高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪冻精质量的影响

为探究高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪精液冷冻效果的影响。选取Tris—柠檬酸—葡萄糖基础稀释液,以未处理的鸡蛋卵黄(20%EY)为对照组,添加经HPH处理后的鸡蛋卵黄(20%EY)为试验组,制成Ⅰ液和Ⅱ液,冷冻-解冻后分别对猪精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性、抗氧化指标及DNA完整率和凋亡指标进行检测。结果显示,经HPH处理能有效提高猪精子冻后质量。精液解冻后精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率分别为84.32%、86.71%、68.92%、59.09%,较对照组分别提高了13.7%、16.58%、6.5%、4.88%(P0.05)。与对照组相比,试验组的MDA和ROS较对照组均有所上升(P0.05),SOD较对照组有所下降(P0.05)。但冻后精子NO和NOS含量显著降低(P0.05)。试验组的精子解冻后DNA片段完整性较对照组明显提高(P0.05),凋亡率下降(P0.05)。结果表明,HPH处理鸡蛋卵黄能有效提高猪精液冷冻后质量。     

高压均质(HPH)大豆卵磷脂替代卵黄在猪精液冷冻保存效果的研究

为探究大豆卵磷脂高压均质(HPH)处理对猪精液冷冻保存的影响,用6个浓度的经高压均质处理的大豆卵磷脂(A1:1%;A2:2%;A3:4%;A4:5%;A5:6%;A6:8%)替代Tris-柠檬酸-葡萄糖基础稀释液(B组)中的卵黄(20%)进行猪精液冷冻保存试验。冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性进行质量检测,同时利用各种试剂盒对解冻后精子的抗氧化指标、DNA完整率和凋亡指标进行检测。结果显示,当高压均质大豆卵磷脂浓度为5%时,精子活力、活率、质膜完整率和顶体完整率最高,分别为67.15%、62.54%、55.21%和52.96%(P0.05);冻后精子线粒体完整率和DNA完整率最高,为68.61%和64.39%(P0.05);凋亡率最低,为23.31%(P0.05);活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)最低,分别为337.59 U/m L和2.01 nmol/L(P0.05)。当添加6%的大豆卵磷脂时超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平最高,分别为74.65 U/m L和246.92 U/L(P0.05)。结果表明,利用5%高压均质大豆卵磷脂替代鸡蛋卵黄对猪精液冷冻保存具有良好的效果,能提高精子冻后质量、功能完整性和抗氧化性。     

丝胶对地中海水牛精液冷冻保存效果的影响研究

精液冷冻保存过程中精子易受氧化应激影响而导致解冻后精液品质下降。丝胶具有良好的抗氧化能力,在精液稀释液中添加丝胶可有效抑制活性氧积累导致的脂质过氧化,减缓精子氧化应激。为了解添加丝胶对地中海水牛精液冷冻保存效果的影响,本研究在冷冻稀释液中添加不同浓度（0、0.25%、0.5%、1%）的丝胶,进行精液冷冻保存。检测冻后精子活力、质膜完整性、顶体完整性及精浆中谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、总抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）水平。结果表明,与未处理组相比,添加0.5%丝胶可提高地中海水牛冻后精子活力、质膜完整性、顶体完整性、GSH-Px酶活性、T-AOC水平（P<0.05）,MDA含量显著降低（P<0.05）。0.25%和1%丝胶添加组精子冻后活力、质量参数和抗氧化能力无显著性影响（P>0.05）。稀释液中添加0.5%丝胶时,冻后精子抗冻标志物HSP70蛋白表达水平极显著高于未添加组（P<0.01）。结果表明,在精液稀释液中加入0.5%丝胶可提高精液的抗氧化能力,使精子免受氧化应激损伤,有效改善地中海水牛精液冷冻后的品质。     

PTD-FNK蛋白对水牛精子的冷冻保护作用

PTD-FNK蛋白可以穿透细胞膜进入细胞内发挥抗凋亡作用,抵抗各种不利因素造成的细胞死亡,但国内未见将其加入水牛精液稀释液抑制精子冷冻凋亡的报道。本试验中,在水牛精液冷冻稀释液中添加不同浓度(0、0.1、1、10、100 nmol/L)的PTD-FNK蛋白,冻后检测精子常规质量指标的同时检测精子凋亡相关基因(Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9基因)mRNA表达和Caspase-3蛋白酶的活性;最后以最优PTD-FNK蛋白浓度批量生产冷冻精液,选择50头广西地方母水牛进行人工授精试验。结果显示:①1 nmol/L组精子质膜完整性和10 nmol/L组精子活力显著高于对照组(P<0.05),1 nmol/L组精子活力和1、10 nmol/L组精子活率极显著高于对照组(P<0.01),而100 nmol/L组精子活率却极显著低于对照组(P<0.01);②1 nmol/L PTD-FNK蛋白显著降低冻后精子Caspase-3 mRNA表达(P<0.05);③人工授精后第60天受胎率达60%,略高于其他研究者取得的受胎率(56.25%,P>0.05)。总之,PTD-FNK蛋白可以显著提高水牛精子冻后质量,其机制之一可能是它显著抑制了冻后精子Caspase-3 mRNA的表达;以PTD-FNK蛋白冷冻的水牛精液实施人工授精后可以取得比现有水平更高的受胎率。     

