河南汉族人群12个X-STR基因座遗传多态性

正采用AGCU X-12荧光标记复合扩增系统,对河南汉族群体12个X-STR基因座的遗传多态性进行调查,旨在为法医学应用及群体遗传学研究提供基础数据。1材料与方法1.1样本538例河南汉族无关个体纸质血样取自作者实验室日常建库积累,男性269名,女性269名。1.2 X-STR扩增及分型检测采用AGCU X-12免提系统(无锡中德美联生物技术有限公司)进行复合扩增,反应体系为10μL,内含反应混合物4μL,引物2μL,C-Taq(2.5U/μL)DNA聚合酶0.25μL。热循环参数为:95℃2min;94℃1min,58℃1min,72℃1min,30个循环;60℃60min;4℃保温。取1μL扩增产物与0.5μL内标Siz-500和10μL去离子甲酰胺混合,95℃变性3min后,冰浴     

云南怒族人群HPRTB、DXS7423、DXS101基因座遗传多态性

HPRTB、DXS7423、DXS101是X染色体上常见的3个STR基因座,定位于Xq22.1-Xq28,其核心序列分别为AGTA、TCCA和CTT-ATT,本文对3个X-STR基因座的等位基因频率和基因型频率数据进行调查,为法医学检案提供基础遗传频率数据。1材料与方法1.1样本采集100份无血缘关系的怒族健康个体静脉血在云南随机采集,每份3m l,EDTA抗凝,-70℃保存[1]。1.2方法1.2.1 DNA提取及扩增Chelex-100法提取基因组DNA[2]。3个基因座引物序列及扩增条件见表1。表1 3个基因座的引物信息及扩增条件基因座PCR引物序列(5’to3’)变性退火延伸循环数HPRTBA…     

云南省汉族p33.6位点的基因频率调查

P33．6（D；S；；l位点）是Jeffreys等人1988年首先报道的一个VNTR位点，国内陈松等人（1993）“’对IO0名中国汉人进行了此位点扩增，得到了分辨率高、清晰易读的图谱。我们参考了Jeffreys和陈松等人的方法，根据本实验室的条件，以云南省汉人为研究对象，进行了此位点的扩增和频率调查，报道如下。材料和方法1．血液取自昆明及玉溪地区100名无关个体（汉族）的静脉血，构檬酸钠抗凝。2．4个家系12人的血样由玉溪地区人民医院血库提供。3．引物序列为：5’－TGTGAGTAGAGGAGA＊＊T＊＊C＊＊＊一丁；5’＊＊G＊＊A＊＊C＊＊T＊…     

HLA-DRBl基因分型芯片的法医物证学应用价值研究

目的对HLA-DRBl基因分型芯片在个体识别中的应用价值进行研究。方法根据HLA-DRBl基因座不同等位基因的独特序列设计探针．制成分型芯片。将待测样品DNA用末端标记了CY5的引物进行PCR扩增，产物与芯片进行杂交．根据杂交产生的荧光信号值确定样品在HLA-DRB1位点的基因型。将这一方法应用于561份样本的HLA-DFIBl基因分型，根据基因型分布统计分析其法医学应用价值。同时．进行了家系调查和方法灵敏度分析，并应用于部分案例。结果利用微量检材．HLA-DRB1基因芯片可检测DRB1位点等位基因26个，基因型的分布符合Harely—Weinberg平衡定律．该位点的观察杂合度(Ho)为0．888，期望杂合度(He)为0．902，多态信息含量(PIC)为0．893，平均非父排除率(PE)为0．80l。家系调查和案例运用的结果表明，HLA-DRB1位点等位基因由亲代向子代的传递符合盂德尔遗传定律。结论HLA-DRB1为高度多态位点，其基因分型芯片可在亲子鉴定和个体识别中发挥重要作用。     

