生物样品中去痛片4种成分及其8种代谢物的GC-MS/MS法检测

目的建立固相支撑液液萃取(supported liquid-liquid extraction,SLE),GC-MS/MS法同时测定生物样品中去痛片4种成分及其8种代谢物的方法,为去痛片相关案件的法医学鉴定提供依据。方法采用SLE萃取,GC-MS/MS检测,MRM记录方式,利用保留时间和离子对比例定性,内标法和工作曲线法定量,建立血液和组织中去痛片及其代谢物的GC-MS/MS检测方法。结果经SLE萃取,GC-MS/MS法同时检测大鼠血和组织中去痛片及其代谢物,萃取率为37.57%~95.87%,检测线性范围为0.12μg/m L~16.00μg/m L,相关系数(r)为0.989 6~0.999 7,LOD为0.23ng/m L~14.48ng/m L,检测准确度为79.63%~122.90%,日内和日间精密度分别为0.99%~7.43%和2.19%~10.6%。结论 SLE萃取、GC-MS/MS法可检测生物样品中去痛片成分及其代谢物,具有快速、简便、准确度和精密度高的特点,可应用于去痛片相关案件的法医学鉴定。     

血中水合氯醛及其代谢物的GC-MS/MS和HPLC-MS/MS检测

目的建立血液中水合氯醛及其代谢物的色谱串联质谱检测方法,用于法医案件的检验。方法血液检材经乙酸乙酯萃取后气质联用选择离子扫描(SIM)检测水合氯醛和三氯乙醇,经乙腈沉淀蛋白后液质联用负离子模式下多反应监测(MRM)检测三氯乙酸。结果水合氯醛及其代谢物的线性范围分别是100ng/mL～15μg/mL、500ng/mL～20μg/mL和500ng/mL～15μg/mL,线性关系良好,R~2均大于0.998,最低检出限分别为15ng/mL、130ng/mL和30ng/mL,最低定量限分别为50ng/mL、500ng/mL和100ng/mL;日内精密度分别在2.26%～7.31%、3.09%～7.23%和2.79%～5.37%;日间精密度分别在4.14%～7.03%、2.18%～4.43%和2.75%～4.96%;提取回收率分别为92.72%～106.30%、94.22%～103.70%和89.05%～104.50%。并对水合氯醛相关案件进行检测,心血中水合氯醛浓度为411.34ng/mL,三氯乙醇浓度为9.49μg/mL,三氯乙酸浓度为8.32μg/mL。结论本文建立的水合氯醛及其代谢物的检测方法准确简单快速,可应用于水合氯醛中毒案件的法医学鉴定。     

溴氰菊酯在急性中毒大鼠体内的分布

目的建立溴氰菊酯灌胃急性中毒大鼠模型及生物样品中溴氰菊酯的气相色谱-电子捕获检测器法(gas chromatography-electron capture detector,GC-ECD),研究溴氰菊酯在急性中毒大鼠体内的分布特征,为溴氰菊酯中毒案件的法医学鉴定提供参考依据。方法不同剂量(512和1024mg/kg)溴氰菊酯灌胃染毒大鼠后1.5 h处死,迅速解剖取血液、心、肝、肺、肾、脑等,样品经无水硫酸钠研磨,混合溶剂[V(石油醚)∶V(丙酮)=4∶1]浸提,GC-ECD法定量检测溴氰菊酯含量。结果溴氰菊酯与内源性杂质分离良好,血液和肝中溴氰菊酯定量限分别为0.1μg/mL和0.1μg/g(S/N≥10),血液中溴氰菊酯的回收率为91.55%~134.37%,日内精密度和日间精密度均小于5.67%。溴氰菊酯在512 mg/kg剂量灌胃染毒大鼠体内分布为:肺肝心肾血液脑;在1 024 mg/kg剂量灌胃染毒大鼠体内分布为:肺血液心肾脑肝(P0.05)。结论本研究建立的溴氰菊酯GC-ECD检测方法灵敏度高。溴氰菊酯在体内的分布存在剂量依赖,血液、心、肝、肺、肾、脑可作为体内溴氰菊酯分析的良好检材。     

QuEChERS-LC/MS快速检测兽用麻药“舒泰”