黄芪多糖对冷冻前后猪精液中过氧化氢酶活性及其mRNA表达的影响

为了研究黄芪多糖对猪精液冷冻前后过氧化氢酶(CAT)活性及其mRNA表达的影响,用含不同质量浓度(0、0.2、0.4、0.6g/L)黄芪多糖的稀释液稀释美系长白公猪精液,用0.5mL细管分装冷冻,分别检测平衡后及冻融后精液中CAT活性和mRNA表达量的变化。结果显示,0.4g/L黄芪多糖能显著提高冷冻保存的猪精液中CAT活性及平衡后CAT mRNA表达(P0.05),同时冻融后CAT mRNA表达在冷冻组中最高(P0.05)。结果表明,冷冻前后猪精液中CAT活性及平衡后CAT mRNA表达的显著提高是黄芪多糖改善猪精液冻后质量的主要原因之一。     

咖啡因对体外保存精子品质和受精力的影响

在概述咖啡因的来源、结构、饮用价值的基础上,简述了关于咖啡因对稀释的非冷冻保存精液和冷冻保存精液中精子活率和受精力影响的研究状况,认为无论在体外非冷冻保存的精液中还是在冷冻保存的精液中添加适量的咖啡因,均有助于提高精子活率、精子体外保存时间、情期受胎率和体外受精力。最后指出,研究人员应继续优化筛选咖啡因在制作冻精时的适宜添加剂量和添加时机。     

玻璃化冷冻对猪GV期卵母细胞及其DNA的影响

为了探索对猪GV期卵母细胞低毒性以及冷冻效果好的最佳冷冻保护液,并对玻璃化冷冻卵母细胞及其DNA损伤进行评价,本研究以猪GV期卵母细胞作为试验材料,应用玻璃化冷冻方法,就目前应用最多的六种冷冻保护液进行筛选,筛选出最合适的冷冻保护液;透射电镜观察冷冻卵母细胞超微结构的变化;采用彗星电泳技术检测玻璃化冷冻对卵母细胞DNA的影响。结果发现,以二甲基亚砜DMSO和乙二醇EG为主要成分的(HM+7.5%DMSO+7.5%EG)、HM+17%DMSO+17%EG+0.4 mol/L Su)冷冻保护液对猪GV期卵母细胞的损伤最小;玻璃化冷冻后卵母细胞透明带、细胞膜损伤,微绒毛消失,线粒体肿胀、基质不均、嵴不明显,胞质内溶解为絮状,有大量空泡;冷冻保护液处理组(未进行玻璃化冷冻)卵母细胞DNA损伤与对照组差异不显著,玻璃化冷冻组卵母细胞DNA损伤与冷冻保护液处理组和对照组均差异显著。结果表明,以DMSO和EG为主要成分的冷冻保护液适合用于对猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻,同时也证实了DNA的损伤主要是由玻璃化冷冻过程的机械损伤所致。     

液氮冻存弓形虫的试验观察

我们参照有关资料,探讨观察了长期保存弓形虫的方法,从1983～1986年将弓形虫速殖子用液氮(-196℃)冻存27个月(824天)之久,复苏后其活力和致病性均未改变。收到长期冻存的效果,改变了过去长期通过小鼠继代的繁琐程序,为科研工作提供了方便。 (一)材料和方法 1.虫种:为我们从甘肃省猪体分离出的弓形虫株(GJP株)。 2.冷冻保护剂:RPMI 1640溶液70％,小牛血清20％,3％谷氨酰胺溶液1％,二甲基亚砜(DMSO)10％。前三种溶液分别无菌过滤,临用前按比例混合,并加入二甲基亚砜溶液,用碳酸氢钠溶液调pH7.2。     

