口蹄疫病毒2C''3AB基因重组杆状病毒的构建及其表达

将含有口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白2C部分基因编码区及3AB完整基因编码区的基因片段2C'3AB重组于杆状病毒穿梭质粒pMelBac-B,经PCR、酶切及序列分析鉴定正确后,命名为pMel-2C'3AB.将重组穿梭质粒pMel-2C'3AB与杆状病毒骨架共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选及PCR鉴定,构建了含有目的基因的重组杆状病毒.用该病毒感染High Five细胞,细胞裂解液的SDS-PAGE电泳结果显示,出现一约为43ku的蛋白带,与预期大小一致;Western-blotting结果表明,该表达产物能被FMDV阳性血清及2C'3AB单克隆抗体识别;间接ELISA结果显示,表达的目的蛋白能与牛、羊、猪的O型FMDV阳性血清发生特异性反应.证实,FMDV 2C'3AB基因在昆虫细胞中得到了表达,且表达产物具有良好的反应活性.     

江苏人禽流感死亡病例始末

2007年11月24日,江苏南京24岁的患者陆侃出现发热、畏寒等症状;27日,陆侃以"左下肺炎"进入江苏省人民医院治疗;29日,陆侃出现呼吸频率过快,被转入ICU;随后以呼吸机辅助通气,并进行了血液透析;12月1日、2日,江苏省疾病预防控制中心与中国疾病预防控制中心分别对陆侃呼吸道样本进行检测,结     

基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍.将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的问接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化.确定的ELISA最佳条件为抗原包被浓度为2 μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释.确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35.将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%.表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测.     

ELISA抗体水平评价口蹄疫灭活疫苗免疫效果的可行性分析

为了探讨免疫抗体评价口蹄疫灭活疫苗效果的可行性,分别用5批次的口蹄疫O型-亚洲1型二价灭活疫苗(OS/99株+JSL/06株)、5批次的猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株+OS/99株)免疫动物,在攻毒的同时采血分离血清,用液相阻断ELISA测定抗体效价,以分析抗体效价与免疫保护的关系。统计学分析表明,二价灭活疫苗的O型免疫抗体值与攻毒保护率(概率单位)之间呈正相关关系(P<0.01),相关系数为0.986;亚洲1型免疫抗体值与攻毒保护率(概率单位)之间呈正相关关系(P<0.05),相关系数为0.997,猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫抗体值与攻毒保护率(概率单位)之间不呈正相关关系(P>0.05)。结果表明,应用抗体水平评价二价灭活疫苗的免疫效果是完全可行的,但用其评价猪O型灭活疫苗的免疫效果不具有可行性。     

产气荚膜梭菌plc基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

采用PCR方法扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,利用原核表达载体pGEX-6P-1构建重组质粒pGEX-plc,经双酶切和测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,表达产物经切胶纯化后作为免疫原制备多克隆抗体,应用间接ELISA和Western-blot方法对所得抗体进行检测。结果显示,经1.0mmol/L IPTG诱导4～5h后重组蛋白表达量最高,并且主要以包涵体的形式存在,分子质量为66ku。用间接ELISA方法检测的多抗血清效价达到1∶65 536。Western-blot结果证实,重组蛋白与制备的多克隆抗体发生特异性结合,具有良好的反应原性,而且多抗血清能够检测产气荚膜梭菌分泌的天然α毒素蛋白。上述结果表明,此多克隆抗体能够应用于临床诊断。     

鸡传染性喉气管炎病毒的荧光抗体检测

建立了一种鸡传染性喉气管炎 (ILT)的荧光抗体检测技术 ,用荧光素标记ILT兔源超免疫血清抗体 ,对 15份人工感染ILT病鸡、5份ND病鸡和 10份健康鸡的气管分泌物进行了检测 ,并对该技术做了特异性和敏感性测定。结果显示 ,人工感染ILT病鸡的阳性检出率高达10 0 % ,ND病鸡和健康鸡的阳性检出率均为 0 ;该ILT兔源超免疫血清荧光抗体检测技术特异性强、敏感性高     

狐狸脑炎抗体的检测方法比较研究

本试验用犬腺病毒(CAV)Ⅱ型狐狸脑炎疫苗免疫接种2～2.5月龄离乳仔狐,分别用血凝抑制试验(HI)、补体结合试验(CF)、中和试验(NT)检测免疫后不同时期狐狸脑炎抗体滴度,结果表明免疫后7天三种抗体均出现滴度,21～30天达到高峰,直至屠宰前保持不降(中和抗体滴度略有下降)。其中补体结合试验具有操作简单、重复性好、特异性高、结果可靠等优点,适合大批狐狸脑炎抗体的检测。     

猪流行性腹泻和传染性胃肠炎弱毒二联疫苗免疫抗体应答的研究

用猪流行性腹泻 (PED)和传染性胃肠炎 (TGE)弱毒二联疫苗 (下称二联苗 )免疫PED和TGE抗体阴性的妊娠母猪 ,仔猪出生后第 7、14、2 1和 2 8d抽取仔猪血样用微量血清中和试验检测血清抗体。结果 ,免疫母猪所产仔猪通过哺乳获得了相当高的血清抗体 ,在出生后第 7d时接近母体的中和抗体水平 ,并随日龄增大而下降。二联苗免疫母猪所生仔猪和相同株的PED、TGE疫苗株免疫母猪所生仔猪的血清抗体变化基本相似。用二联苗免疫PED和TGE抗体阴性的 10日龄仔猪 ,并于免疫后以 7d的间隔 ( 1月龄内 )或半月 ( 1月龄后 )间隔采取血样进行血清抗体检测。结果 ,用二联苗免疫抗体阴性的 10日龄仔猪 ,抗体在免疫后第 2 1d(TGE)或第 2 8d(PED)达到最高值 ,但抗体下降缓慢 ,在免疫后第 5月 ,免疫猪血清中仍能检测出抗体。相同弱毒株的PED和TGE疫苗免疫组的结果与之基本相同。提示 ,PED和TGE弱毒株联合免疫在诱导妊娠母猪和小猪产生抗体以及母猪产后向哺乳仔猪传递抗体方面未见有相互影响的现象。     

分泌抗人类血型-H抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株建立及初步应用

应用杂交瘤技术,建立了两株分泌抗 H 的单克隆抗体细胞株 H_(2-6)H_8和 B_(2-5)D_9。经体外培养半年以上,生物学性状稳定。两株细胞分泌的抗体属 IgM 类,特异性识别 H 型物质,与几种常见动物的红细胞无交叉反应。培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达1024倍和1.28×10~5倍,可用在中和试验、免疫斑点法中,在实际办案中应用理想。     

抗弓形虫独特型抗体的研究——抗弓形虫独特型抗体对小白鼠免疫保护试验

应用抗弓形虫McAb(Ab_1)免疫家兔制备poly抗Id(Ab_2)抗体免疫健康BALB/c小鼠,用弓形虫强毒(GJS)10~4攻击,进行免疫保护力效检。结果末经免疫的对照鼠5天内全部死亡,免疫鼠可存活11天陆继死亡。虫检率为100％,初步证明抗Id抗体做为弓形虫无病原抗原替代物,可诱导鼠体免疫应答,产生一定的免疫保护力、可延迟小鼠的死亡时间。提示抗弓形虫Id有进一步深入研究的价值。