中国汉族人群不明原因猝死与NOSlAP基因多态性的相关性

目的研究日常活动中不明原因猝死（suddenunexpecteddeath,SUD）者NOSlAP基因的单核苷酸多态性。方法收集60例一般日常活动中SUD病例心血样本作为SUD组,另外随机抽取80例无关个体的外周血样本作为对照组,提取基因组DNA,用特异性引物对NOSlAP部分SNP位点（rsl0494366、rsl0918859、FSl2143842、rsl2742393、rs3751284、rs348624）进行PCR扩增和直接测序,计算等位基因频率和基因型频率．并分析各SNP位点在SUD组与对照组之间的差异性。结果NOSlAP第6外显子区域的rs3751284位点的等位基因频率和基因型频率在两组人群中的差异均有统计学意义（P〈0．05）。rs3751284位点的最小等位基因的频率在SUD组为0．325,在对照组为0．475。结论rs3751284位点可能是SUD的易感基因位点。     

短串联重复vWFⅢ扩增片段长度多态性在法医学应用的可行性研究

目的探讨STR位点vWFⅢ用于法医学鉴定中的实用价值。方法应用聚合酶链式反应（PCR），聚丙烯酰胺凝胶电泳结合染银显带的分离方法对STR位点vWFⅢ扩增片断长度多态性进行研究。结果经过优化筛选掌握了该位点的最适扩增条件，其对各类检材均获得稳定可靠的扩增产物。本方法的灵敏度达10pg基因组DNA、0．5μl全血、1μl新血痕、0．1μl精液、0．2μl新鲜精斑。结论本方法快速、灵敏、准确，在法医学个人识别和亲子鉴定中具有推广应用的价值。     

毛干蛋白单氨基酸多态性鉴定研究

本文建立了毛干蛋白单氨基酸多态性（single amino acid polymorphism,SAP）的质谱检测方法，以DNA测序验证方法的准确性，并设计多组样本检验SAP鉴定的重现性。对来自6个人的25份毛干样本的SAP鉴定结果进行分析，并与毛干来源人的血液外显子测序结果相比较，对于不一致位点进一步使用Sanger法测序确定SAP对应的SNP分型。共设计四组重复性实验测试，对不同直径/生长部位毛干的分型结果进行了一致性验证。通过设计的376对引物进行PCR扩增，成功检测了522个SNP分型，其中32个（6.1%）与前期外显子测序分型不一致，152个（29.1%）为外显子测序中未检测的分型，338个（64.8%）与外显子分型结果一致。四组重复性实验中，组内SAP鉴定准确率平均值为93.6%(95%CI:92.8%～94.5%)，鉴定重现率平均值为96.0%(95%CI:94.3%～97.6%)。在所有25份样本中，有283个SAP位点在至少两个样本中检出，其中23个位点在全部样本中都被检出。因此，毛干蛋白SAP鉴定方法具有较高的准确性和重现性，得到的23个高检出率SAP位点可作为候选...     

宁夏回族3个STR基因座的多态性分析

本文作者调查了D16S539,D7S820,D13S317三个基因座在宁夏回族人群中的基因频率分布情况,现报道如下。1　材料与方法1.1　实验材料无关回族个体血样标本从宁夏医学院附属医院采集,血纱布阴干保存。1.2　实验方法1.2.1　DNA模板的制备　按chelex-100法提取血痕DNA。1.2.2　复合扩增　扩增引物及缓冲液均采用Geneprint试剂盒(PromegaCorporation),加入5μl模板DNA上清液及0.75μTaq酶(PE公司),总体积25μl于PCR仪(PE480)中,96℃变性2min,然后94℃变性1min,60℃退火1min,70℃延伸1.5min,循环10次;再于90℃变性1min,60℃退火1min,70℃…     

D8S1179位点扩增不平衡

短串联重复（shorttandemrepeat，STR）是目前法医学上个体识别中应用最广泛的遗传标记。STR的分型多数采用扩增片段长度多态性（amplifiedfragmentlengthpolymorphism，Amp－FLP）分型技术。由于各种原因，不同的STR等位基因的PCR扩增效率并不总是相等，使杂合子个体的两个等位基因间可能出现扩增不平衡的现象。本文报道４例D８S１１７９位点扩增不平衡的现象。１材料与方法１．１标本来源４个血样本的DNA用酚／氯法提取。１．２D８S１１７９位点的分型１．２．１聚丙烯酰胺凝胶银染法检测引物按照STRBase（http：／／www．cstl…     

Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA，应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量，同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为：37份滤纸、纱布血痕0．042～5．28ng／μl，16份口腔拭子1．15—4．21ng／μl，18份烟头0．016～1．46ng／μl，10份肋软骨0．531—14．40ng／μl，8份肌肉5．75—24．80ng／μl，7份指甲0．788—11．50ng／μl，17份精斑0．79～99．50ng／μl。在建立的8μl扩增体系中，根据上述结果，调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0．5—3ng之间，大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0．5—3ng之间可得到有效STR扩增，浓度为0．5ng／μl以上的DNA样品，用小体积模板（1μl）比大体积（3μl）模板扩增效果好。     

浙江汉族人群15个STR基因座遗传多态性

本文应用PowerPlex 16荧光标记复合扩增系统,对浙江汉族510名无关个体15个STR基因座进行遗传学调查,现报道如下:1材料与方法1.1样本510名浙江汉族无关个体的血样来自浙江全省各地,系本实验室日常检案积累。1.2实验方法所有血样均采用硅珠法提取DNA[1]。参照文献[2]采用10μl扩增反应体系,其中包括:Gold STR 10×Buffer 1μl,Taq Gold DNA聚合酶0.3μl,10×Primer PairM ix 1μl,模板DNA 1μl(DNA量控制在0.5~1ng),用无菌去离子水补足体系,混匀,稍加离心后置AB I 9700型扩增仪中进行扩增。热循环参数为:95℃11m in,96℃1m in,然…     

中国汉族人群不明原因猝死与NOS1AP基因多态性的相关性

目的研究日常活动中不明原因猝死(sudden unexpected death,SUD)者NOS1AP基因的单核苷酸多态性。方法收集60例一般日常活动中SUD病例心血样本作为SUD组,另外随机抽取80例无关个体的外周血样本作为对照组,提取基因组DNA,用特异性引物对NOS1AP部分SNP位点(rs10494366、rs10918859、rs12143842、rs12742393、rs3751284、rs348624)进行PCR扩增和直接测序,计算等位基因频率和基因型频率,并分析各SNP位点在SUD组与对照组之间的差异性。结果 NOS1AP第6外显子区域的rs3751284位点的等位基因频率和基因型频率在两组人群中的差异均有统计学意义(P0.05)。rs3751284位点的最小等位基因的频率在SUD组为0.325,在对照组为0.475。结论 rs3751284位点可能是SUD的易感基因位点。     

HLA-DQα和PM位点扩增分型技术在法医物证学上的应用

目的：对HLA－DQα和PM位点进行多态性研究并应用于实际检案。方法：用PCR结合反相杂交技术进行扩增并分型。结果：获得HLA－DQα和PM位点的基因频率分布数据。结论：上述位点具有高度多态性，累积个体鉴别能力（DP值）达99．95％，是法医学亲权鉴定和个体识别领域非常有价值的遗传标记系统。     

快速PCR扩增体系的建立及法医学应用

目的建立快速PCR扩增体系,探讨其在法医实践中的应用价值。方法设置不同的缓冲液、酶浓度与Mg SO4浓度、热循环参数等,观察不同参数对扩增结果的影响,建立快速PCR扩增体系。使用该体系对常见检材进行STR分型,与常规方法扩增的结果比较,考察其分型准确性与扩增用时。结果本文建立的快速PCR扩增体系含DNA TyperTM19试剂盒的Primer Mix(5×)2μL;Ta KaRa试剂的Fast BufferⅡ(10×)1μL,Speed STARTMHS DNA Polymerase(5U/μL)0.3μL,Mg SO4(50mmol/L)为0.1μL。扩增程序为95℃120s;95℃2s、61℃15s,27个循环;72℃60s。结论快速PCR扩增体系分型结果准确,用时仅19min,缩短了常规扩增用时,有较大的法医学应用价值。     

ARMS-PCR技术检测法医学体液样本DNA甲基化方案

目的 案件现场遗留的体液等生物检材对案件性质的判定以及犯罪现场的重建具有重要意义。本研究旨在确定ARMS-PCR技术能否用于DNA甲基化位点的检测，评估候选的DNA甲基化标记物是否具有体液特异性，以便于解决目前体液鉴定复杂、成本高、混合样本识别困难等问题。方法 利用ARMS技术设计DNA甲基化特异性引物，构建复合扩增体系，通过毛细管电泳进行分型检测。结果 本研究利用ARMS技术以及毛细管电泳构建了包含22个甲基化位点的复合扩增体系，进一步检测并识别出了100例单一体液样本。结论 该方法可实现甲基化位点的检测，是一种快速、低成本的检测方式，候选位点具有体液特异性。     

