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乌头碱对培养新生大鼠心室肌细胞Connexin43蛋白磷酸化的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的建立细胞水平的染毒模型,观察乌头碱对心肌细胞缝隙连接蛋白Connexin43(Cx43)的影响。方法实验分0.25、0.5、0.75、1.0、1.5和2.0μmol/L等6个不同浓度乌头碱染毒组,运用蛋白印迹法和免疫荧光技术,检测各组及对照组心肌细胞Cx43蛋白磷酸化状态的改变。结果蛋白印迹检测显示,不同浓度染毒组心肌细胞中Cx43蛋白总量与正常对照组无显著差异;0.5μmol/L乌头碱染毒后,Cx43开始出现脱磷酸化;当染毒浓度达到1.0μmol/L后,Cx43脱磷酸化显著,且1.5及2.0μmol/L染毒效果和1.0μmol/L染毒组相当。免疫荧光分析结果提示乌头碱作用后,心肌细胞Cx43蛋白在羧基端第368位点丝氨酸残基(Ser368)发生明显的脱磷酸化。结论一定浓度的乌头碱能诱导心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43发生显著脱磷酸化。 相似文献
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目的研究不同浓度乙醇与乌头碱联合染毒对大鼠心室肌细胞RYR~2蛋白表达的影响。方法用优化的方法进行新生大鼠心室肌细胞原代培养,设置4组实验组,分别为A、B、C、D组,即分别用1μmol/L乌头碱、5mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱、50mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱以及100mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱进行染毒,同时设立对照组(E组)。染毒1h后,用Western blot技术检测RYR~2蛋白含量,重复实验,将对所得数据进行统计分析。结果 1μmol/L乌头碱作用1h,使培养的大鼠心肌细胞RYR~2蛋白量增加;5mmol/L乙醇、50mmol/L乙醇分别与乌头碱联合染毒组中RYR~2蛋白表达量均较单独乌头碱染毒组低;100mmol/L乙醇-乌头碱联合染毒组RYR~2蛋白量与单独乌头碱染毒组相较未见明显差异。结论乙醇-乌头碱联合染毒对RYR~2的蛋白量有明显影响,不同浓度乙醇与乌头碱联合染毒对RYR~2的影响效果不一致,低浓度乙醇能拮抗乌头碱引起的RYR~2含量增加,随着乙醇浓度逐渐升高,拮抗作用逐渐减弱,且有向协同作用转化的趋势。 相似文献
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目的探讨乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响。方法新生SD大鼠20只,随机分为4组,取心室肌以差速贴壁法原代培养心室肌细胞。培养第6天,制成密度为2×105个细胞/mL的细胞悬液,分别加入乌头碱混合液至终浓度为0.1、0.5、1、2μmol/L,染毒30m in;采用彗星电泳技术及CASP分析软件,检测不同浓度乌头碱染毒后心室肌细胞DNA损伤程度。结果心肌细胞被不同浓度乌头碱染毒后,尾部DNA含量、彗尾长度、尾矩、O live尾矩均随乌头碱浓度增加而升高,头部DNA含量则逐渐降低,与对照组相比,有显著性差异(P<0.01);乌头碱染毒剂量越大,心肌细胞DNA损伤越严重。结论乌头碱染毒引起细胞DNA断裂损伤呈明显的剂量—效应关系,推测细胞DNA损伤是乌头碱毒作用机制之一。 相似文献
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目的建立抗体芯片竞争抑制法检测尿液中吗啡含量的方法。方法将吗啡单克隆抗体固定在用琼脂糖包被的芯片上,与含有吗啡的尿液检材和Cy3荧光标记-吗啡-BSA复合物进行竞争抑制反应,共聚焦扫描仪采集反应图像并进行分析。结果吗啡单克隆抗体及Cy3-吗啡-BSA的最佳浓度是31.25μg/m l、12.50μg/m l,检测线性范围0.01~10ng/m。回收率在91.2%~109.2%之间,尿液检测限为0.02ng/m l。甲基苯丙胺、安非他明与吗啡抗体之间无交叉反应,与可待因有一定的交叉反应。结论抗体芯片竞争抑制法检测尿液中的吗啡含量具有灵敏度高,特异性好、操作简单、高通量等优点,可用于法医毒物检测、戒毒效果监测。 相似文献
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目的应用气质联用仪(GC-MS),建立快速、灵敏地分析血液中丙泊酚的定性定量方法。方法血液1mL,加入内标,采用液液提取方法处理,GC-MS选择离子(SIM)模式测定。结果在0.1~10μg/mL范围呈良好的线性关系,相关系数R2为0.9931,最低检测限(LOD)为0.05μg/mL。结论所建立的方法简便、快速、特异性强、灵敏度高,可满足法庭毒物分析和临床毒物分析的需要。 相似文献
