山羊关节炎－脑炎病毒性综合征的研究概况

山羊关节炎－脑炎病毒性综合征的研究概况田保平，张力跃，李建国，后永昆（中国科学院昆明动物研究所６５０２２３）（云南省思茅地区畜牧兽医站）徐世山，徐永清，杨学昌，李应民（镇源县畜牧兽医技术服务中心）山羊关节炎－脑炎（ＣＡＥ）病毒性综合征是由山羊关节炎－...     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在酶标抗体（ＨＲＰ－Ｆ＿（２３））稀释液中加入４％（ｗ／ｖ）聚乙二醇（ＰＥＧ）６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬ１５Ａ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ＿（４９０）值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法具有实际应用价值。ＰＢＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有普遍意义。     

应用聚合酶链反应检测绵羊和山羊慢病毒

应用聚合酶链反应检测绵羊和山羊慢病毒符子华李淑霞呼西旦易中王进成（新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐８３００００）绵羊进行性肺炎（ＯＰＰ）和山羊关节炎脑炎（ＣＡＥ）均由反转录病毒科慢病毒亚科的相关慢病毒引起。ＯＰＰ在临床上的主要症状为间质性肺炎、乳房炎...     

杆状病毒表达的猪传染性胃肠炎病毒钉状糖蛋白在其血清学诊断上的应用

利用从猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）Ｍｉｌｅｒ株（Ｍ５Ｃ）克隆建立的一株重组杆状病毒（Ｒ２－２）表达的重组ＴＧＥＶ钉状糖蛋白（Ｓ），建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来检测猪群抗ＴＧＥＶ抗体。试验表明，用重组病毒Ｒ２－２接种ｓｆ９细胞（ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）所表达的重组蛋白量在接种后第７２ｈ达到最高值；该重组蛋白能与抗ＴＧＥＶＳ蛋白Ａ位点的单克隆抗体特异性结合。用阻断ＥＬＩＳＡ检测６８份来自无ＴＧＥＶ感染或ＴＧＥＶ（Ｐｕｒｄｕｅｌ５）免疫的仔猪或母猪血清，结果与ＴＧＥＶ蚀斑减数试验完全相符，灵敏度和特异性均为１００％。同时检测来自ＴＧＥＶ试验免疫猪、美国部分地区猪群、我国进口猪以及我国国内猪群血清６２７份，阳性检出率分别为８２．６１％、６１．６２％、５８．３３％和２９．１０％；用中和试验（微量中和试验或病毒蚀斑减数试验）检测的ＴＧＥ血清抗体阳性率分别为８０．８７％、５９．６０％、５６．１１％和３０．６０％，两种方法对抗ＴＧＥＶ抗体的检出率没有显著差异。     

诊断B组轮状病毒的三种酶联免疫方法的建立

用从当地分离鉴定的山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３毒株，在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒，制备抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）及生物素－亲和素系统酶联免疫吸附试验（ＢＡＢＥＬＩＳＡ）。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明，其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法（ＣＩＥ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）作了对比研究，表明此三种方法均较ＣＩＥ和ＰＡＧＥ法敏感。用这三种方法对成人、婴儿、绵羊羔、山羊羔、仔猪的１２０份腹泻粪样（包括实验室接种材料）进行检测，三种方法的检出率分别为１６．７％、１８．３％、２５％，而ＣＩＥ和ＰＡＧＥ的检出率分别为１２．５％和８％。     

SDS┐PAGE和免疫印迹技术对绵羊肺炎霉形体和丝状霉形体山羊亚种膜蛋白的分析

ＳＤＳ┐ＰＡＧＥ和免疫印迹技术对绵羊肺炎霉形体和丝状霉形体山羊亚种膜蛋白的分析１）逯忠新邓光明包慧芳梁桂香（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）绵羊肺炎霉形体（ｙ－９８，下同）和丝状霉形体山羊亚种（ＰＧ３，下同），都能引起山羊传染性胸膜肺炎，两...     

现地马传贫琼扩阴性酶联免疫法阳性病马血清的特异性试验

在内蒙古牙克石市图里河镇非马传贫注苗区，用琼脂扩散试验（ＩＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）两种方法对６４匹马进行了对比检查，检出ＩＤ、ＥＬＩＳＡ双阳性马４匹、ＥＬＩＳＡ单阳性马３匹。对３匹ＩＤ阴性，ＥＬＩＳＡ阳性马血清用不同浓度琼扩抗原重复检测结果均为阴性，而用不同批次的ＥＬＩＳＡ抗原包被板及酶标抗体检测结果均为阳性，用马传贫病毒抗原对３匹单阳性马血清中和后，再进行ＥＬＩＳＡ测定，ＯＤ值均降低５０％以上。     

