ABO位点限制性扩增片段长度多态性的研究

建立了PCR扩增、限制性酶切、8％（T）、5％（C）聚丙烯酸胺凝胶垂直电泳和银染检测ABO位点的限制性片段长度多态性的方法体系。应用Amp-RFLP技术对185名中国人（哈尔滨）ABO位点的基因频率和基因型分布进行了调查和统计分析。ABO位点特异片段长度为140～200bp，基因频率为0．2000～0．5568。6种基因型频率为0．973～0．3135，杂合度0．5838，Dp值0．7146。经H－W平衡吻合度检测，完全符合群体遗传多态分布。通过对11个家庭33名相关个体的分析，证明完全符合孟德尔遗传定律。ABO基因型检验适用于法庭科学的个体识别和亲权鉴定。     

东北地区4个民族ABO血型基因频率的调查分析

目的研究东北地区汉族、满族、蒙古族和朝鲜族人群中ABO基因型及等位基因频率分布特点。方法应用GoldeneyeTMABO基因分型系统共检测1588例4民族人群样本的ABO基因型,并绘制遗传系统发生树。结果 4民族A、B、O基因频率分别为:0.208 9、0.241 5、0.549 6(汉族),0.230 8、0.233 0、0.536 2(满族),0.213 0、0.237 7、0.549 3(蒙古族),0.223 0、0.230 0、0.547 0(朝鲜族)。辽宁满族与吉林满族ABO血型分布存在显著性差异,并在系统发生树中,吉林满族相对其他六个群体,自成一簇。辽宁满族与吉林朝鲜族,辽宁汉族与辽宁蒙古族遗传关系较近。结论东北地区汉、满、蒙、朝4民族人群ABO血型分布状况及基因频率均相对稳定。比较相关群体间遗传距离发现,同地区或近地域内的不同民族群体之间存在一定的基因交流,个别群体又相对独立。     

中国人群血型遗传学数据库、统计分析、鉴别系统的建立与应用

“中国人群血型遗传学数据库、统计分析、鉴别系统”的研制，为法医血清学及与人类血型遗传有关各学科提供了先进数据处理工具，突破了以往法医物证检验否定意义大的局限性。一、“系统”的数学模型和数据处理方法1．数学模型通过分析研究已发表的中国人73个血型系统的遗传方式和特点，根据计算机处理的需要，分成十一种类型：（1）一个显性基因、一个隐性基因组成的血型系统。常见如P血型系统等；（2）两个显性基因、一个隐性基因组成的血型系统。常见如ABO血型系统等；（3）ABO亚型系统。（4）两个连锁座位、共显性基因组成的血型系统…     

中国北方汉族人群HLA-DQα基因型及其等位基因频率的分布

应用PCR和等位基因特异性寡该苷酸（ASO）探针杂交技术对中国北方汉族人群的HLA－DQα基因进行分型。在246例无关个体中观察到4种等位基因组成的10种基因型。等位基因频率分布在10．0～31．9％之间。基因型的分布符合Hardy－Weinberg定律。DP值为0．8669。对6个家系49个个体的调查表明，HLA－DQα基因按孟德尔方式遗传。不同人群HLA－DQα的DP值比较，中国人群高于其它人群。     

中国成都地区汉族群体5个STR基因座的遗传多态性

采用PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析技术,调查中国成都汉族群体DIS1656、D851179、D9S302、D185535及D195253等5个STR基因座的等位基因频率分布。D1S1656检出11个等位基因,35种基因型;DSS1179检出9个等位基因,32种基因型;D95302检出12个等位基因,50种基因型;D185535检出7个等位基因,20种基因型;D195253检出8个等位基因,28种基因型。5个STR基因座基因型频率分布符合Hardy-weinberg平衡（P＞0．05）。个人识别机率（DP）为0．92～0．98。分析了二代3口之家的遗传模式,证明5个STR基因座均符合孟德尔遗传规律。5个STR基因座PCR扩增采用同一条件,方法简单、快速、灵敏、重复性好,可用于法科学亲子鉴定和个人识别。     

ABO基因分型的等位基因特异性引物消耗法

目的建立一种新的ABO基因型分型的等位基因特异性引物消耗法(CASPA)。方法根据ABO基因碱基序列中的第261、297、803nt3处多态性位点设计6条特异性引物及1条公用引物,采用CASPA法鉴定146名中国汉族无关个体血液斑样品的ABO基因型。结果146名中国汉族无关个体血液斑样品中检出AAb、AB、AO1、BOv、O1Ov、AA、BB、O1O1、BO1等9种基因型,结果明确,其基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论ABO基因型CASPA分型方法为ABO血型的鉴定提供了一个新的检测方法。     