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目的建立离子液体分散液相微萃取-HPLC检测血浆中溴敌隆的方法。方法以1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([HMIM]PF6)为萃取剂,甲醇为分散剂,提取血浆中的溴敌隆,用HPLC分析其含量;考察了萃取剂和分散剂体积、样品pH值、NaCl浓度、萃取时间和离心时间等因素对萃取效率的影响。结果优化的溴敌隆分散液相微萃取操作条件为:萃取剂[HMIM]PF650μL,分散剂甲醇100μL,样品pH值5.0,萃取时间5min,离心时间8 min。方法的线性范围:0.01~5.0μg/mL,检测限:1.1 ng/mL(S/N3)。该法低、中、高浓度的平均加标回收率分别为76.4%,82.6%,92.1%,RSD分别为4.17%,2.99%,1.67%(n=6)。结论本方法检测血浆中的溴敌隆,简便快速、准确实用,满足中毒检测及临床诊断治疗的需要。 相似文献
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目的探讨Intermedin(IMD)对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的作用。方法72只健康雄性sD大鼠随机分为3组:对照组;缺血再灌注组(缺血1h再灌30min);IMD预处理组(缺血再灌注前30min静脉注射10^-7mol/LIMD)。检测血清中LDH、心肌中MDA和SOD活性;半定量实时荧光PCR法检测心肌降钙素受体样受体(ealcitonin receptor like receptor,CRLR)、受体活性修饰蛋白(receptor activity modiying protein,RAMP)1/2/3的mRNA表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌cAMP含量,SABC法检测Bcl-2/Bax蛋白表达及比值。结果与对照组比较,缺血再灌注组大鼠LDH、MDA分别升高87%和189%,SOD活性下降84%,IMD预处理组LDH、MDA均降低41%,SOD活性升高38%(均P〈0.01);实验组心肌CRLR、RAMPl/2/3的mRNA水平均明显上调(P〈0.05或P〈0.01),与对照组心肌cAMP相比,缺血再灌注组和IMD预处理组分别升高1.36、2.90倍(P〈0.05)。Bcl-2/Bax表达比值,缺血再灌注组较对照组降低,IMD预处理组亦低于对照组但高于缺血再灌注组2.225倍。结论IMD对大鼠急性缺血再灌注损伤的心肌有一定保护作用,减少缺血再灌所致的氧化应激,抑制心肌细胞凋亡可能是其作用机制之一。 相似文献
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体液中氟乙酰胺SPE-GC/MS检测 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 利用GC/MS与固相萃取 (SPE)技术相结合 ,开发血和尿样中氟乙酰胺鼠药的GC/MS定量分析新方法 ,并用于实际案例检测。方法 选择乙酰胺为内标 ,通过比较不同固相柱的萃取效率和不同条件对回收率的影响 ,优化用于血和尿样中氟乙酰胺萃取的固相柱和提取条件 ,利用氟乙酰胺与乙酰胺质谱图的分子离子峰面积之比与氟乙酰胺浓度的定量关系 ,建立血和尿样中氟乙酰胺鼠药的GC/MS定量分析新方法。结果 用硅胶柱萃取 ,峰面积之比与氟乙酰胺浓度在 5 0~ 90 μg/ml范围呈线性关系 ,检测限为 1 0 μg/ml。血样中氟乙酰胺检测的平均回收率达 91 6% ,标准偏差小于 7 3 %。结论 此法对实际样品的测定证明可满足氟乙酰胺鼠药中毒的定性定量要求。 相似文献
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氟乙酸五氟苄基酯的气相色谱分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 对氟乙酸根阴离子的衍生物-氟乙酸五氟苄基酯(PFB-MFA)进行了气相色谱分析,以满足氟乙酰胺类鼠药化验工作的需要。方法 使用GC/ECD、GC/MS Scan、GC/MS SIM对该化合物的标准溶液进行了分析,得到了各种分析方法的校正曲线及检测限。结果 三种方法测定PFB-MFA的线性范围分别为GC/ECD 0.01~0.1ng/μl、GC/MS SCAN 1~100ng/μl、GC/MS SIM 5×10~(-3)~1ng/μl。三种方法对氟乙酸根阴离子的检测限分别为:GC/ECD1.31×10~(-4)ng/μl、GC/MS SCAN 0.13ng/μl、GC/MS SIM 1.76×10~(-4)ng/μl。结论 氟乙酸根阴离子的衍生物氟乙酸五氟苄基酯在GC/ECD及GC/MS上具有一定的线性范围,有非常高的灵敏度,可用于法庭科学的定性定量分析。 相似文献