猪伪狂犬病病毒变异株感染绵羊胚胎鼻甲上皮细胞的病毒形态发生和细胞超微结构观察

应用超薄切片和透射电子显微镜技术,研究猪伪狂犬病病毒(PRV)MQ18变异株感染绵羊胚胎鼻甲上皮细胞(OFTu)的病毒形态发生和超微结构变化。结果显示:病毒在细胞核内复制、增殖,形成核内包涵体,装配好的病毒通过核内膜获得初始囊膜,以出芽方式出核进入细胞质,在高尔基体区域进行加工修饰、二次获得囊膜后形成完整病毒粒子,以包裹有病毒粒子的空泡与细胞膜相互融合方式,将病毒释放到细胞外;细胞超微结构主要表现为细胞质内空泡增多,线粒体增生、肿大,空泡样变,粗面内质网扩张,高尔基体形态异常,细胞核染色质浓缩、边集,最后细胞破坏、裂解,可见细胞早期凋亡及自噬小体结构。本研究结果为阐明PRV的感染和致病机制提供了理论依据。     

中药"球康"对柔嫩艾美球虫超微结构的影响

利用透射电镜对中药"球康"作用下柔嫩艾美球虫超微结构的变化进行了观察.结果发现,在"球康"作用下,球虫裂殖子形态结构发生明显变化,表现为哑铃形、畸形和不规则形状,裂殖子的顶体肿胀变圆;裂殖子外膜破损,外膜与细胞质分离,出现大的空腔.球虫微线消失,内部出现环状结构;线粒体内出现空泡和致密的电子团块;球虫死亡,完全失去超微结构,仅留下许多支链淀粉颗粒.推测中药"球康"抗球虫的作用机理可能是,通过破坏虫体结构的完整性,抑制虫体物质代谢及能量代谢等生理机能,从而杀死球虫或者抑制球虫的生长和繁殖.     

断奶仔猪多系统衰竭综合征淋巴结与脾损伤的病理学观察

对通过临床特征与PCR确诊为断奶仔猪多系统衰竭综合征的8例自然病例进行剖检取材,常规石蜡切片与超薄切片,HE染色及醋酸铀一柠檬酸铅染色,观察了淋巴结与脾的病理学变化.肉眼观察可见淋巴结肿大,特别是腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结与肺门淋巴结明显肿大;脾萎缩或中度肿大.组织学观察显示,淋巴结与脾淋巴细胞坏死,数量明显减少,网状内皮细胞增生与巨噬细胞浸润,在一些网状内皮细胞与巨噬细胞的胞浆内见嗜碱性包涵体.超微结构观察显示,淋巴结与脾淋巴细胞线粒体肿胀,内质网扩张,核浓缩,边集,甚至形成凋亡小体;在巨噬细胞与网状内皮细胞核和胞浆内均可见包涵体,包涵体为大小不等,圆形、椭圆形或不规则形的均质或颗粒状2种类型,胞浆包涵体常见于肿胀的线粒体与扩张的内质网附近.表明断奶仔猪患多系统衰竭综合征可致淋巴结与脾淋巴细胞坏死、凋亡,淋巴细胞数量减少.     

猪和兔附红细胞体的形态学及生殖方式观察

应用光镜和电镜对猪和兔附红细胞体的显微和超微结构进行了观察。结果表明,猪和兔附红细胞体在光镜和电镜下的形态结构、大小以及在红细胞上的附着方式等均无显著差别,其形态多为球形、卵圆形,直径0.2～2.5μm,在红细胞表面以一根或数根纤丝连接成串珠状或单个寄生。在透射电镜下,首次观察到附红细胞体边缘有一段20～30nm厚的光亮区域,并且在扫描和透射电镜下同时观察到附红细胞体的出芽生殖现象。由此推测,附红细胞体的发育方式为成熟的附红细胞体以出芽的方式产生1个未成熟形态的附红细胞体,随着未成熟形态附红细胞体的发育,逐渐从成熟附红细胞体体内脱离出来,最后以纤丝与成熟附红细胞体相连接;脱离出来的未成熟形态的附红细胞体黏附到同一红细胞或临近红细胞的膜上,最终发育成1个成熟的附红细胞体。     

子宫内膜炎病牛子宫内膜的超微结构观察

采用透射电镜和扫描电镜技术对产后6～10d的健康及患急性子宫内膜炎的西门塔尔牛进行子宫内膜的超微结构观察,探讨了奶牛患子宫内膜炎时子宫内膜超微结构的变化特征。结果表明,子宫内膜炎病牛的子宫内膜局部严重脱落,甚至可见子宫肌层,表面附着组织碎片,可见较多球菌、杆菌附着;子宫内膜基质细胞破损、细胞器外溢,腺细胞线粒体肿胀,肥大细胞颗粒数量减少、有空泡形成,淋巴细胞粗面内质网扩张,巨噬细胞核空化、胞质内有较多吞噬体;对照组子宫内膜表面轻度破损,但整体内膜结构相对完整,MC颗粒较多、分布均匀。证实,牛患子宫内膜炎时子宫内膜的细胞呈现缺血、缺氧性变化,说明子宫局部血液循环障碍,氧及营养物质供应不足,子宫内膜的屏障作用降低,病原菌大量增殖导致子宫内膜炎。     