目的本文对兽药"舒泰"中有效成分进行了结构确证,并建立了生物检材中替来他明和唑拉西泮的快速检验方法。方法在血液和尿液的生物检材中,通过加标实验,经QuEChERS萃取后,进行LC/MS对替来他明和唑拉西泮的定性定量检测分析。结果在血液和尿液的生物样品的加标实验中,替来他明的RSD%在0.5%~3.5%,唑拉西泮的RSD在0.5%~1.1%;替来他明的回收率在75.8%~100.3%,唑拉西泮的回收率在68.8%~76.6%,其中血液中替来他明的方法检出限为0.16ng/mL,尿液中为0.20ng/mL,唑拉西泮在血液中的方法检出限0.17ng/mL,尿液中为0.22ng/mL。结论建立的QuEChERS萃取方法,操作流程简便,方法重现性好,只需100μL取样量,更适合于痕量生物检材中替来他明和唑拉西泮的检验分析。     

液相色谱-三重四极杆质谱法同时检测生物检材中百草枯及其代谢物

目的建立生物检材中同时检测百草枯(paraquat,PQ)及其主要代谢物单季铵盐(monoquat)、百草枯-单吡啶酮(paraquat-monopyridone,MP)、百草枯-联吡啶酮(paraquat-dipyridone,DP)、4-羧基-1-甲基吡啶盐(4-Carboxy-1-methylpyridinium ion,MINA)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。方法以百草枯氘代内标(Paraquat-d8 Dichloride,PQ-D8)作为内标,检材样品调节pH后,经乙腈沉淀蛋白,使用不同色谱柱洗脱,在多反应监测模式下检测。结果百草枯PQ、monoquat、MP、DP、MINA的线性范围分别是5~800ng/mL、0.5~80ng/mL、5~800ng/mL、2.5~400ng/mL、2~320ng/mL(r均高于0.993),日内、日间精密度(RSDs)分别在5%~14%、3%~13%、3%~15%、5%~13%、2%~15%之间,准确度(RE)分别在91%~116%、80%~100%、80%~111%、85%~114%、91%~114%之间。生物样品处理后自动进样器上室温放置72h,各物质的准确度分别在90%~119%、56%~125%、60%~110%、78%~98%、83%~117%之间。结论本测定方法前处理过程简便,分离效果好,提取效率高,可使用本方法对疑似百草枯中毒的检材进行原体及代谢物的检测,为案件提供法律依据;本实验优化了课题组前期建立的生物样品中百草枯及monoquat、MP的检测方法,参考其案例结果,检测相应检材,对比分析,该检测方法在原体含量大幅下降时,痕量代谢物仍可检出。     

气相色谱-串联质谱法测定血液中乙基葡萄糖醛酸苷

目的建立血液中乙基葡萄糖醛酸苷（ethyl glucuronide,EtG）的气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）测定方法。方法血液用乙腈沉淀蛋白,离心后,将上清液转移吹干,残留物经N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺衍生化,用GC-MS/MS进行检测。结果血液中EtG的检出限为0.05μg/mL,线性范围为0.1～10μg/mL（r=0.9999）。对送检案例血液检材进行EtG检测,效果良好。结论本方法适用于血液中EtG的检测。     

液相色谱-串联质谱法分析生物检材中的河豚毒素

目的建立血液、尿液以及肝中河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)的液相色谱-串联质谱分析方法,并进行方法学验证。方法血液、尿液和肝用1%乙酸甲醇溶液去蛋白后,上清液用固相萃取法净化,LC-MS/MS检测。结果血液、尿液和肝中TTX检出限分别为2ng/mL、2ng/mL和4ng/g。血液和尿液在4～100ng/mL、肝在5～100ng/g的范围内线性关系良好,相关系数r≥0.9973;日内精密度和日间精密度均在12.80%以内;回收率大于47.2%。结论所建方法高效、灵敏、准确,可以为河豚毒素中毒的法医学鉴定、临床诊治以及食品安全的监控提供技术保障。     

LC-MS/MS法检测人血液中的利多卡因及其代谢物

目的建立人血液样品中利多卡因及其代谢物单乙基甘氨酰二甲苯胺(MEGX)和甘氨酰二甲苯胺(GX的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。方法人血液样品经乙腈沉淀蛋白后,Zorbax RRHD Plus C18柱(2.1mm×50mm,1.8μm)分离,以0.1%甲酸和乙腈为流动相进行洗脱。质谱采用电喷雾正离子化(ESI+),多反应监测扫描模式。结果血液中利多卡因、MEGX和GX在相应范围内线性良好,相关系数(r 0.9950)。在血液中检出限分别为0.1 ng/mL、0.5 ng/mL和0.2 ng/mL,方法回收率为92.7%～103.9%,准确度为92.9%～113.1%,日内、日间精密度的相对标准偏差均不超过13.0%。在1例肌肉注射利多卡因死者心血中利多卡因、MEGX和GX的质量浓度分别为1.520μg/mL、0.019μg/mL和0.266μg/mL。结论本方法灵敏度高、选择性好,适用于血液中利多卡因及其代谢物的检测,可为利多卡因临床治疗过程中的药物浓度监测和法医学鉴定提供技术支撑。     

