放置时间对烟蒂上DNA含量及STR分型的影响

目的 探讨不同放置时间对烟蒂上DNA含量及STR分型的影响.方法 以lO名志愿者的40枚"红双喜"烟蒂为检材(每人4枚),用chelex-100法分别在第1、4、7和1O周时提取烟蒂样本外层烟纸和海绵上的DNA,用Quantifiler人类DNA定量试剂盒进行DNA定量.并同时用AmpFL STR Profiler和IdentifilerrM试剂盒(AB公司)进行PCR扩增及STR分型. 结果放置第1、4、7和10周的烟蒂烟纸DNA质量浓度范围分别为0.104～2.52、0.110～2.41、0.096 0～2.32和0.085 0～2.28ng/μL,16个基因座检出率分别为100%、90%、75%和62.5%.海绵DNA质量浓度范围分别为0.0180～2.40、0.0171～2.25、0.0165～2.15和0.0160～2.15ng/μL,16个基因座检出率分别为97.5%、82.5%、50%和12.5%. 结论放置时间对烟纸和海绵上的DNA含量影响不大,对STR分型影响显著,STR分型受海绵的影响比烟纸明显.放置时间越久.检出率越低.     

环氧乙烷消杀DNA污染效果初探

目的初探环氧乙烷消杀DNA污染的效果。方法收集98例分别含有唾液、皮屑、汗斑、毛发、血斑、肋软骨的法医物证样本,分两组进行环氧乙烷灭菌6h和8h,提取DNA后扩增,使用3130XL或3500XL测序仪检测进行STR分型。结果 EO 6h组44例样本中有2例口腔拭子检出阳性结果,EO 8h组54例样本中有1例毛发检出阳性结果,阳性样本STR图谱表明仅有少量DNA残留,其余生物样本未检测到STR图谱。结论环氧乙烷能有效消杀DNA污染,可适用于DNA检验耗材的灭菌。     

尿液及尿斑DNA分型的研究

目的研究尿液及尿斑的DNA提取及其检验。方法用Chelex100法及QIAampMiniKit提取尿液及尿斑样本中的DNA,进行PCR扩增及STR检验。结果新鲜的及存放时间在12h以内的尿液样本能得到较好的分型结果;存放2d左右的尿液样本有50%能检出基因型;存放7d及更长时间的尿液样本全部不能检出基因型;尿斑样本的分型成功率很低。结论较新鲜的尿液样本均能进行DNA分型,在法医检案中具有应用价值。     

法医SNP系谱推断技术破获古汉墓被盗案1例

正1案例1.1简要案情和前期检验2016年3月,山西某镇古汉墓被盗,现场提取嫌疑人遗留烟蒂1枚,检出嫌疑人常染色体STR分型,但未比中人员。由于当地当时未建立男性家族排查库,故未对Y-STR分型进行检验。2020年7月,检验烟蒂获得Y-STR分型,录入男性家族排查系统,比中案发地附近刘姓、马姓等8个家系共计17人(其中3人分型一致,3人有2个位点分型不一致,11人有3个位点分型不一致)。检验男性家族排查库中人员血样的常染色体STR,与嫌疑人未比中,故使用法医SNP系谱推断技术对家系进行排查。     

DNA IQ磁珠法结合Maxwell~（TM） 16自动仪提取接触DNA

目的研究DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM 16自动仪对接触DNA提取的应用价值。方法 151份案件接触DNA检材95℃裂解后,采用DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM 16自动仪提取DNA,然后进行DNA定量和STR分型检测,统计各种类型的接触DNA含量I、PC CT值和STR分型成功率。结果 151份案件接触DNA检材中,除果核平均DNA获得量为9.51ng以外,其它接触检材的平均DNA获得量均大于10ng,烟蒂检验成功率最高为93%,果核检验成功率较低,为60%。所有DNA样品的IPC CT值均在27左右,纯度高。结论大部分接触DNA检材采用DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM 16自动仪可提取到足以进行STR分型的DNA。     

运用酚-氯仿法结合磁珠法提取蝇蛆体内人类DNA

目的建立运用酚-氯仿法结合磁珠法从蝇蛆嗉囊内提取人类DNA的方法,从而提高STR分型检验的灵敏度。方法采用酚-氯仿法对蝇蛆嗉囊内容物中的人类DNA进行提取,提取产物经磁珠法纯化浓缩后用QuantifilerTM人类DNA定量试剂盒在7500型实时荧光定量PCR仪上进行PCR定量,再用AmpF■STR IndentifilerTM试剂盒在3130XL-Avant遗传分析仪上对这些DNA样本进行STR分型。结果本研究建立的方法可增加模板DNA浓度约为单独使用酚-氯仿法的2倍。用此方法提取到的DNA浓度[（0.218±0.041）ng/μL]可获得全部16个STR分型结果。结论酚-氯仿法结合磁珠法可以有效地提高提取到的人类DNA样本STR分型检验的灵敏度,对于从事法医昆虫学方面研究的工作者有较好的实用价值。     

