保存温度对血液酒精含量检测的影响

目的为筛选最佳的保存温度,准确检测酒驾血液酒精含量,为交管部门客观判断酒驾行为提供技术支撑。方法本研究选取EDTA-2真空抗凝采血管,采取酒后人体静脉鲜血后,分别在-20℃、4℃~8℃、25℃常温、35℃~42℃高温等4个温度条件下保存,GC法按0、3d、7d、14d、21d及28d后检测血液酒精含量,并对测试结果进行比较统计分析。结果在35℃~42℃和25℃温度下存储的血液酒精含量在0~3d内基本稳定,3d后显著下降(P0.05);4℃~8℃温度下存储的血液酒精含量在0~14 d内基本稳定,14d后显著下降(P0.05);-20℃温度保存条件下血液酒精含量测试28d统计结果间无显著差异。结论建议血样采集后低温保存,-20℃温度为血样的最佳保存温度。     

顶空气质联用法测定腐败血、肝检材中CO

目的研究CO中毒腐败血、肝组织检材中CO的HS/GC/MS检测。方法用HS/GC/MS法分析碳氧血红蛋白(COHb)血的线性范围。配制10%、30%、50%、70%浓度COHb血样,分别在室温、冷藏、冷冻条件下保存,分别在当日、第4、14、45d进行测定,比较实验结果。腐败肝组织由雄性健康家兔通CO气体致死,当天解剖,家兔肝常温隔绝空气保存并放35d至腐败,期间进行不定期顶空测定分析。结果制备的COHb血在0-100%之间有良好的线性关系Y=2.4X+2.2(r=0.9995)。以此方法测定家兔CO中毒致死的COHb新鲜血的浓度和4℃下放置45dCOHb腐败血,结果表明温度对血样中COHb%的测定影响最大。采用HS/GC/MS法检测,每次只需0.25ml血样或1g肝脏,分析一次时间只需3min,均可检测出新鲜检材和常温放置45d的腐败肝组织检材CO的含量。结论HS/GC/MS法能检出CO中毒的腐败生物检材中CO。     

不同保存条件对血中CN-浓度的影响

目的研究在各种温度贮存条件下血液中CN-浓度与保存时间的关系。方法用氯胺T衍生GC/ECD分析。结果在室温下存放的阳性血,在30天～50天中,CN-浓度有所增加,以后浓度下降很快,80天后则检不出。在4℃及-20℃下贮存的血液CN-浓度,在一定的时间段中,有所增加,以后则逐渐下降,至8个月仍可检出CN-。结论不同条件下存放的血液CN-其浓度的变化是不同的。     

血中碳氧血红蛋白饱和度测定影响因素的研究

目的 考察血中碳氧血红蛋白饱和度(HbCO％)测定的影响因素,为其结果评定和所需样品保存条件提供实验依据。方法 利用三种分光光度法,测定30d内不同条件下保存的CO阳性血的HbCO％的变化。结果 还原双波长法、双波长法测定结果比较稳定,单波长法抗干扰能力较差;尸检所取血样的保存条件包括温度、保存时间及与空气接触程度对HbCO％的测定均有影响,其中温度影响较为显著。结论 利用还原双波长法与双波长法,并结合光谱扫描观察峰形变化可得到比较可靠的结果。30d内4℃条件下,密闭容器中血样接触少量空气不影响其HbCO％的测定。     

探究尸体血样中乙醇、乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸乙酯的产生

目的探索尸体血样保存过程中乙醇的产生情况及乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)和硫酸乙酯(EtS)的产生可能。方法对照组为7例阳性静脉血,而实验组则为7例阴性尸体血。每例血样分成3份并保存在室温(18~22℃),4℃及-20℃等3种不同的条件下,在保存天数为0、2、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21等时间点取样。使用顶空气相色谱法(HS-GC)检测乙醇,采用固相萃取提取EtG和EtS,使用高效液相色谱-三重四级杆质谱(LCMS/MS)法检测EtG和EtS。结果保存期间,对照组各血样中的乙醇、EtG和EtS浓度均呈下降趋势;实验组中1、2、4、5、6、7号血样的室温及4℃的样本在保存第2~3天时检出乙醇,而7号-20℃的样本在第6天检出乙醇。其中,6号室温血样的乙醇峰值浓度为64.27mg/100mL。各血样中均未检出EtG,EtS。结论室温及4℃保存的尸体血可产生乙醇且产生速度较快,反复冻融可导致-20℃保存的尸体血产生乙醇,乙醇峰值浓度可超过法定酒驾标准,但实验组血样中均无EtG和EtS产生。因此,尸体血中的EtG,EtS可以作为乙醇生前入体的特异性标志物,区分乙醇生前入体和腐败产生乙醇的依据。实际工作中,乙醇原体检测的酒精认定应注意血样保存和运输条件造成的影响。为了避免假阳性结果,涉及死亡的案件进行酒精认定时有必要辅以EtG和EtS的检测。     