介质液液萃取-气相色谱/串联质谱法测定血液中4种吩噻嗪类药物

目的研究建立介质液液萃取-气相色谱/串联质谱分析血液中吩噻嗪类药物的方法。方法采用介质液液萃取技术处理血液样品,乙醚进行洗脱,然后用气相色谱/串联质谱仪测定。结果 4种吩噻嗪类药物的检测限在1.0 ng/mL~3.3 ng/mL之间,线性范围25 ng/mL或50 ng/mL~1000 ng/mL,以空白血液样品为基体进行回收试验测得回收率为73.8 ng/mL~104.1 ng/mL,测定值的相对标准偏差(n=5)在4.7%~10.2%之间。结论 SLE-GC/MS/MS检测法可用于血液中吩噻嗪类药物的检测分析且该方法具有良好的灵敏度、回收率、精密度及重现性。     

液相色谱-串联质谱法检测生物样品中百草枯及其代谢物

目的建立生物样品中百草枯(paraquat,PQ)及其2种主要代谢物monoquat,paraquatmonopyridone(MP)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,应用于百草枯中毒案件的法医学鉴定。方法生物样品经乙腈或甲醇沉淀蛋白,使用Agilent HILIC Plus(4.6×100mm,3.5μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液～0.1%甲酸乙腈溶液(v/v)为流动相进行洗脱,在多反应监测模式下检测。结果百草枯及其代谢物在1～1000ng/mL内线性关系良好,相关系数(r)≥0.9996,最低检出限为0.34～6.00ng/mL,检测准确度为91.25%～113.44%,日内及日间精密度分别为1.51%～3.99%和1.92%～4.93%。结论本文建立的LC-MS/MS法具有灵敏度高、特异性好的特点,可应用于百草枯中毒相关案件的法医学鉴定。     

LC-MS/MS法同时检测生物检材中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己CSCD

目的建立准确、灵敏的生物检材中钩吻素子、钩吻素甲及钩吻素己的液相色谱-串联质谱(LCMS/MS)检测方法,并进行方法学验证。方法以士的宁为内标,血液、尿液及肝组织样品经1%氢氧化钠溶液碱化后用乙酸乙酯提取,采用ZORBAX SB-C_(18)柱(150 mm×2.1 mm,5μm)分离,以甲醇-20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液(含0.1%甲酸和5%乙腈)为流动相进行梯度洗脱。定性定量分析采用电喷雾正离子化(ESI+)、多反应监测模式。结果血液、尿液及肝组织中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己在相应的线性范围内线性良好,相关系数(r)>0.995 0,检出限分别为0.1 ng/m L(或0.1 ng/g)、0.1 ng/m L(或0.1 ng/g)及0.01 ng/m L(或0.01 ng/g),各生物碱提取回收率为61.9%~114.6%,准确度为92.4%~114.3%,日内、日间精密度的相对标准偏差均不超过11.0%。结论本方法选择性好、灵敏度高,适用于同时检测生物体液和组织中的钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己,可为钩吻中毒的临床诊治和法医学鉴定提供有效的技术支撑。     

LC-MS/MS法同时检测生物检材中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己

目的建立准确、灵敏的生物检材中钩吻素子、钩吻素甲及钩吻素己的液相色谱-串联质谱(LCMS/MS)检测方法,并进行方法学验证。方法以士的宁为内标,血液、尿液及肝组织样品经1%氢氧化钠溶液碱化后用乙酸乙酯提取,采用ZORBAX SB-C_(18)柱(150 mm×2.1 mm,5μm)分离,以甲醇-20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液(含0.1%甲酸和5%乙腈)为流动相进行梯度洗脱。定性定量分析采用电喷雾正离子化(ESI+)、多反应监测模式。结果血液、尿液及肝组织中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己在相应的线性范围内线性良好,相关系数(r)0.995 0,检出限分别为0.1 ng/m L(或0.1 ng/g)、0.1 ng/m L(或0.1 ng/g)及0.01 ng/m L(或0.01 ng/g),各生物碱提取回收率为61.9%~114.6%,准确度为92.4%~114.3%,日内、日间精密度的相对标准偏差均不超过11.0%。结论本方法选择性好、灵敏度高,适用于同时检测生物体液和组织中的钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己,可为钩吻中毒的临床诊治和法医学鉴定提供有效的技术支撑。     

