尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型效果比较

目的探讨尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型检验的效果。方法取抗凝全血用去离子水倍量稀释2、4、8、16、32、64、128倍,各取1μL分别滴加于尼龙植绒拭子与棉拭子头部,干燥制成血痕,应用Chelex-100提取每个浓度两种材质拭子的血痕样本DNA,采用Identifiler Plus试剂盒进行复合扩增,3500XL型遗传分析仪进行检测,对比各组DNA分型检验成功率。结果 1检验成功率:稀释16~64倍尼龙植绒拭子血痕均明显高于相同稀释倍数的棉拭子血痕(P0.001);其余浓度血痕两种材质拭子的检验成功率无明显差异;2分型图谱峰高和均衡性:不同浓度尼龙植绒拭子血痕峰高多为棉拭子血痕的2倍以上,16~64倍稀释血痕尼龙植绒拭子均衡性更好。结论尼龙植绒血痕拭子的检验效果优于棉拭子血痕,在微量血痕检验时优势更明显。     

法医物证DNA自动化检验技术体系的研究

目的建立自动化工作站同步提取不同种类涉案法医生物检材DNA的新方法。方法选用TECAN Freedom EVO100．4、75—2型自动化提取、加样工作站,采用磁珠法及Chelex-100法对各类涉案生物检材进行DNA提取、PCR扩增、毛细管电泳检测其STR分型,进行比较测试。在“全国公安机关DNA数据库应用系统”中建立并应用实验室信息管理系统（LIMS）模拟实施规范化DNA检案。结果1552份各类检材,采用工作站-磁珠法提取DNA效果最佳,STR检测成功率为95％,工作站-Chelex法为88％;二者分别与其手工提取法比较,成功率无明显差异。92个样本同期检测,自动化工作站较手工操作DNA检案时间可缩减1．25倍。结论工作站域珠法提取涉案检材DNA,可获得满意的STR分型结果。应用LIMS管控,可有效防控污染,明显提高检案效率及鉴定质量。     

Differex~（TM）与Chelex-100法在混合斑检验中的应用比较

目的探讨DifferexTM系统法在法医学性侵犯案件混合斑检验中的应用价值,并与传统Chelex-100法进行比较。方法对日常性侵犯案件中的生物检材分别通过DifferexTM系统法与Chelex-100法检验来比较两种方法的优劣。结果采用Chelex-100法提取时,在所检验样本中仅有床单全部获得单一分型,而采用DifferexTM系统法则只有一条内裤的分型为混合型,其它均为单一分型。应用DifferexTM系统法还可以同时提取女性上皮细胞DNA,成功率为100%。采用Chelex-100法时出现双尖峰的频率也明显超过DifferexTM系统法。结论 DifferexTM系统法在法医学性侵犯案件混合斑检验中比Chelex-100法具有更明显的优势,是一种非常有应用前景的方法。     

应用DNA工作站进行批量血斑STR分型的研究

目的建立对大批量血斑样品PCR-STR基因分型检测的自动化新方法。方法应用自动化DNA工作站改良优化Chelex-100法和DNAIQ磁珠法的实验条件,建立两种批量血斑的自动化DNA提取方法;筛选确定PCR-STR反应体系的构建和PCR-STR产物测序电泳分析前处理程序。结果1104份血斑样品经Chelex-100法批量提取、Profiler Plus试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座,定量PCR测定模板浓度均值为0.43ng/ml,荧光检测信号在200~800RFU之间;对其中114份血斑样品用DNAIQ磁珠法批量提取、同试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座,定量PCR测定模板浓度均值为0.7ng/ml,荧光检测信号在1000~2000RFU之间;对其中50份血斑进行自动和手动Chel-ex-100检验法比较,成功率分别为100%和98%,且前者等位基因峰高信号更均衡。结论本文建立的自动化DNA工作站批量检测方法,在成功率、稳定性、均一性等方面具有优势。     

DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用

目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。     

联苯胺试验对血痕DNA检验的影响

目的探讨联苯胺试验及相关试剂对血痕DNA检验的影响。方法制作含1μL静脉血的滤纸血痕970份,其中10份为对照样本,960份经联苯胺试验及相关试剂分别处理后,采用Chelex-100法和硅珠法提取DNA,Amp F詛STR~(TM)Identifiler~(TM)Plus PCR扩增试剂盒进行复合扩增,对比各组STR分型结果。结果联苯胺试验后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(3.80±1.34)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;联苯胺试验后干燥处理,硅珠法有13例(21.7%)获得全部STR基因座分型结果,且STR基因座检出数[(12.90±1.49)个]远高于Chelex-100法[(4.70±1.96)个](P0.05);加入冰醋酸后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(9.40±2.09)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;只加冰醋酸后干燥处理以及只加四甲基联苯胺乙醇饱和溶液或3%过氧化氢溶液,两种方法均获得完整15个STR基因座分型结果。结论联苯胺试验对血痕的后续DNA检验有很大的影响,Chelex-100法不适合联苯胺试验后血痕的DNA检验,联苯胺试验后干燥处理及采用硅珠纯化的方法可有效提升联苯胺试验后血痕的STR基因座检出数。     

