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目的通过对DNA碱性裂解提取法进行优化和改进,建立一种操作更简便、检验快速、结果更可靠的生物检材DNA提取方法。方法以抗凝血作为检验样本,通过改变提取试剂的浓度、pH值、保存时间及孵化样本的温度、时间等条件,观测对检验结果峰值的影响,以确定提取试剂最佳条件,DNA提取物最佳保存条件。通过用改良后的碱性裂解法及Chelex100法同时提取不同量的抗凝血样本、各类法医生物检材,用不同厂家的DNA试剂盒扩增,对碱性裂解法的灵敏度、适应性和适用性进行评估。结果改良后的碱性裂解法只需将生物检材用NaOH(0.25mol/L)99℃孵化8min,振荡后加入TrisHCl(0.05mol/L,pH=6.5)中和液,离心后直接扩增检测。DNA提取物于-20℃冰箱可长期保存。对于毛发及精斑类检材优于Chelex100法。DNA提取物适用于现有各种DNA试剂盒扩增检测,其灵敏度与Chelex100法相似。结论改良后的碱性裂解法,操作简便、检验快速、结果可靠,可适合于法庭科学的检案与建库。 相似文献
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目的调查河南地区汉族人群14个STR基因座的遗传多态性。同时简要介绍本实验室建库流程。方法应用DNA Typer15TM Direct试剂盒检测359名河南地区汉族无关个体14个STR基因座的等位基因频率,并应用统计软件计算群体遗传学参数。结果 14个STR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),14个基因座的杂合度(H)在0.694~0.922之间,匹配概率(Pm)在0.017~0.131之间,个人识别率(PD)在0.869~0.983之间,多态信息含量(PIC)在0.670~0.910之间,非父排除概率(PE)在0.418~0.841之间。结论 14个STR基因座在河南汉族人群中有较高的多态性,所得的群体遗传学数据可为法医学个人识别和亲子鉴定提供结果评估的依据。应用DNA Typer 15TM Direct试剂盒构建DNA数据库简单经济实用。 相似文献
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在165名北方汉族男性无关个体中,10个基因座分别检出5、4、6、7、4、10、7、8、7、15个等位基因,共检出158种单倍型,单倍型基因多样性达0.9987;所建立的10个Y染色体STR基因座复合扩增系统,个体识别能力高,特异性好,分型结果可靠,对于研究群体遗传学以及个体识别和亲权鉴定具有重要的理论和实践意义。 相似文献
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关于Chelex 100提取DNA方法的进一步研究——延长保温时间对Chelex100提取DNA的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨用Chelex100法提取血斑DNA时,56℃保温时间、100℃保温时间长短对STR扩增的影响。方法分别改变提取过程中56℃和100℃保温时间,观察其扩增结果。结果56℃这一步骤的保温时间分别设为10min、30min和2h,100℃保温时间设为4min、8min、15min和30min,以上步骤所提取的DNA其扩增结果有明显的差异。结论在一定的时间范围内,每个STR基因座的峰值随着这两步骤保温时间的增加而增加。 相似文献
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目的建立DYF404S1a/b、DYF399S1 a/b/c、DYF403S1 a1-3/b、DYS576、DYS570、DYS627、DYS588、DYS447、DYS446、DYS449共10个Y-STR基因座的四色荧光复合扩增体系,调查河南汉族群体中的遗传多态性,评价其法医学应用价值。方法采集500名河南汉族男性个体血液样本,用6-FAM、HEX和TAMRA荧光染料分组标记10个Y-STR基因座,PCR扩增产物采用ABI3130XL遗传分析仪进行分离,Gene Mapper ID v3.2软件分型。结果采用本文方法,检测的最低基因组DNA量为0.05ng;群体调查在上述10个Y-STR基因座分别检测出8~28个等位基因,GD值在0.472 0~0.999 0范围之间,DP值在0.471 1~0.997 0之间。10个基因座所组成的单体型共观察到497种,其中仅出现1次的单体型有494种,HD值达到0.999 908 75,DC值为0.994 0。结论建立的10个Y-STR基因座荧光复合扩增体系灵敏度较高,在河南汉族群体中具有较高的遗传多态性,可以在相关研究和应用中选择使用。 相似文献
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