血液样品中乙醇稳定性的实验研究

目的考察在不同存放条件下含乙醇的血液样品中乙醇浓度的变化情况。方法采用顶空-气相色谱法,以异丙醇为内标,对存放条件不同的血液样品中乙醇进行检测。结果冷冻(-10℃)条件存放1至30天,血液样品中乙醇含量无显著变化;冷藏(4℃)条件存放1至30天,血液样品中乙醇含量变化不显著;室温(28℃~33℃)条件存放1至30天,血液样品中乙醇含量显著改变。结论含有乙醇的血液样品,在冷冻、冷藏条件下可较稳定的存放30天;在室温条件下存放30天血液样品中乙醇浓度发生显著变化,不可在此条件下存放。     

血液和尿液样品中海洛因代谢物稳定性研究

目的对尿液和血液中海洛因代谢物3-β-D-葡萄糖醛酸吗啡（M3G）,吗啡,O6-单乙酰吗啡（O6）在180d内的稳定性进行研究。方法准备空白添加血液、尿液、染毒动物（大白兔）血液、尿液和吸食海洛因者血液、尿液样本,分别置于20℃、4℃、-20℃下,分别于0、1、2、4、7、14、28、56、112、156、180d时间点测定样品中M3G、吗啡,O6相对含量。结果在3种不同温度下,随保存时间的延长,血液、尿液中的O6含量均逐渐下降至零;血液中吗啡含量升高（空白血液添加组）或下降（染毒动物组）,在尿液则均升高;血液样中M3G含量均升高,尿样中则略有下降。下降和升高的幅度均随保存温度的下降而缩小。结论海洛因代谢物在-20℃时保存稳定性最佳。     

血和肝脏检材保存条件对氰化物浓度的影响

研究了大白鼠血液和肝脏检材保存时间及保存温度对氰化物浓度的影响。研究表明，保存168h，保存温度4℃，血液和肝脏检材中的氰化物含量变化很小；保存温度25℃，血液和肝脏险材中的氰化物浓度随时间延长而上升，肝脏检材中氰化物浓度在168h为4h的1．17倍。4h染毒组大白鼠氰化物浓度血中比肝脏中高2．3倍，证实了氰化物在体内分布的差异性。     

不同保存条件下呋喃丹及其代谢物在血液中的稳定性研究

目的研究呋喃丹及其代谢物呋喃酚在不同条件保存血液中的稳定性,为呋喃丹中毒案件的法医学鉴定提供实验依据。方法犬经口灌胃4LD50(13.5mg/kg)呋喃丹致死后,取血液分为五等份,分别为添加1%氟化钠(1%NaF)、添加2.5mg/m L枸橼酸钠(NC)、20℃、4℃和-20℃保存实验组。于保存当时(0d)、5d、7d、15d、40d、83d和150d取上述样品,多反应离子检测(MRM),气相色谱-质谱联用(GC-MS/MS)法检测其中呋喃丹及呋喃酚含量。结果血液中呋喃丹的含量随保存时间均呈下降趋势,7d显著下降(P0.05),之后下降缓慢。不同条件保存血液中呋喃酚的含量均呈先升高后下降趋势。枸橼酸钠和氟化钠可加快血液中呋喃丹的分解。结论呋喃丹及其代谢物呋喃酚在保存检材中均可发生分解,20℃保存分解较快,4℃和-20℃保存分解速度较慢,不适宜用枸橼酸钠或氟化钠作抗凝剂或防腐剂。在呋喃丹的相关案件的法医学鉴定中,生物检材应注意冷藏、冷冻保存,并尽快送检。     