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目的建立顶空GC/FID分析血中乙醚的方法。方法用顶空GC/FID分析血中乙醚,并对萃取条件和色谱条件进行优化。结果方法的检出限为0.3ug/ml,回收率为81%,相对标准偏差为4.4%。结论该法简便、快速、灵敏,适合毒物分析检验的要求。 相似文献
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目的建立GC/MS分析被焚烧人体内脏组织中氯氮平的方法。方法采用试管超声提取、三氯甲烷浸提苯溶解、过柱净化的方法,以岛津QP5050ADB-5MS石英毛细柱分析结果。结果成功检出被焚烧人体内脏组织中氯氮平成分。结论该方法操作简单,准确可靠,适用于中毒及临床药物观察。 相似文献
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A liquid-chromatography-tandem-mass-spectrometry method using pneumatically assisted electrospray ionisation (LC-ESI-MS/MS) was developed for the simultaneous determination of γ-hydroxybutyric acid (GHB), γ-butyrolactone (GBL) and 1,4-butanediol (1,4-BD) in human ante-mortem and post-mortem whole blood. The blood proteins were precipitated using a mixture of methanol and acetonitrile, and the extract was cleaned-up by passage through a polymeric strong cation exchange sorbent. Separation of the analytes and their structural isomers was obtained using a column with a zwitterionic stationary phase. Matrix-matched calibrants, combined with isotope dilution, were used for quantitative analysis. GHB was determined in both positive and negative ion modes. The relative intra-laboratory reproducibility standard deviations were better than 10% and 6% for blood samples at concentrations of 2mg/L and 20-150mg/L, respectively. The mean true extraction recoveries were 80% for GHB and greater than 90% for GBL and 1,4-BD at concentration levels of 20-50mg/L. The limits of detection were approximately 0.5mg/L for GHB and GBL, and 0.02mg/L for 1,4-BD in ante-mortem blood. The corresponding lower limits of quantification were less than 1mg/L for GHB and GBL, and less than 0.1mg/L for 1,4-BD. GBL was unstable in whole blood freshly preserved with a sodium fluoride oxalate mixture, but the stability could be improved significantly by preservation with a sodium fluoride citrate EDTA mixture. 相似文献
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液固界面衍生化-GC-MS法同时检验3种常见阴离子毒物 总被引:1,自引:1,他引:0
目的建立GC-MS法同时检验氰离子、亚硝酸根离子、氟乙酸根离子的方法。方法首先用阴离子交换树脂吸附检材中的CN^-、NO2^-、FCH2 COO-^,再在树脂界面上进行五氟苄基溴衍生化反应,最后用GGMS法检验衍生化产物。结果成功地解决了衍生化前3种阴离子的提取、浓缩问题,使衍生化反应得以顺利进行,衍生化产物稳定,便于使用G&MS法检验。结论建立了一种同时检验3种常见阴离子毒物的有效方法,该方法简单、实用、灵敏、准确。 相似文献