鸡传染性法氏囊病的快速诊断

应用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＦＭ＿１４）及其荧光标记物（ＦＭ＿１４－ＦＩＴＣ），对接种ＩＢＤ疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳ－Ａ）和琼脂扩散试验（ＡＧＰ）三种检测方法的比较。结果表明，鸡接种疫苗后１０天内ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性反应，而ＡＧＰ只在接种后６～８天的样品中检出抗原。２２例人工感染鸡和４０例自然发病鸡组织的检测结果表明，ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的敏感性基本一致，且高于ＡＧＰ，它们的整鸡阳性率分别为９６．８％、９５．２％和３８．７％；所有的ＡＧＰ阳性标本Ｄｏｔ－ＥＬＩ－ＳＡ和ＤＦＡ均为阳性，后两种方法的符合率为８７％。９６批次（被检鸡群达３８７００头份）野外送检病例之脾、肺、肾和法氏囊组织切片ＤＦＡ阳性率分别为４０％，１１％、１０％和８８％，而总阳性率则为９５％。     

应用酶联免疫吸附试验检测实验感染绵羊进行性肺炎病毒的山羊血清抗体

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）在接种绵羊进行性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）的山羊血清中可测到ＯＰＰＶ抗体。抗体的最早检出时间是接毒后的第１５ｄ，且４只接毒山羊都呈阳性反应。检测结果表明，ＯＰＰＶ可在山羊体内诱生较强的体液免疫应答反应。试验所用的ＥＬＩＳＡ除可用于ＯＰＰＶ通过山羊体的传代研究之外，还可应用于绵羊进行性肺炎（ＯＰＰ）的诊断     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

ELISA双抗体夹心法诊断犬冠状病毒肠炎

将电镜检查犬冠状病毒阳性的病犬粪便，经ＰＥＧ沉淀、蔗糖线性梯度超速离心，用提纯的抗原免疫豚鼠制备抗血清，经饱和硫酸铵粗提、ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ５０层析柱纯化提取ＩｇＧ。将提纯的ＩｇＧ与辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，建立了诊断犬冠状病毒的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。对收集的４５份粪便样品进行检测，并以电镜检查作为旁证，证明该法具有特异、敏感的特点，可在４小时内报告结果。     

我国11个省份山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的血清抗体检测

为摸清我国山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的流行情况,用竞争ELISA(C-ELISA)方法对采自河北等11个省份的山羊与绵羊血清进行了抗体检测。结果显示,共检测山羊血清2 083头份,检出山羊关节炎-脑炎抗体阳性血清8份,阳性率为0.38%;检测绵羊血清1 339份,检出绵羊进行性肺炎抗体阳性血清6份,阳性率为0.45%。按不同山羊血清来源统计,山羊关节炎-脑炎的规模场阳性率为0.51%,散养户阳性率为0.50%;按不同绵羊血清来源统计,绵羊进行性肺炎的规模场阳性率为0.53%,屠宰场阳性率为0.12%。按不同山羊饲养方式统计,山羊关节炎-脑炎的全舍饲阳性率为0.41%,半舍饲阳性率为0.35%,放牧阳性率为0.35%。按不同绵羊饲养方式统计,绵羊进行性肺炎的全舍饲阳性率为0.48%,半舍饲阳性率为0.26%,放牧阳性率为0.85%。结果表明,我国山羊与绵羊中分别存在山羊关节炎-脑炎与绵羊进行性肺炎的感染,但感染流行率较低。     

抗运动神经元抗体对离体培养的大鼠脊髓神经元NGF低亲和力受体mRNA表达的影响

为探明特异性抗体对神经元的损伤机制，分离提取猪脊髓前角运动神经元并作为抗原免疫动物，分离纯化ＩｇＧ，观察这种ＩｇＧ（ａｎｔｉ－ＳＭＮ）对无血清培养大鼠脊髓神经元的影响。结果表明，培养的脊髓细胞中确有部分神经元表达ＬＮＧＦＲｍＲＮＡ，这些阳性细胞呈多角形、三角形或椭圆形，胞浆呈蓝黑色，胞核未着色，即为运动神经元；培养神经元暴露于ａｎｔｉ－ＳＭＮ４８ｈ后，ａｎｔｉ－ＳＭＮ组ＬＮＧＦＲ阳性细胞明显减少，狭缝杂交定量检测ａｎｔｉ－ＳＭＮ组ＬＮＧＦＲｍＲＮＡ表达量较对照组降低６０％；培养细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放量在抗体组明显增加并且呈量效关系；ａｎｔｉ－ＳＭＮ组钙结合蛋白免疫阳性神经元在培养细胞暴露于抗体４８ｈ时明显增加，胆碱酯酶（（ＡＣｈＥ）阳性细胞则显著减少。提示ＬＮＧＦＲ参与抗体介导的神经元损伤，可作为观察脊髓运动神经元的一个特异指标，ａｎｔｉ－ＳＭＮ对培养脊髓神经元有明显的细胞毒性作用     