死后血浆和溶血样本中IgE的稳定性

目的探究死后血浆和溶血样本中免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)经过不同保存条件及冻融处理后的稳定性。方法选取39例死后48h内非冷冻尸体的心血样本,其中20例取血浆样本,19例取全血制成溶血样本。将样本置于-20℃、4℃、25℃条件下保存28d及-80℃条件下保存1年以探究IgE在不同保存条件下的稳定性。利用5次反复冻融处理样本探究死后血浆及溶血样本IgE的冻融稳定性。应用电化学发光法检测处理前后血浆和溶血样本中IgE的浓度。结果血浆样本中IgE在-20℃、4℃、25℃3种保存条件下的降解率接近,28d后降解率均值在15%左右,相同条件下溶血样本中IgE降解速度快于血浆(P<0.05),并且在25℃条件下降解率高于另外两种(P<0.05)。血浆样本于-80℃冷冻保存1年后的浓度与冷冻前相比差异无统计学意义(P>0.05),而溶血样本在-80℃冷冻保存1年后浓度有所降低(P<0.05)。死后血浆和溶血样本在反复冻融5次后检测结果与冻融前相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论死后血浆及溶血样本中IgE具有良好的冻融稳定性。IgE在死后血浆样本中的稳定性优于溶血样本,因此在实际案例中建议及早分离血浆保存待测。     

家兔死后离体血液ATP含量变化与放置时间的关系

目的探讨恒温(25℃)条件下家兔死后离体血液ATP含量变化与放置时间的关系。方法健康家兔8只,空气栓塞处死后即刻取右心室血液,置于25℃恒温水浴槽中,每4h应用ATP荧光快速检测仪检测血液ATP含量,所得数据应用SPSS17.0统计学软件进行方差检验及回归分析。结果恒温(25℃)环境下,家兔死后离体血液的ATP含量,在8h内从死后即刻的2.46×10-12mol/L升至3.09×10-12mol/L,8h之后则随PMI的延长而下降,直至56h,56～72h ATP含量在0.13×10-12mol/L时趋于稳定。以Log[ATP]为因变量(y),离体放置时间为自变量(x),对死后0～56h的数据进行回归曲线分析,建立了3个推断离体时间方程,即y=-0.019x-11.359(R2=0.763)、y=0.001x2+0.016x-11.666(R2=0.962)和y=-1.281×10-5x3-0.007x-11.576(R2=0.980),其中三元回归方程的系数为0.980,曲线拟合度最好。结论家兔离体血液ATP含量变化与放置时间呈现一定的规律性,有望应用于死亡时间推断。     

保存温度与时间对生物样品中氯胺酮稳定性的影响

目的研究不同温度和时间条件保存时生物样品中氯胺酮的稳定性。方法家兔以氯胺酮150mg/kg灌胃,30min后处死,取其血、肝、肾、脑,分别在室温（18～24℃）和冷冻（-20℃）条件下保存,并用气相色谱-质谱法定性分析、气相色谱-氮磷检测器法测定不同时间各样品中氯胺酮含量。结果血、肝、肾、脑冷冻保存至第30天氯胺酮含量均降低（P〈0.05）;室温条件下各样品中氯胺酮含量自第5天起均升高（P〈0.05）。结论生物样品在冷冻条件下保存时氯胺酮稳定性较好,怀疑氯胺酮中毒或死亡的检材应冷冻保存,尽快检测。     

The Stability of Prostate-Specific Antigen in Semen Under Various Temperatures

Prostate-specific antigen (PSA) is most commonly used for identifying semen, especially in the absence of sperm. However, PSA concentration varies according to storage temperature and duration, and little is known about its stability in semen. This study was therefore aimed to determine the stability under five different temperatures: −80, −20, 4, 25, and 37°C; and nine different durations: 1, 2, 3, 5, 7, 14, 30, 90, and 180 days. All samples were stored at −80°C after being secreted from the volunteers' body until analyzed. Results showed that the PSA concentration declined significantly over time under all temperatures studied except −80°C. At −20 and 4°C, PSA was still detectable on Day 180 with 50% and 70% decrease from its original concentration, respectively. At 25 and 37°C, PSA was detected up to Day 7 and 3, respectively. This information might assist forensic scientists understand more about PSA nature and integrate it into their works.     

Hair as a specimen to document tetramethylene disulfotetramine exposure

Tetramethylene disulfotetramine (tetramine) is a rodenticide that has been banned for many years in China. Since 2005, inhabitants of a village in the Henan Province have been suffering from grand mal seizures. To investigate the possibility of tetramine as the cause, we developed a method to determine tetramine in human hair. Sample preparation involved external decontamination, frozen pulverization, and ultrasonication in 2 mL ethyl acetate in the presence of cocaine-d3 as an internal standard. The method exhibited good linearity; calibration curve was linear over a range of 0.1-20 ng/mg hair. The limit of detection for the assay was 0.05 ng/mg hair. Except for one subject (No. 4), all head and pubic hair samples were positive for tetramine. The concentrations of tetramine in pubic hair were significantly higher than those in the same subjects' head hair samples. Because of a long retention in body, segmental head hair analysis cannot provide an accurate exposure history of tetramine in the body.     