荧光标记的ASP-PCR法对ABO基因分型的研究

目的建立一种方便准确的ABO基因分型检验方法。方法选取ABO基因外显子6和7上的3个位点nt261、nt297和nt803,分别对第6和7外显子进行扩增,并对扩增产物进行测序得出样本的基因型;然后用荧光标记的等位基因特异性引物对已知基因型的样本进行扩增,并用3130遗传分析仪进行电泳分析。结果该方法检出的基因型与测序得出的基因型完全一致。结论等位基因特异性引物法分型结果准确,特异性高,可用于法医学中对犯罪嫌疑人的筛查。     

中国成都地区汉族群体四核苷酸重复序列FIBRA基因座的多态性

建立FIBRA基因座Amp-FLP分型方法,分析136个无关中国成都地区汉族人群中STRFIBRA基因座的多态性,并将其应用于法医学实践。用Amp－FLP技术,丙烯酰胺凝胶电泳,银染,对FIBRA基因座进行分型。观察到16个等位基因,44种不同的基因型。观察杂合度（H）为0．9044,个体识别力（DP）为0．9588,多态性信息量（PIC）为0．8595,非父排除率（CE）为67．4％,观察的基因型分布符合Hardy－Weinberg平衡;10个家系调查结果表明,该基因座符合孟德尔遗传规律。FIBRA基因座多态性好,所建立的Amp-FLP方法适用于法科学的亲子鉴定和个人识别。     

D19S400基因座在中国3个汉族群体与日本人中的遗传多态性研究

为了解中国广州、吉林、成都三个地区汉族和日本人群体D19540O基因座基因频率分布，并获得中国三个汉族群体和日本群体D19M00基因座的群体遗传数据，比较它们之间的遗传学差异，探究在法医学应用中的意义。应用PCR扩增技术，聚丙烯酸胺凝胶垂直板电泳对D19S400基因座分型。在四个群体469个个体中共检出11个等位基因，45种基因型，基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡。各群体的观察杂合度为0.75～0.84，非父排除概率为0.6057～0.6582，个人识别机率为0．9301～0．9480。四个群体之间基因频率分布无显著性差异（P＞0．05）。结果表明，D19S400基因座在群体遗传学研究和法医学个人识别中有较高应用价值。     

50例强奸案混合斑中精子ABO基因分型

自 1990年Yamamoto[1] 报道了ABO基因的核苷酸序列以来 ,国内外学者们致力于建立ABO基因型的测定方法 ,如PCR RFLP法[2 ] 、PCR 直接测序[3] 、PCR SSCP法[4 ] 等。但由于ABO基因分型操作烦琐 ,个体识别率低 ,很少被应用于法庭科学实践。本研究对HerrinG[5] 方法进行改良 ,运用PCR RFLP技术 ,检测 5 0例经STR认定的强奸案混合斑中的精子ABO基因型和犯罪嫌疑人血痕的ABO基因型 ,并探讨ABO基因分型在实际检案中的可信性及应用价值。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　样本　 5 0例强奸案中的混合斑检材和案犯血痕 (北京市公安…     

ABO genotyping by polymerase chain reaction.

ABO blood group system's genotyping by polymerase chain reaction in genomic DNA level is developed. The positions of nucleotide 258 and 700 of cDNA from A transferase were used to distinguish A, B, and O alleles by restriction enzyme digestion. To identify the 258th nucleotide, a 199- or 200-bp DNA fragment was amplified by PCR and digested with Kpn I. For the 700th nucleotide, a 128-bp PCR amplified fragment was designed and digested with Alu I. By examining the DNA fragment digested patterns, ABO genotypes were easily determined. Results obtained using this method on 20 ABO-known peripheral blood samples showed that this new technique could provide accurate ABO genotype. Biologic forensic samples, such as, blood stains, saliva stains, semen stains, hair, bone tissue, and semen contaminated with vaginal secretion were also successfully typed. This rapid, sensitive and reliable method should be applicable not only in forensic identification but also in medical examination.     

ABO基因型检验及其法医学应用研究

目的采用ＰＣＲ技术对ＡＢＯ血型系统进行基因型检验。方法选择最佳扩增条件进行四引物复合扩增,用限制性内切酶ＫｐｎＩ和ＡｌｕＩ分别酶解扩增产物,电泳分离、银染显色法检验ＡＢＯ基因型。结果对２７０例血斑、２０例混合斑、２０根毛发（有毛囊）、１２份唾液斑等不同的生物检材进行了分型,与血清学方法检验结果相符。结论该方法能够应用于法医学的检验     

HLA—A基因座分步PCR—SSP分型研究

目的使HLA基因分型能应用于法医常见检材的个人识别。方法 建立检测HLA—A基因座的分步PCR—SSP方法。先用一对HLA—A基因座特异的引物作第一次扩增,以所得产物为模板,分别用对HLA—A30、A31、A33特异的3对引物作第二次扩增,二次扩增的产物经电泳判型。结果 1130例血清分型为HLA—A30、A31、A33的血痕,其PCR—SSP分型和血清分型的不符合率为29％;室温保存2年的精斑、唾液斑,保存18年的血痕第一次扩增均获得满意的结果。结论法医亲子鉴定和个人识别宜用基因分型替代血清分型。HLA—A基因座分步PCR—SSP基因分型适用于法医检材。     