05式警用转轮手枪弹壳接触DNA检验方法的比较

目的比较05式警用转轮手枪弹壳表面接触性DNA检验方法,为实际检验提供参考和借鉴。方法制备40例击发后手枪弹壳的模拟样本,分别用两步转移法提取弹壳表面不同部位检材,采用两种DNA提取法和两种扩增试剂盒对样本进行STR分型检验,比较评价检验结果。结果避开发射药残留区域采用两步转移法提取样本,有助于提高检出率;Chelex-100联合Microcon-100法提取模板DNA的产量最高可达1.18ng,高于Mini M48试剂盒法(0.91ng);MiniFilerTM试剂盒的等位基因检出率(23.61%)高于IdentifilerTM试剂盒(6.41%)。结论采用选择适当区域提取检材,采用Chelex-100联合Microcon-100法提取DNA,经MiniFilerTM试剂盒扩增,进行弹壳接触DNA分型的效果较好。     

DNA数据库建设中批量样品不同DNA提取方法的比较

目的比较和选择自动化工作平台提取DNA的方法,并用于DNA数据库建设。方法用手工Chelex-100法、Biomek3000自动化工作平台结合Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法对实验室收集的建库滤纸血样进行DNA提取,荧光定量技术对上述3种方法提取的模板DNA进行测定;扩增产物用3100基因分析仪检测并用基因分析软件分析。结果手工Chelex-100法、自动化Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法提取的DNA模板浓度分别为0.593ng±0.131ng/μl、0.579ng±0.096ng/μl、0.447ng±0.056ng/μl;成功率分别为100%、98.9%、99.5%。结论本文建立的自动化Chelex-100法可用于大规模DNA数据库建设。     

批量陈旧血样DNA的自动化检验

目的建立批量陈旧血样DNA自动化提取检验的方法。方法采用普通磁珠法和本文建立的磁珠法经TECAN Freedom EVO150—8型自动化工作站分别提取540份陈旧血样模板DNA,采用Sinofiler^TM试剂盒进行荧光标记复合扩增。结果采用普通磁珠法和本文所建DNA提取方法,在540份样本中获得全部基因座STR分型的样本分别为217份和488份,检验成功率分别为40．2％和90．3％。结论本文所建方法可显著提高大批量陈旧血样自动化检验成功率。     

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较CSCD

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。     

载体法检验微量检材DNA

目的解决微量生物检材DNA检验难题。方法采用载体法对已知微量血样DNA进行检验，再与目前高灵敏度的Chelex-100提取的DNA检验的相应结果进行比较。结果载体法针对微量血样的DNA检验。不但能得到正确的STR分型结果．同时在检验灵敏度上比Chelex-100法高出2倍以上。结论载体法可提高微量生物栓材中DNA检出率，且操作简单，在法医检案工作中具有较高应用价值。     

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。     

细胞裂解法和磁珠法在法医DNA检验中的对比

目的 比较细胞裂解法和磁珠法在法医DNA检验中的效果,探讨两种方法在法医学检验中的运用。方法 使用细胞裂解法和磁珠法获取不同数量的THP-1细胞的基因组DNA并使用实时定量PCR检测DNA含量。使用细胞裂解法和磁珠法对不同稀释倍数的人血进行STR分型检测。结果 当THP-1细胞数量为100、400和800个时,使用细胞裂解法提取的DNA含量分别为(1.219±0.334)、(5.081±0.335)、(9.332±0.318) ng;使用磁珠法提取的DNA含量分别为(1.020±0.281)、(3.634±0.482)、(7.896±0.759) ng,在THP-1细胞数量为400和800个时,细胞裂解法提取的DNA含量高于磁珠法(P<0.05)。使用细胞裂解法和磁珠法检测不同稀释倍数人血的STR分型时灵敏度相近,在血样稀释100、300和500倍时均能获取完整的STR分型,血样稀释700倍时,均无法检出完整STR分型。使用细胞裂解法无法检出未稀释人血的STR分型。结论 细胞裂解法操作方便,能最大程度保留模板DNA,有望适用于微量血痕检验。     