18例案件物证Amp—FLP检测分析

80年代中期建立的聚合酶链反应(PCR)技术,以基因组DNA为模板在DNA聚合酶催化作用下,由一对寡核苷酸引物引导,在体外扩增靶DNA片段。经过约30个循环反应,靶DNA片段可扩增100万个拷贝。PCR技术使法医物证检验的灵敏度大为提高,达到纳克级DNA的超微量水平。近10年来,PCR技术在法医界迅速得以推广与使用,被称为第二代DNA分型技术。人类基因组内可变数目串联重复序列(VNTR)位点具有极高多态性,VNTR位点和片段长度等位基因多达数十,甚至数百。运用PCR技术扩增VNTR位点并经片段长度多态     

SNP-STR遗传标记复合扩增体系的构建及法医学应用

目的筛选并构建与目前STR数据库兼容的SNP-STR遗传标记复合扩增体系,调查其在四川汉族群体中的遗传多态性,并探讨其在混合DNA样本分析中的应用价值。方法以现有商业试剂盒中使用的STR遗传标记为基础,筛选与STR遗传标记相邻的SNP位点并组成SNP-STR遗传标记。运用SNP等位基因设计特异性引物,构建基于等位基因特异性扩增的SNP-STR遗传标记复合扩增体系。调查该体系在四川汉族群体的遗传多态性,并评价不同位点数目的体系对两个体混合DNA样本的检测效能。结果筛选并构建了由13个SNP-STR遗传标记构成的等位基因特异性复合扩增体系。在四川汉族群体中,各位点杂合度为0.76～0.88,累积个体识别率达0.999 999 999 999 999 968。在对两个体混合DNA的分析中:单位点扩增时,混合样本的混合比例达到1 000∶1时依然可以检测到少量成分所特有的分型;多位点复合扩增时,混合比例最大可达500∶1;随着体系中位点数量的增加,对混合DNA中少量成分的检测效能降低。结论SNP-STR遗传标记较STR具有更高的多态性,其构成的复合扩增体系对混合样本的分析效能优于传统的STR复合扩增体系。     

P33.6位点扩增片段长度多态性的法医学应用

P33．6位点扩增片段长度多态性（Amp－FLP）在中国人群中有很高的识别能力，本实验室继对中国人P33．6位点Amp，FLP[1]报道之后，又对血液、血斑、精液、精斑、混合斑、毛发、唾液等生物检材进行P33．6位点的分析，获得了令人满意的结果。将该方法用于案件的检验，在破案中发挥了重要作用。材料与方法一、实验材料1．收集自愿者提供的精液、精斑和精液与阴道分泌物的混合斑各20份，并同时收集供者血液。所有样品均-4℃保存。2．收集自愿者提供的毛发（20根）、唾液（1份）和血斑（10份），室温保存。二、实验方法1．检材样品的处理（1…     

中国人pMCT118位点扩增产物HinfⅠ限制性片段长度多态性

pMCT118（又称DIS80）是一个高度多态性的VNTR位点（重复单位16bp，核心序列为GNNGTGGG），位于1号染色体上。用PCR方法分析其多态性，国内外已有报道ti，2］K。s。i等人（‘］通过对pMCTlls位点碱基序列进行分析，发现该位点扩增物正链5’端第61个碱基由C转换成T，引入了Hinfl的酶切位点，使其产生了两种多态性Hinfl十和Hinfl－。本文对中国人pMCTlls位点扩增产物Hinfl限制性片段长度多态性进行了研究，现报告如下。材料与方法1．样品48例中国人无关个体血样由本实验室日常积累，DNA提取用Chelex快速提取法［’］。2．pMC…     

Y染色体DNA分型异常2例

1案例资料1．1简要案情2012年8月，无锡市公安局在对前科人员建库过程中，发现2例样本的采集信息（均显示男性）与检测所得到的结果（均显示女性）不相符合，需进行复核。1．2DNA复合扩增常染色体检验采悄AGCU17＋l试剂盒、AmpFLSTRIdentifiler试剂盒，操作步骤按试剂盒说明书进行。