ABO基因分型与多重STR联合检测在法医学中的应用

目的建立ABO基因型和Goldeneye16A试剂盒联合检测的方法,并评价其在法医学实践中的应用价值。方法将6种ABO基因型(A/A,A/O,B/B,B/O,A/B,O/O)的序列特异性引物(PCR-SSP)检测方法与Goldeneye16A试剂盒相整合进行同步分型。通过对460份男性个体血痕样本、9947A DNA及90份案件样本进行检测,考察方法的一致性、灵敏度及对法庭科学检材的适用性。结果应用本文方法可同时检出6种ABO基因型和15个常染色体STR基因座及性别决定基因座,检测灵敏度为125pg,其中ABO基因检测灵敏度达63pg。460份男性血痕和90份案件检材证实该联合分型方法用于各类检材结果准确、稳定。结论本文ABO基因分型与多重STR联合检测方法,适用于各类含有核细胞的生物检材,在法庭科学DNA鉴定中有较好的应用前景。     

Multicolor Real-Time PCR Genotyping of ABO System Using Displacing Probes

Abstract:  Rapid and informative ABO genotyping has become increasingly popular in forensic use. We developed a multiplex real-time polymerase chain reaction (PCR) approach to genotype ABO major groups and subgroups. Seven differently fluorophor-labeled displacing probes for O¹(261delG), A(261G), A(796C/803C), B(796A/803C), O² (802G>A), A² (1059delC), and A² (1009A>G) were combined in one or two PCRs to determine either ABO major groups or subgroups. The method correctly detected 13 reference DNA samples. A blind test of 237 samples resulted in complete agreement with their phenotypes, and 110 of these 237 samples as well as with PCR-SSP method. The whole analysis could be finished in less than 100 min at substantially low material cost and the template DNA ranging from 0.16 to 500 ng per reaction could be quantitatively detected. Despite the limited informativeness of ABO genotyping, the developed methods could find application in rapid and inexpensive screening of forensic settings.     

Rapid direct PCR for ABO blood typing

Many different molecular typing methods have been reported to complement routine serological ABO blood typing in forensics. However, these ABO genotyping methods are often time-consuming and call for an initial DNA isolation step that requires the use of expensive kits or reagents. We report here a rapid direct ABO genotyping method that eliminates the need for DNA extraction from fresh blood, hair, and body fluid stains before PCR. Using a fast PCR instrument and an optimized polymerase, the genotyping method-which employs a multiplex allele-specific primer set for the simultaneous detection of three single-nucleotide polymorphism (SNP) sites (nucleotides 261, 526, and 803)-identifies A, B, O01/O02, O03, and cis-AB01 alleles in around 70 min from sample collection to electropherogram. Not only will this ABO genotyping method be efficiently used in forensic practice for rapid screening of samples before full-blown multilocus short tandem repeat profiling, but it will also demonstrate an example of rapid direct genotyping of SNPs that offers the advantages of time- and cost-efficiency, convenience, and reduced contamination during DNA analysis.     

运用二重PCR和DNA芯片技术检测ABO基因型

目的以玻片为载体,用寡核苷酸探针杂交技术检测ABO基因型。方法根据ABO基因座外显子6和外显子7的3个SNP点的序列分布特征设计4条寡核苷酸探针,制成分型芯片。将待测样品DNA用末端标记了Cy5的引物进行二重PCR扩增,产物与芯片上的探针进行杂交,根据杂交产生的荧光信号确定样品的ABO基因型。结果利用ABO芯片,可对血斑、毛发等微量检材进行ABO基因型检测。对115名汉族无关个体的调查表明,ABO基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡,等位基因杂合度观察值和期望值分别为0.591、0.616,多态信息含量为0.544,二联体和三联体非父排除率分别为0.188、0.334,个体识别能力为0.777。结论通过DNA芯片检测ABO基因型的技术适用于法医学样本,可满足高通量的检测需求。     

A novel method for ABO genotyping using a DNA chip

ABO genotyping is often performed to identify the blood type of decomposed samples, which is difficult to be determined by a serological test. In this study, we developed a simple method for ABO genotyping using a DNA chip. In this method, polymerase chain reaction-amplified and fluorescent-labeled fragments in the ABO gene and primate-specific D17Z1 were hybridized with DNA probes on a chip designed to detect single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the ABO gene and part of the D17Z1 sequence. Using blood samples from 42 volunteers and 10 animal species, we investigated whether the chip could be used to detect SNPs in the ABO gene and the D17Z1 sequence. This method was then applied to various forensic samples, and it was confirmed that this method was suitable for the simultaneous analyses of ABO genotyping and species identification. This method fulfills the recent need for the development of rapid and convenient methods for criminal investigations.