联苯胺试验对血痕DNA检验的影响

目的探讨联苯胺试验及相关试剂对血痕DNA检验的影响。方法制作含1μL静脉血的滤纸血痕970份,其中10份为对照样本,960份经联苯胺试验及相关试剂分别处理后,采用Chelex-100法和硅珠法提取DNA,Amp F詛STR~(TM)Identifiler~(TM)Plus PCR扩增试剂盒进行复合扩增,对比各组STR分型结果。结果联苯胺试验后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(3.80±1.34)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;联苯胺试验后干燥处理,硅珠法有13例(21.7%)获得全部STR基因座分型结果,且STR基因座检出数[(12.90±1.49)个]远高于Chelex-100法[(4.70±1.96)个](P0.05);加入冰醋酸后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(9.40±2.09)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;只加冰醋酸后干燥处理以及只加四甲基联苯胺乙醇饱和溶液或3%过氧化氢溶液,两种方法均获得完整15个STR基因座分型结果。结论联苯胺试验对血痕的后续DNA检验有很大的影响,Chelex-100法不适合联苯胺试验后血痕的DNA检验,联苯胺试验后干燥处理及采用硅珠纯化的方法可有效提升联苯胺试验后血痕的STR基因座检出数。     

衣物类生物检材DNA检验的研究

目的建立对衣物类生物检材STR检验的有效自动提取纯化方法。方法对100例衣物类生物检材用EZ1DNA Investigator试剂盒、EZ1Advanced XL工作站的Large-Volume程序(大体积法)进行提取纯化,AmpFLSTR~Identifiler~Plus荧光STR复合扩增,3500x L型遗传分析仪分析结果。结果 69份检材中检出了单一DNA分型结果,9份检出了混合基因型,22份未检出基因型。结论该方法对衣物类生物检材DNA提取纯化后进行荧光STR检测,可应用于法庭科学实践。     

激光显微捕获技术用于尿液脱落细胞DNA检测

目的采用激光显微捕获技术（LCM）捕获尿液脱落细胞,并进行STR分型。方法收集10份健康成人尿液样本,根据储存时间分组,其中新鲜尿液组（≤24h）分别采用Chelex-100及LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,储存尿液组（〉24h）再分为4℃组和室温组,分别在4～30d内不同时间点采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA;各组提取的模板DNA进行扩增及SRT分型检验。结果新鲜尿液组采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,所有样本均可检出全部基因座（16个）,采用Chelex-100法则在部分基因座上出现等位基因丢失、非特异性扩增、峰值低等现象;4℃储存10d和室温储存4d以内的尿液经检验可明确判读12个以上基因座,4℃20～30d及室温7d,可检出7个以上基因座。结论 LCM技术可用于尿液检材的DNA分型检验,且检材应尽可能4℃保存并尽快检验。     

国产磁珠结合自动化工作站批量提取生物检材DNA的应用

目的建立国产磁珠结合自动化工作站批量提取案件中生物检材DNA的方法。方法采用国产磁珠结合Bio-Robert Universal System自动化工作站对案件中常见的生物样本进行DNA提取,检测Identifiler系统16个STR基因座,在ABI3130XL遗传分析仪上进行STR分型。其中210份样品同时在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量。结果9100份10类生物检材应用国产磁珠结合自动化工作站,大部分可提取到足够的DNA进行STR检验。STR检验成功率最高的为口腔拭子、肌肉,达100%,接触细胞检材的成功率较低,为50.0%。结论国产磁珠结合自动化工作站可用于案件中常见的大部分生物样本的DNA提取。     

Evaluation and usefulness of reverse dot blot DNA-PolyMarker typing in forensic case work

Experiments were performed to evaluate the Amplitype PolyMarker DNA typing system for application to forensic casework. DNA extraction using chelex was compared with phenol-chloroform extraction for various biological materials including postmortem blood, blood samples used for alcohol quantification, fresh urine, envelopes and cigarette butts. Different amounts of genomic DNA were amplified to test the sensitivity of the Amplitype PM. Mixed samples of two different bloods were typed to determine the dilution at which mixtures could be detected. Different storage conditions were evaluated using urine samples. Postmortem blood samples were typed during 4 months to determine the effects of natural degradation. A population sample of 105 unrelated individuals from South-West Switzerland was analyzed and the genotype frequencies were compared with those reported by others. Finally, practical usefulness of the Amplitype PM system is illustrated by analysing casework samples. The results of this validation proved the great usefulness and sensitivity of the Amplitype PM system using the appropriate extraction and typing method. However, mixed samples had to be interpreted with caution owing to the possibility of non-specific alleles with stored material such as urine and postmortem blood.     