不同保存条件下呋喃丹及其代谢物在血液中的稳定性研究

目的研究呋喃丹及其代谢物呋喃酚在不同条件保存血液中的稳定性,为呋喃丹中毒案件的法医学鉴定提供实验依据。方法犬经口灌胃4LD50(13.5mg/kg)呋喃丹致死后,取血液分为五等份,分别为添加1%氟化钠(1%NaF)、添加2.5mg/m L枸橼酸钠(NC)、20℃、4℃和-20℃保存实验组。于保存当时(0d)、5d、7d、15d、40d、83d和150d取上述样品,多反应离子检测(MRM),气相色谱-质谱联用(GC-MS/MS)法检测其中呋喃丹及呋喃酚含量。结果血液中呋喃丹的含量随保存时间均呈下降趋势,7d显著下降(P0.05),之后下降缓慢。不同条件保存血液中呋喃酚的含量均呈先升高后下降趋势。枸橼酸钠和氟化钠可加快血液中呋喃丹的分解。结论呋喃丹及其代谢物呋喃酚在保存检材中均可发生分解,20℃保存分解较快,4℃和-20℃保存分解速度较慢,不适宜用枸橼酸钠或氟化钠作抗凝剂或防腐剂。在呋喃丹的相关案件的法医学鉴定中,生物检材应注意冷藏、冷冻保存,并尽快送检。     

LC-MS/MS检测生物检材中雷公藤甲素和雷公藤酯甲

目的建立生物检材中雷公藤甲素和雷公藤酯甲的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法,并进行方法学验证。方法 0.4 m L血液、尿液或0.4 g肝组织加入内标混匀后用乙酸乙酯进行提取,提取物经Allure PFP Propyl柱(100 mm×2.1 mm,5μm)分离,以甲醇-20 mmol/L乙酸铵溶液梯度洗脱,采用电喷雾正离子化(ESI+)、多反应监测检测雷公藤甲素和雷公藤酯甲。结果各生物检材中雷公藤甲素和雷公藤酯甲在相应的线性范围内线性良好(r0.995 0),检出限均为2 ng/m L或2 ng/g,回收率为61.08%~102.98%,日内精密度和日间精密度均小于12.58%,准确度为90.61%~105.80%。结论所建方法简便、选择性好,适用于同时分析各种生物检材中的雷公藤甲素和雷公藤酯甲,为雷公藤中毒的法医学鉴定和临床诊治提供技术保障。     

生物检材中吗啡类生物碱的LC-MS／MS分析

目的针对滥用药物分析鉴定实践中亟待解决的问题,开展LC-MS/MS分析生物检材中吗啡类生物碱的应用研究。方法满足不同的鉴定需要,分别建立血液、尿液、唾液和头发等生物检材的样品前处理方法,确定同时分析海洛因、单乙酰吗啡、吗啡、可待因、乙酰可待因、二氢可待因酮和氢吗啡酮等吗啡类生物碱的LC-MS/MS方法。将方法应用于实际案例。结果所建立的方法对吗啡类生物碱分离良好。尿液稀释法、尿液提取法和头发中吗啡的最低检测限(LOD)分别为10ng/mL、0.01ng/mL和0.01ng/mg。结论所建立的方法简便、快速、特异性强、灵敏度高。目标物中加入二氢可待因酮和氢吗啡酮扩大了方法的实用范围。     

LC-MS/MS分析生物检材中的呋喃酚葡萄糖醛酸结合物

目的建立生物检材中呋喃酚葡萄糖醛酸结合物的LC-MS/MS检测方法。方法血和肝等检材经乙腈沉淀蛋白,采用ZORBAX HILIC Plus(4.6mm×100mm,3.5μm)亲水性色谱柱,以水和含0.1%甲酸的乙腈为流动相,梯度洗脱,以负离子多反应检测(MRM)模式检测,扫描时间8min。结果血和肝中呋喃酚葡萄糖醛酸结合物的线性范围分别是20ng/ml～5μg/ml和50ng/g～5μg/g,线性关系良好,r~2均大于0.999,血和肝中最低检出限分别为10ng/ml和9.93ng/g,最低定量限分别为15.63ng/ml和16.56ng/g;批内及批间精密度分别在1.53%～5.02%和5.06%～6.85%;相对回收率为86.13%～92.71%和87.01%～94.06%。对一例克百威中毒死亡人体检材进行检测,克百威及呋喃酚的血浓度分别为0.77ug/g和29.65ug/g,呋喃酚葡萄糖醛酸结合物的血浓度为1.059ug/g,肝组织浓度为4.056 ug/g。结论本研究所建方法特异性强、灵敏度高,可满足法医学中对于血中呋喃酚葡萄糖醛酸结合物的检测需求。     

