力循环技术的作用。取5份指甲样本用血浸泡,5份用去离子水浸泡,之后采用上述清洗方法各清洗1-3次,收集各次清洗用的无菌水提取DNA,经STR分型检测,用于评价清洗对去除外源性DNA的效果。结果 10份经压力循环技术处理的样本中有7例比相应未经处理样本DNA提取量更高,但两组进行统计学处理,差异不具有统计学意义（P〉0.05）;两组样本中提取DNA含量在0.026 ng以上的样本均得到完整的STR分型,与相应口腔拭子样本对照准确无误。血污染和非血污染样本清洗二次以上,均可避免外源性DNA的污染。结论使用压力循环技术并配合本文清洗方法,可有效提高人指甲DNA的提取效率,并避免外源性生物DNA的干扰,保证DNA分型结果的准确。     

粪便DNA提取及检验

目的　研究人类粪便DNA的提取和检验方法。方法　 8人份粪便样本 ,磁珠法提取DNA后 ,进行STR复合扩增和mtDNAHVI区测序分析。结果　用 2种方法提取的粪便DNA ,STR复合扩增检验均未获成功 ;方法1提取的粪便DNA有 6个样本、方法 2有 7个样本获得了清晰可读的mtDNAHVI区序列 ,并与唾液对照样本DNA的序列完全一致。结论　用本文建立的方法提取粪便DNA ,不适于STR分析 ,可通过mtDNA测序分析进行检验。     

MagAttract~M48试剂盒在案例骨骼检验中的应用

<正>陈旧性骨骼DNA检验的关键环节之一是模板DNA的提取及纯化,本文采用MagAttractM48 DNAManual试剂盒(QIAGEN公司,简称M48试剂盒)对陈旧降解骨骼样本进行检验,结果如下。1材料与方法1.1样本及预处理肱骨、胫骨各1根,取自2具无名白骨化尸体,尸体发现地点分别为树林和自家房内。根据调查分析     

IDentifier DNA分型盒（炎黄34）的法医学验证及应用评估

目的 测试IDentifier DNA分型盒(炎黄34)的技术性能指标,评估其法医学应用价值。方法 根据《法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂质量基本要求》(GB/T 37226—2018),从种属特异性、分型准确性、灵敏度、适应性、耐受性、一致性、均衡性、反应条件验证、混合样本、稳定性、批间差11个方面对IDentifier DNA分型盒(炎黄34)进行测试。比较IDentifier DNA分型盒(炎黄34)与Power Plex^?Fusion 6C系统、Versa Plex^?27PY系统、Veri Filer^TM Plus PCR扩增试剂盒的系统效能。使用IDentifier DNA分型盒(炎黄34)检测日常案件中的拭子类生物检材,观察其STR检验结果 。结果 IDentifier DNA分型盒(炎黄34)具有良好的种属特异性、分型准确性、适应性、耐受性和均衡性,灵敏度可达0.062 5 ng,能检测案件中不同类型的检材、降解检材及混有抑制剂的检材,对混合比例为4∶1以内的样本均能获得完整分型。该试剂盒的系统效...     

4种固相颗粒吸附法提取滤纸血痕DNA效果的比较

目的探讨4种固相颗粒吸附法提取滤纸血痕样本DNA的效果。方法含有1μL静脉血的滤纸血痕180份,分为4组,每组45份。分别采用4种固相颗粒吸附法(DNAIQ~(TM)系统、D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规的硅珠法)对上述样本进行DNA提取,对比各组DNA溶液的浓度及STR分型检验结果。结果 D盾超敏DNA提取试剂盒[(3.764±1.790)μg/mL]、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒(3.634±1.112)及常规硅珠法(3.350±1.250)提取到DNA溶液的浓度无统计学差异(P0.05),但均高于DNA IQ~(TM)系统(1.864±1.207)(P0.001);D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒及常规硅珠法样本图谱峰高大于DNA IQ~(TM)系统(P0.001),超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规硅珠法样本图谱峰高大于D盾超敏DNA提取试剂盒(P0.01)。结论 D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒及常规硅珠法对于滤纸血痕的DNA提取效率高于DNA IQ~(TM)系统;超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规硅珠提取到的DNA溶液可能具有更高的质量。     

使用QIAamp DNA Stool MiniKit提取粪便DNA并检验

笔者应用QIAamp DNA Stool Mini Kit(QIAGEN公司)提取粪便DNA,并用不同试剂盒进行了对比试验,以寻找合适的检测方法. 1 材料和方法 1.1 样本 自愿者提供的粪便样本15份,于-20℃保存,粪便样本提供者提供的唾液样本15份.     

云南地区彝族人群17个STR基因座的遗传多态性

本文对中国云南地区彝族390个健康无关个体进行17个STR基因座遗传多态性调查。采用Chelex-100法提取样本DNA,用AGCU 17+1 STR荧光检测试剂盒进行扩增及检测。上述17个STR基因座共检出191个等位基因和704种基因型,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05),在所调查的彝族人群具有较好识别能力。     

利用DNA鉴定方法破获一起假冒涮羊肉案

摘要：目的对疑似羊肉的一份食品检材进行种属鉴定。方法提取样本DNA，扩增线粒体DNA12SrRNA基因片段，进行DNA序列分析，测序结果在GenBank上进行BLAST搜索，与数据库中相关物种序列进行同源性分析。结果从送检样品中成功地提取到了基因组DNA，12SrRNA基因片段扩增产物的碱基序列与家鸭的同源性达到100％。结论送检的肌肉样本的种属为家鸭。关键词：DNA：12SrRNA：种属鉴定     

河北汉族人群X染色体3个STR基因座遗传多态性

本文调查了X染色体3个STR基因座在河北汉族人群中的遗传多态性,现报道如下。1材料与方法1.1材料血液样本来自河北汉族无关个体,男114名,女118名。1.2方法血液样本用酚-氯仿法提取DNA。3个基因座的引物序列参照基因组数据库(www.gdb.org),由北京赛百盛生物工程有限公司合成。扩增采用20μl反应体系,其中包括:10×buffer 2.0μl,DXS6801、DXS7424、DXS9902引物浓度分别为1pmol/μl、0.5pmol/μl、1pmol/μl,模板20ng,25mmol/L MgC l21.2μl~1.6μl,TaqDNA聚合酶1U,10mmmol/L dNTP 0.2~0.4μl。热循环参数参考Edelmann等[1,2]人的…