人体接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响

目的比较3种常见的接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响。方法收集烟蒂、牙刷、纱线手套各10份;分别采用95℃、70℃直接裂解和TNE、SDS、PK预消化方式进行前处理,再用磁珠法提取纯化DNA,并进行DNA定量,统计提取的接触DNA量和IPC CT值;同时用Sinofiler复合扩增系统进行STR分型检测。结果 3种方法前处理后用磁珠提取的DNA纯度均较高I,PC CT值在26.63～27.19之间。用预消化法获得的DNA量高于裂解法,而95℃裂解与70℃裂解方法提取的DNA量无显著性差异。STR扩增检测结果亦表明,采用预消化法处理的样品STR分型成功率高于裂解法9,5℃与70℃裂解方法处理的样品STR分型成功率无显著性差异。结论人体接触检材采用预消化磁珠法提取DNA,有助于提高STR检验成功率。     

一种改良的精斑涂片DNA检验方法

目的建立一种有效的精斑涂片DNA检验方法。方法以本实验室平时积累的91例精斑涂片为研究对象,采用chelex法提取,结合硅珠法纯化浓缩,提高DNA浓度后进行PCR扩增和STR分型。结果尽管涂片上精子量较少,但chelex法的DNA提取率较高,且硅珠法可以纯化并浓缩模板DNA,本文建立的方法兼具了这两种提取方法的优点,成功率较高。结论精斑涂片可以作DNA检验,在法医检案中具有较高的应用价值。     

Quantitative Analysis of the DNA Distribution on Cigarette Butt Filter Paper*

The distribution of DNA on the filter paper of smoked cigarette butts was quantitatively mapped using real‐time quantitative polymerase chain reaction. The filter papers from smoked cigarette butts collected from indoor and outdoor sources were sliced into equal pieces and the amount of DNA on each slice was determined. This study found that the cigarette butt filter papers sliced parallel to the seam of the cigarette had more uniformly distributed DNA on the slices and in most cases, there was enough DNA on each slice to obtain a complete DNA profile. The perpendicular slices had a less uniform pattern of distribution and some slices did not have enough DNA to obtain an interpretable DNA profile. Cigarette butts found indoors also had more DNA per cigarette on average than cigarette butts found outdoors.     

Comparison of four DNA extraction methods to extract DNA from cigarette butts collected in Lebanon

Cigarette butts collected from crime scenes represent valuable sources of DNA. However the extraction of the genetic material may deem challenging especially when different contaminants may compromise the integrity, quality, and quantity of DNA obtained. This study aims at comparing four extraction methods (Chelex-100, soaking + Chelex-100, Chelex-100?+?PK, and DNA IQ? System) with the intention of identifying the one with maximal recovery rate and profiling success. DNA was extracted using aforementioned four methods from 70 cigarette butts collected from sites across Lebanon. DNA was quantified by qPCR using TaqMan Quantifiler Kit on an Applied Biosystems 7300 SDS instrument and genotypes were obtained using the PowerPlex® 21 kit on an Applied Biosystems 3130 Genetic Analyser. The findings of this work showed that DNA extraction with Chelex-100?+?PK is preferred to the other three methods when seeking both, a high yield and the generation of maximal numbers of full profiles. The Chelex-100?+?PK method is simple, cost effective, and therefore suitable for routine cigarette butts case studies.     

2种陈旧骨骼、牙齿DNA纯化方法的比较

目的比较有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法对陈旧骨骼和牙齿DNA的纯化效果。方法选择10份陈旧骨骼和12份牙齿样本,进行消化后分别采用有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法进行提取纯化,进行DNA定量后用SinofilerTM试剂盒进行检测。结果 2种方法纯化的骨骼、牙齿DNA的IPC CT值无显著差异。有机法+QIAquick纯化法纯化的骨骼、牙齿DNA平均浓度分别为0.180ng/μL±0.068ng/μL和0.132ng/μL±0.027ng/μL,所有样品均获得全部基因分型。DNA IQ磁珠法纯化的DNA平均浓度分别为0.038ng/μL±0.028ng/μL和0.036ng/μL±0.007ng/μL,有5份骨骼和6份牙齿样本仅获得部分基因分型或未能分型。结论有机法+QIAquick纯化法对陈旧骨骼、牙齿DNA的纯化效果优于DNA IQ磁珠法。     

不同分型方法的STR分型差异

目的调查不同的STR分型系统之间分型的一致性。方法 10 0例不同个体的DNA样本分别用单位点聚丙烯酰胺凝胶银染法和PowerPlex16System试剂盒对 13个法医学常用STR位点进行基因分型 ,并比较两种不同分型系统间的分型结果。结果 1例样本在D8S1179位点出现了分型不一致的结果 :银染法的基因型为 12 / 14 ,而用PowerPlex16System试剂盒的分型则为 12 / 15。结论不同的STR分型系统可导致不同的基因分型