土块上附着血迹DNA提取方法效果的比较

正本文对3份用Chelex-100法未获得STR分型的土块附着血迹检材,采用M48、DNA IQ裂解纯化法成功获取STR分型。1案例样本与检验1.1样本来源2014年4月27日,某县发生一起报复杀人案,现场提取的带血土块1份(样本一);2014年5月21日,李某将其子杀死后掩埋在自家水井中,在死者生前居住床下提取带血土块1份(样本二);2014年8     

DYF387S1基因座检出三等位基因1例

正1案例资料1.1简要案情2015年8月7日凌晨,某地发生一起盗窃案。采集嫌疑人血样、烟蒂、鞋子等样本送检。1.2 DNA检验采用Chelex-100法提取嫌疑人黄某某血卡的DNA,QIAcube工作站(QIAGEN公司)提取纯化现场鞋子上的脱落细胞,采用Y-filerTM Plus复合扩增试剂盒(AB公司,美国)进行PCR扩增,3500x L(AB     

镜下单片状头屑DNA提取分型法与EZ-tape法的比较

目的改进常规头屑类样本的EZ-tape提取分型方法,借助显微镜采集单片状头屑,提高样本利用率、降低漏检率,并减少混合分型结果比例。方法采用EZ-tape脱落细胞粘取器和透明胶带粘取2名志愿者轮流佩戴的帽子内侧,EZ-tape法遵循传统方法直接提取DNA,镜下单片状头屑DNA提取分型法(简称"单片头屑分析法")则借助显微镜分拣出透明胶带中的单片状头屑。两种方法均分别进行持续振荡和静置消化。所有样本均采用Chelex-100法提取DNA,扩增及电泳后获得STR分型。比较EZ-tape法及单片头屑分析法所获的STR分型结果。结果 EZ-tape法所获分型中11份(45.8%)样本发生漏检,仅获得单一来源的分型结果,10份(41.7%)样本为混合分型结果,其中6份样本有等位基因插入或丢失。单片头屑分析法有12份样本获得了与志愿者一致的单一来源分型结果,仅2份样本获得混合分型结果。振荡处理的分型准确数高于静置消化(P0.05)。结论 DNA提取过程中进行振荡有利于DNA的释放。单片头屑分析法获得单一来源STR分型成功率较高,样本漏检率低,可作为法医临案工作中头屑类特殊检材的特定样本采集方式。     

浓缩DNA法结合miniSTR分型技术检验微量DNA

目的优化低拷贝数DNA STR分型方法。方法对采用磁珠法或Chelex-100法提取DNA,Identi-filer试剂盒扩增,未获得分型结果的日常检案检材,采用物理浓缩法或过柱浓缩法浓缩DNA,采用miniFilerTM试剂盒再次扩增分型。结果 127例检材中,47例磁珠法提取DNA未获得分型的样品,分型成功率为36%;80例Chelex-100法提取DNA未获分型的样品,分型成功率为30%。结论采用浓缩法和miniFilerTM试剂盒,可以提高日常检案中低拷贝数检材的STR检验分型成功率。     

D12S391基因座检出四等位基因1例

正1案例1.1简要案情1例父子关系鉴定中采集被鉴定人的末梢血进行检测,发现被检父D12S391基因座STR分型为20,21,22,23,后单独采集被检父带毛囊的毛发样本进行验证。1.2DNA检验采用Chelex-100法提取样本基因组DNA。采用Goldeneye誖20A试剂盒[基点认知技术(北京)有限公司]对被鉴定人血样进行扩增,后用EX22试剂盒(无     

男性样本Amel基因座Y片段引物结合区变异1例

1案例资料 1.1 简要案情 2011年11月23日在某地发现1具无名尸体,经解剖仅具有男性生理特征,现场有1处血迹.提取无名尸血样及现场血迹进行DNA分型检验. 1.2 DNA检验 采用Chelex-100法提取尸体及现场血迹样本DNA.采用ID试剂盒进行PCR复合扩增,扩增产物经3130遗传分析仪进行毛细管电泳,用GenemapperID v3.2软件分析各基因座的基因型.2份检材的分型结果一致,提示为同一人,但牙釉质蛋白基因座(amelogenin gene,Amel)分型显示为女性(图1).     

重庆地区汉族人群9个STR基因座遗传多态性

正本文应用STRtyper-10G荧光复合扩增体系,对重庆地区汉族人群9个常染色体STR基因座遗传多态性进行调查,以期为相关研究及实践提供基础数据。1材料与方法样本318名重庆地区无关汉族个体的血样均为重庆市正鼎鉴定所日常工作积累。STR分型所有样本均采用常规Chelex-100法提取DNA,STRtyper-10G荧光复合扩增试剂盒10μL反应体系进行扩增,ABI 3130遗传分析仪毛细管电泳