不同温度下兔玻璃体液K~+浓度与死亡时间的关系研究

目的探索在不同环境温度条件下,玻璃体液中钾离子浓度变化规律与死亡时间的关系。方法家兔处死后分别置于5℃、15℃、25℃和35℃温度下保存,在0~120h内每12h双眼交替微量提取玻璃体液80~100μL;应用罗氏DPPI生化分析仪检测玻璃体液中K~+的浓度;应用插值函数进行分析拟合,建立死亡时间推断方程。结果各温度组家兔玻璃体液中K~+浓度随死亡时间延长均呈上升趋势,对所得数据进行插值拟合,在5℃~35℃的温度变化区间内,K~+浓度变化与PMI关系的三元五次曲面方程:f(x,y)=-1.998e~(14)+1.345e~(12)x+5.902e~(13)y+0.005 585x~2-4.509e~(11)xy-3.876e~(12)y~2-0.000 286 8x~3+0.003 545x~2y+4.406e~(10)xy~2-1.746e~(10)y~3+2.669e~(-6)x~4-1.568e~(-5)x~3y-0.000 177 1x~2y~2-1.64e~9xy~3+6.669e~9y~4-8.672e~(-9)x~5+4.467e~(-8)x~4y+2.354e~(-7)x~3y~2+2.459e~(-6)x~2y~3+2.05e~7xy~4-1.214e~8y~5(R~2=0.995 6),其中温度为自变量x,K~+浓度值为自变量y,PMI为因变量f(x,y)。结论在5℃~35℃的环境温度区间内,家兔眼玻璃体液中K~+浓度变化与死亡时间关系符合三元五次方程分布,利用插值函数拟合的方法可将环境温度作为参数,实现在环境温度变化条件下进行死亡时间推断。     

TUNEL法检测大鼠死后心肌细胞核DNA断裂与死亡时间关系研究

目的用原位脱氧糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察大鼠死后心肌细胞DNA断裂与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系。方法建立SD大鼠死亡模型,在25.1℃,分别于死后6、12、24、36、48、60h提取大鼠心肌组织进行TUNEL检测,显微成像系统采集图像,经计算机图像系统分析及统计学处理。结果死后6~60h,心肌细胞核荧光染色依次由绿色、黄绿色亮度增强、亮黄色到荧光亮度减弱;形态由扁圆形或柱状,大小较均匀,到体积增大、呈毛虫状、多数核碎裂到形态不规整,大部分核形成碎片;心肌组织细胞核的IG,死后6h至36h依次增高,36h达到高峰,随后下降;心肌细胞核DNA的AG死后24h最高。结论死后各时间点,心肌细胞核的荧光颜色和亮度以及细胞核的大小和形态有一定的变化规律。     

血中毒鼠强的固相萃取和GC-NPD法测定

目的 研究人全血中毒鼠强的固相革取(SPE)。方法 用Bond Elute C18固相萃取柱萃取,GC-NPD检测,以甲基对硫磷为色谱内标(CS)。结果 全血中加标0.5μg/ml,毒鼠强回收率为92.5％,变异系数2.3％(CV,n=4)。在0.5～10μg/ml的浓度范围内,线性相关系数为0.9994。检出限(S/N=3)和定量限(S/N=10)分别为6ng/ml和20ng/ml。同一根萃取柱连续使用6次未见性能明显下降(CV=3.6%)。结论 本文方法适用于毒鼠强中毒的全血测定。     

大鼠皮肤切创后E-选择素表达及稳定性研究

目的探讨大鼠皮肤切创后E-选择素表达规律及法医学意义。方法健康SD大鼠90只,随机分成4组：正常对照组、活体切创组（30min～7d12个时间点）、死后切创组（30min～3h3个时间点）、死后稳定性组（-20％6h-7d9个时间点,25％6h～3d5个时间点）。在大鼠头部建立皮肤切创模型,按设定的时间点取皮肤检材,运用免疫组化和图像分析技术,检测血管内皮E-选择素的表达规律。结果在活体切创组中,伤后1hE-选择素在血管内皮细胞内即呈阳性表达,持续至伤后7d,且随时间变化呈规律性表达。在正常对照及死后切创组未见阳性表达。死后-20％稳定性组各时间点E-选择素表达与死后即刻比较无显著性差异（P〉0．05）。25％各时间点与死后即刻比较有显著性差异（P〈0．01）。结论E-选择素在创伤后血管内皮细胞内特异性的表达具有时序性规律,且低温条件下稳定性较好。