应用酶联免疫吸附试验检测鸡毒霉形体卵黄抗体

应用酶联免疫吸附试验检测鸡毒霉形体卵黄抗体郭建华陈明勇陈德威（中国农业大学实验动物所北京１０００９４）血清平板凝集试验（ＳＰＡ）、血凝抑制试验（ＨＩ）及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）已用于鸡毒霉形体（ＭＧ）血清抗体的检测，但这些方法都需要采集血清，使...     

斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率     

分泌抗鸡病毒性关节炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用鸡病毒性关节炎病毒（ＲｅｏＶ）免疫８ＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ＿２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下融合，用ＥＬＩＳＡ法检测和筛选，以有限稀译法克隆３次，获得４株分泌抗ＲｅｏＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，在传代期间能稳定地分泌ＭｃＡｂ。用杂交瘤细胞注射ＥＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水，其ＥＬＩＳＡ抗体效阶达４０００～８０００，在－７０℃条件下保存半年，其抗体效价不变。特异性分析结果表明，该ＭｃＡｂ只特异地与ＲｅｏＶ发生反应，而不与ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＢＤＶ发生反应。     

斑点酶联免疫吸附试验检测牛羊捻转血矛线虫病的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测牛羊捻转血矛线虫病抗体，经对３９头剖检羊血纸检测，结果表明该法与剖检法的阳性符合率达１００％（２７／２７），阴性符合率也达１００％（１２／１２）。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ能检出第四胃寄生１～３３８条捻转血矛线虫羊的血清或血纸抗体；应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５９９份牛、羊血纸的测定结果，与粪检法的阳性符合率达９５．５８％，阴性符合率达９１．４３％。初步认为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ作为牛、羊捻转血矛线虫病检测手段是可行的     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用

应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体（ＩＢＤＶ－ＭｃＡｂ）致敏的聚苯乙稀胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制（ＬＰＡＩ）试验。ＬＰＡ可检测出６ｍｇ／Ｌ的ＩＢＤＶ蛋白。比较了ＬＰＡ、直接萤光抗体试验（ＤＦＡ）和琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性、敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ的检出率高于ＡＧＰ，ＬＰＡ和ＤＦＡ检测结果的符合率为８６％。     

山羊关节炎-脑炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,采用PCR方法扩增山羊关节炎-脑炎病毒CA蛋白编码基因序列,然后克隆至原核表达载体pET-28a(+),诱导含有重组载体pET-28a(+)-CA的大肠杆菌BL21(DE3)表达重组蛋白rHis-CA。采用Ni柱亲和层析方法纯化重组蛋白rHisCA,并以纯化的rHis-CA为包被抗原建立检测山羊关节炎-脑炎血清抗体的间接ELISA方法。结果表明重组蛋白rHis-CA以包涵体形式表达,具有良好的反应原性。所建立的rHis-CA间接ELISA方法的最适抗原包被质量浓度和血清稀释度分别为0.4 μg/mL和1∶100,血清阴阳性的D_(450)临界值为0.45。该方法仅与山羊关节炎-脑炎病毒阳性血清发生特异性反应,不与山羊痘病毒、蓝舌病病毒和口蹄疫病毒阳性血清发生交叉反应。对来自陕西地区的48份山羊血清进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA和琼脂凝胶免疫扩散试验的阳性检出率分别为35.41%(17/48)和31.25%(15/48)。对来自天津地区2个山羊场的240份山羊血清样本进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA方法和琼脂凝胶免疫扩散试验的检测结果均为阴性。     

鸡传染性法氏囊病ELISA快速诊断盒的研制及应用

用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒对ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及ＩＢＤ阳性血清，ＩＢＤＶ阴性法氏囊及ＩＢＤ阴性血清和ＩＢ，ＩＬＴ，ＥＳＤ－７６，ＲＥＯ，ＮＤ，ＭＤ等６种鸡传染病的抗原及阳性血清检测，只有ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应，证明快速诊断盒对ＩＢＤＶ法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的，与其它６种传染病的抗原和抗体无交叉反应。与ＡＧＰ对比试验结果表明，检测ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒时，快速诊断盒的敏感性比ＡＧＰ的敏感性高３２倍；检测ＩＢＤ阳性血清及蛋黄抗体液时，前者的敏感性比后者高２～１０倍。快速诊断盒的保存期可达２４个月以上。通过在１２个省（市、区）有关单位试用，证明ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒具有快速、简便、特异、灵敏等优点