国产磁珠结合自动化工作站批量提取生物检材DNA的应用

目的建立国产磁珠结合自动化工作站批量提取案件中生物检材DNA的方法。方法采用国产磁珠结合Bio-Robert Universal System自动化工作站对案件中常见的生物样本进行DNA提取,检测Identifiler系统16个STR基因座,在ABI3130XL遗传分析仪上进行STR分型。其中210份样品同时在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量。结果9100份10类生物检材应用国产磁珠结合自动化工作站,大部分可提取到足够的DNA进行STR检验。STR检验成功率最高的为口腔拭子、肌肉,达100%,接触细胞检材的成功率较低,为50.0%。结论国产磁珠结合自动化工作站可用于案件中常见的大部分生物样本的DNA提取。     

法医物证DNA自动化检验技术体系的研究

目的建立自动化工作站同步提取不同种类涉案法医生物检材DNA的新方法。方法选用TECAN Freedom EVO100．4、75—2型自动化提取、加样工作站,采用磁珠法及Chelex-100法对各类涉案生物检材进行DNA提取、PCR扩增、毛细管电泳检测其STR分型,进行比较测试。在“全国公安机关DNA数据库应用系统”中建立并应用实验室信息管理系统（LIMS）模拟实施规范化DNA检案。结果1552份各类检材,采用工作站-磁珠法提取DNA效果最佳,STR检测成功率为95％,工作站-Chelex法为88％;二者分别与其手工提取法比较,成功率无明显差异。92个样本同期检测,自动化工作站较手工操作DNA检案时间可缩减1．25倍。结论工作站域珠法提取涉案检材DNA,可获得满意的STR分型结果。应用LIMS管控,可有效防控污染,明显提高检案效率及鉴定质量。     

FTA-DNA直接提取法的研究与应用

目的建立一种简约且易于自动化操作的Whatman FTA卡血样DNA提取方法。方法取直径1．2mm FTA卡血样，分别用FTA-DNA直接提取法及FTA常规提取方法提取DNA，AB-Identifiler^TM试剂盒分别进行10山和25山体系检测比较，并筛选批量grA卡血样DNA自动化提取程序。结果200份grA卡血样分别采用2种方法提取DNA模板，25μl体系PCR-STR检测，分型结果均良好。10μl体系检测，FTA-DNA直接提取法优于FTA常规提取方法，图谱RFU值为1000～2000，采用自动化工作站运行该提取程序较手工操作DNA分型图谱均衡性更佳；采用FTA常规提取方法检测，图谱RFU值100～2000，小片段优先扩增现象明显，且有19％的样本出现丢峰现象，采用自动化工作站运行该程序对其结果改善不明显。经工作站运行FTA-DNA直接提取法自动程序及10山体系检测本2万余份FTA卡采集的血样，均获得16个STR基因座DNA分型结果。结论本文建立的FTA-DNA直接提取法适用于FTA卡血样自动化DNA建库。     

DNA数据库建设中批量样品不同DNA提取方法的比较

目的比较和选择自动化工作平台提取DNA的方法,并用于DNA数据库建设。方法用手工Chelex-100法、Biomek3000自动化工作平台结合Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法对实验室收集的建库滤纸血样进行DNA提取,荧光定量技术对上述3种方法提取的模板DNA进行测定;扩增产物用3100基因分析仪检测并用基因分析软件分析。结果手工Chelex-100法、自动化Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法提取的DNA模板浓度分别为0.593ng±0.131ng/μl、0.579ng±0.096ng/μl、0.447ng±0.056ng/μl;成功率分别为100%、98.9%、99.5%。结论本文建立的自动化Chelex-100法可用于大规模DNA数据库建设。     

2种陈旧骨骼、牙齿DNA纯化方法的比较

目的比较有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法对陈旧骨骼和牙齿DNA的纯化效果。方法选择10份陈旧骨骼和12份牙齿样本,进行消化后分别采用有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法进行提取纯化,进行DNA定量后用SinofilerTM试剂盒进行检测。结果 2种方法纯化的骨骼、牙齿DNA的IPC CT值无显著差异。有机法+QIAquick纯化法纯化的骨骼、牙齿DNA平均浓度分别为0.180ng/μL±0.068ng/μL和0.132ng/μL±0.027ng/μL,所有样品均获得全部基因分型。DNA IQ磁珠法纯化的DNA平均浓度分别为0.038ng/μL±0.028ng/μL和0.036ng/μL±0.007ng/μL,有5份骨骼和6份牙齿样本仅获得部分基因分型或未能分型。结论有机法+QIAquick纯化法对陈旧骨骼、牙齿DNA的纯化效果优于DNA IQ磁珠法。     