酵母硒对铅暴露致蛋鸡卵巢毒性损伤的保护效应研究

本试验旨在探讨铅(Pb)暴露对产蛋鸡卵巢的毒性损伤及酵母硒的保护效应。将90只40周龄海蓝褐蛋鸡随机分成3组,每组30只,每组3个重复,每个重复10只。采用饮水染毒方式,对蛋鸡进行铅暴露(100 mg/L)和酵母硒保护试验(饲料中添加3%酵母硒),试验周期8周。结果表明,与对照组比较,Pb染毒组鸡血清E2、P4含量呈类似变化,自第4周显著下降(P0.05);卵巢组织中SOD、GSH-Px活性和GSH含量均显著或极显著降低(P0.05或P0.01),MDA含量极显著升高(P0.01);卵巢铅含量极显著升高(P0.01)。超微结构观察发现,Pb染毒组卵巢颗粒细胞染色质边集,线粒体嵴断裂,空泡化,内质网肿胀扩张,溶酶体集聚;卵母细胞微绒毛断裂。与Pb染毒组比较,Se保护组血清E2、P4含量自第6周显著升高,卵巢SOD活性、GSH含量显著升高(P0.05),MDA含量显著降低(P0.05);卵巢硒含量极显著升高,铅含量显著下降,线粒体、细胞核、内质网、微绒毛等损伤均明显减轻。表明铅引起的脂质过氧化损伤是铅致蛋鸡卵巢损伤的重要原因,氧化应激引起的卵巢颗粒细胞内质网损伤和细胞凋亡可能是造成血清雌激素水平下降的原因之一。酵母硒通过减少铅蓄积,缓解卵巢组织脂质过氧化损伤,对蛋鸡铅暴露引起的卵巢损伤具有一定的保护作用。     

镉对大鼠肾皮质的氧化损伤及乙酰半胱氨酸的保护效应

通过饮水对大鼠进行了镉染毒(Cd 50 mg/L)和乙酰半胱氨酸(NAC)保护(Cd 50 mg/L+NAC1 g/L)试验,8周后检测肾皮质中抗氧化指标和微量元素含量变化,观察其超微结构,以探讨镉对肾的毒性损伤及NAC的保护效应。结果显示,与对照组相比,镉染毒组及NAC保护组肾皮质中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著或极显著(P<0.05或P<0.01)降低,丙二醛(MDA)含量显著或极显著(P<0.05或P<0.01)升高,肾皮质中的铜、硒、锌含量显著降低(P<0.05)。与染毒组比较,NAC保护组肾皮质SOD、GSH-Px活性和GSH含量显著升高(P<0.05);肾皮质铜、锌、硒含量无显著差异(P>0.05)。超微结构观察发现,镉染毒使肾皮质中的细胞核仁破碎溶解,线粒体肿胀变形,部分嵴断裂;NAC保护组病理变化不明显,表明NAC对镉暴露所致的肾毒性损伤具有一定的保护效应。     

绵羊铅镉联合中毒的病理学研究

用普通光镜和电镜观察及元素分析等方法对白银工业污染区绵羊进行了系统研究。形态观察表明，该地区绵羊有明显的中毒变化，特征为牙的损伤，皮下水肿，全身小动脉壁的玻璃样变，肺漫性肺泡隔炎、支气管与血管周围炎及片状纤维组织增生，肝细胞变性、坏死，中毒性肾病、近曲小管上皮内核内包涵体及亚急性肾小球肾炎。主要的超微结构变化是肺Ｉ型上皮的变灶和坏死、Ⅱ型上皮增生及肺泡隔胶原形成，肝细胞线粒体变性和肿胀、滑面内质网增生及过氧化物体增多，肾小管上皮内细胞器变性。元素分析发现，中毒羊心、肝、脾、肺、肾、肋骨、四肢骨、牙齿、全血及被毛铅含量显著高于健康羊（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），肝、肾、肺及毛镉含量亦高于正常（Ｐ＜０．０１），主要脏器铅、镉含量达到或超过动物铅、镉中毒的诊断指标。因此认为，白银工业污染引起了绵羊铅、铅镉联合中毒。     