五氟苄基衍生化GC-MS法检测血液中叠氮离子

目的建立血液中叠氮离子的五氟苄基衍生化气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spec-trometry,GC-MS)法。方法取血液检材0.2 mL置于10 mL玻璃试管中,依次加入内标物氰化钠、衍生化试剂五氟苄基溴和催化剂十四烷基二甲基苄基氯化铵,涡旋混合后,微波炉低火档加热3 min,离心后取有机相进行GC-MS分析。结果血液中叠氮离子在0.5～20μg/mL质量浓度范围内的线性关系良好,最低检测限为0.25μg/mL,相对回收率为91.36%～94.58%,并成功应用于1例叠氮化钠中毒死亡案件,死者血液中叠氮离子质量浓度为11.11μg/mL。结论本研究建立的方法专属性强,操作简便,适用于血液中叠氮离子的快速检测。     

血液中硫化氢的LC-MS/MS法检验

目的 建立一种用于测定血液中硫化氢的方法,并将其应用于实际案例中。方法 取0.2 mL血液样品,并加入0.8 mL饱和硼砂溶液进行稀释。在试管中取1 mL含有0.1%甲酸的乙腈溶液,依次加入0.1 mL稀释液和0.1m L 1%三嗪水溶液。混合均匀后,静置30 min。之后,通过离心和膜过滤,样品供LC-MS/MS分析。结果 在10～2 000 ng/mL浓度范围内,硫化氢呈良好的线性关系,R²为0.998 5。检出限为5 ng/mL,定量下限为10 ng/mL。在3例硫化氢中毒案例中,检测出3名死者血液中存在硫离子,浓度在0.17～0.56μg/m L之间。结论 本研究首次建立了用于测定血液中硫化氢的LC-MS/MS方法,可满足硫化氢中毒案件的检测需求。     

SPE-HPLC/MS/MS检验体液中赛拉嗪及DMA

目的建立了一种高效液相色谱串联三重四极杆质谱同时测定体液中赛拉嗪及2,6-二甲基苯胺的分析方法。方法样品经HLB固相萃取柱提取净化,Waters Atlantis d C18色谱柱分离,正电离条件下进行选择监视扫描模式检测。结果方法的回收率为70.5%~79.8%,RSD为8.2%~10.5%。赛拉嗪及2,6-二甲基苯胺在血液和尿液中的检出限分别为0.4 ng/mL和0.3 ng/mL,定量限分别为1.2 ng/mL和1.0 ng/mL。结论本方法灵敏度高、特异性好、重现性好,适用于赛拉嗪中毒的血液和尿液检测。     

超声辅助离子液体萃取-高效液相色谱串联质谱法测定全血中卡马西平

目的建立超声辅助离子液体-分散液液微萃取-高效液相色谱串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem spectrometry,HPLC-MS/MS)测定全血中卡马西平(carbamazepine,CBZ)的方法。方法经筛选后以1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐(1-butyl-3-methymidazolium hexafluoro-phosphate,[Bmim][PF6])为萃取剂,在空白血液中添加卡马西平和内标物双氢卡马西平(10,11-dihydrocarbamazepine,CBZ-DiH),通过超声辅助离子液体对其萃取后,采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱分离,流动相A为含0.1%甲酸、10mmol/L乙酸铵的水,流动相B为混合有机溶剂(乙腈‥甲醇=2‥3,体积比),流速1mL/min,采用电喷雾离子源正离子模式(ESI+),多反应监测模式(MRM)进行检测。结果血液中卡马西平的线性范围为8.00~300.00ng/mL,R2大于0.995,最低检出限为3.00ng/mL,最低定量限为8.00ng/mL,提取回收率大于80%,日内和日间精密度均小于20%。采用本方法从实际案件的血液样品中检出卡马西平,浓度为2.71μg/mL。结论本研究建立的全血中卡马西平的检测方法,具有环境友好、快速、富集效果好、灵敏度高、有机溶剂消耗小的优点,可应用于卡马西平相关案件的法医学鉴定。