Chelex法和两种磁珠法提取接触DNA效果的比较

目的比较Chelex法、DNA IQ磁珠法、EQ国产磁珠法对接触DNA的提取效果。方法将稀释为10ng、100ng的标准品DNA,分别采用Chelex法、DNA IQ磁珠法、EQ国产磁珠法处理;对30例烟蒂和30例牙刷分别采用Chelex法、DNA IQ磁珠法和EQ国产磁珠法提取DNA,然后进行PCR定量和STR检测。结果Chelex法对DNA的提取无损失,DNA IQ磁珠法、EQ国产磁珠法对DNA的提取均有不同程度的损失;烟蒂、牙刷等检材采用Chelex法提取的接触DNA量和IPC CT值显著高于IQ磁珠法、EQ国产磁珠法,但STR检验成功率却低于IQ磁珠法、EQ国产磁珠法。2种磁珠法提取的DNA量、IPC CT值和STR检验成功率无显著性差异。结论污染轻、杂质少的接触DNA检材,用Chelex法提取最为方便快捷;IQ磁珠法、EQ国产磁珠法更适合污染接触DNA检材的提取及自动化操作。     

磁珠法在自动化核酸提取工作站中的应用

正在全国罪犯DNA数据库的建设过程中,需对大量人员样本进行检验,增加了检验人员的工作量。本实验将磁珠法与自动化核酸提取设备相结合以提高检验过程的准确性,减少因手工操作引起的失误,缩短检验时间,提高每次检验结果的可重复性及均一性。1材料与方法人员血样100份,为本实验室2009年上半年采集,载体为公安部物证鉴定中心生产的血样采集卡。     

超滤管在陈旧生物检材中的应用

目的探讨millipore超滤管滤过方法对陈旧生物检材DNA分型检验的应用价值。方法将23份陈旧血样分别剪取同样合适大小的血片3组,标为A、B、C组,磁珠法提取DNA,分别用80μL、80μL、20μL洗脱液洗脱得到模板DNA,其中A、C组模板直接扩增,B组用millipore超滤管滤过浓缩后扩增。PCR产物用AB3130x L基因分析仪检测,Gene Mapper ID V3.2软件进行自动分型。所得实验数据用SPSS软件分析处理。结果 A组没有1例样本扩出全部STR基因座,B组有18例样本扩出全部STR基因座,C组有11个样本扩出全部STR基因座。结论应用millipore超滤管滤过方法可以明显提高陈旧生物检材的DNA分型成功率。     

DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用

目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。     

DNA IQ磁珠法结合Maxwell~（TM） 16自动仪提取接触DNA

目的研究DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM 16自动仪对接触DNA提取的应用价值。方法 151份案件接触DNA检材95℃裂解后,采用DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM 16自动仪提取DNA,然后进行DNA定量和STR分型检测,统计各种类型的接触DNA含量I、PC CT值和STR分型成功率。结果 151份案件接触DNA检材中,除果核平均DNA获得量为9.51ng以外,其它接触检材的平均DNA获得量均大于10ng,烟蒂检验成功率最高为93%,果核检验成功率较低,为60%。所有DNA样品的IPC CT值均在27左右,纯度高。结论大部分接触DNA检材采用DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM 16自动仪可提取到足以进行STR分型的DNA。     

应用DNA工作站进行批量血斑STR分型的研究

目的建立对大批量血斑样品PCR-STR基因分型检测的自动化新方法。方法应用自动化DNA工作站改良优化Chelex-100法和DNAIQ磁珠法的实验条件,建立两种批量血斑的自动化DNA提取方法;筛选确定PCR-STR反应体系的构建和PCR-STR产物测序电泳分析前处理程序。结果1104份血斑样品经Chelex-100法批量提取、Profiler Plus试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座,定量PCR测定模板浓度均值为0.43ng/ml,荧光检测信号在200~800RFU之间;对其中114份血斑样品用DNAIQ磁珠法批量提取、同试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座,定量PCR测定模板浓度均值为0.7ng/ml,荧光检测信号在1000~2000RFU之间;对其中50份血斑进行自动和手动Chel-ex-100检验法比较,成功率分别为100%和98%,且前者等位基因峰高信号更均衡。结论本文建立的自动化DNA工作站批量检测方法,在成功率、稳定性、均一性等方面具有优势。     

磁珠直接吸附法对体态检材游离DNA的提取

目的采用磁珠直接吸附法对人体尿液、唾液、血液3种体态生物检材中的游离DNA进行提取检验,为法医物证中游离DNA的研究及检验工作提供参考。方法对3种生物检材采取离心吸取上清液的方法分离游离DNA,然后采用磁珠直接吸附法进行提取纯化,Identifiler-Plus试剂盒进行复合扩增后常规STR检测。结果在3种检材中均检出了游离DNA,其中血液中游离DNA检出率为100%,唾液为90%,尿液为70%。结论人体体态生物检材中存在游离DNA,同时磁珠直接吸附法可高效、快捷的提取生物检材中的游离DNA。     

二次消化结合磁珠法提取腐败组织DNA

目的 研究二次消化结合磁珠法对3种腐败组织DNA的提取效果.方法 采用二次消化结合磁珠法对用常规磁珠法提取DNA失败的91例高度腐败尸体的软骨、指(趾)甲、关节囊组织提取DNA,QuantifilerTM试剂盒进行DNA定量,用SinofilerTM或MinifilerTM试剂盒进行STR检测分型. 结果 91例高度腐...     

激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞

目的 评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection.LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值.方法 配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液.分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用IdentifilerTM试剂盒进行STR基因型检测.结果 LC...