山羊痘病毒感染的OFTu细胞的超微结构观察和宿主细胞中山羊痘病毒的形态学观察

用山羊痘病毒福建分离株GTPV-FZ株感染绵羊胚胎鼻甲(OFTu)细胞,制作超薄切片,透射电镜观察宿主细胞的超微结构和细胞中病毒形态的动态变化规律。结果显示,被感染细胞的超微结构表现为细胞质空泡增多,内质网扩张呈囊状且囊腔内充满絮状物,池内分离,可见细胞凋亡早期改变;线粒体增生、脊肿胀、变暗、模糊不清;高尔基体出芽;最后感染细胞被病毒破坏、溶解,可见残留病毒的包涵体。病毒粒子呈圆形或卵圆形,有囊膜,大小为250~350nm,可见两面凹陷呈哑铃形的核酸芯髓和2个侧小体结构。病毒在细胞质中复制、增殖,装配好的病毒以细胞膜出芽和细胞溶解方式释放病毒粒子。上述结果有助于全面认识山羊痘病毒的形态特征以及病毒与宿主细胞的相互作用。     

鸭肿头出血症病毒强毒的致病性及感染组织细胞的超微病理变化

将鸭肿头出血症病毒(DSHDV)强毒株以不同途径接种10日龄鸭胚,研究了病毒在鸭胚中的繁殖规律,并用透射电镜观察了感染鸭胚各组织器官的超微结构变化,同时用DSHDV人工感染不同日龄雏鸭,比较了不同感染途径对雏鸭的致病性和对不同日龄雏鸭的致病性。结果显示,尿囊腔和卵黄囊2种途径均能使病毒在鸭胚上繁殖并传代,对鸭胚的半数致死量分别为10-7.24/0.2 mL和10-6.4/0.2 mL。病毒感染鸭胚后,电镜下可观察到肝和尿囊膜中的病毒粒子,病毒粒子呈球形或椭圆形,大小为60~80 nm,无囊膜;病毒在细胞浆内复制,可形成特征性包涵体;病毒侵害的主要靶器官为尿囊膜与肝,细胞器的变化主要表现为粗面内质网扩张以及线粒体肿胀和嵴断裂、消失。病毒经肌肉注射、口服和滴鼻均能使28日龄鸭感染发病,致死率分别为86%、89%和97%。研究表明,DSHDV能很好地在鸭胚上生长并致鸭胚各组织器官超微结构发生变化,不同感染途径均能使雏鸭感染发病且致病性强。     

几种方法对仔猪水肿病的防治效果比较试验

近年来 ,猪的水肿病在各地呈上升趋势 ,已成为猪的常见病和多发病 ,给养猪业带来很大的经济损失 ,而目前对猪水肿病却缺乏有效的控制措施。为此 ,我们对该病进行了调查研究 ,通过采取综合性防治措施 ,取得较为满意的效果。1　病因调查病猪食欲不振 ,腹泻 ,眼睑及面部、腹部皮下水肿 ,叫声嘶哑 ,共济失调或瘫痪。我们在泰州、宜兴、盐城等地共调查了45 5 0头仔猪 ,平均发病率为 18.3 % ,致死率为 73 .7%。通过病原分离、鉴定及病因分析发现 ,直接由溶血性大肠埃希氏菌引起的占 63 .9% ,致死率为 81.8% ,发病多为断奶前后仔猪 ;由于硒 ＶＥ的…     

猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗的研究--效力、最小免疫量、免疫持续期和保存期试验

对中国农业科学院兰州兽医研究所研制的 8批猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗进行了效力试验 ,并对其中的 3批疫苗进行了最小免疫量、免疫持续期和保存期试验。结果表明 ,免疫猪对APP(Actinobacilluspleuropneumoniae) 1、3、7血清型强毒攻击的近期保护率分别为 91.6%、91.6%和 95 .8% ;免疫剂量为 1mL时 ,对APP 1、3、7血清型强毒攻击的保护率分别为 3 3 .3 %、3 3 .3 %和 5 0 .0 % ;免疫剂量为 2mL时 ,保护率分别为 88.9%、88.9%和 10 0 % ;免疫剂量为 3mL或 4mL时 ,保护率均为 10 0 % ;免疫后 12 0d和 180d时 ,攻毒保护率分别为 10 0 %、88.9%、10 0 %和 88.9%、77.8%、10 0 % ;疫苗经 4～ 8℃保存 180d和 3 60d后 ,攻毒保护率分别为 88.9%、10 0 %、10 0 %和 10 0 %、77.8%、88.9%。