大鼠死后腓肠肌内糖原含量变化与死亡时间的关系

目的研究大鼠死亡后腓肠肌内糖原含量变化与死亡时间之间的关系。方法采用断颈、机械性窒息、失血性休克三种方法分别处死大鼠,于死亡后0﹑0.5﹑1﹑1.5﹑2﹑3﹑4﹑8﹑12﹑18和24h时间点取腓肠肌,利用PAS染色方法并结合计算机图像分析技术分析糖原含量变化。结果大鼠腓肠肌内糖原含量和阳性面积随死亡后时间的延长而呈线性减少。结论腓肠肌内糖原含量和阳性面积可作为死亡时间推断的参考指标。     

大鼠死后肌肉组织电阻抗幅值和相位角变化推断死后间隔时间的研究

目的研究大鼠死后皮下肌肉组织电阻抗幅值和相位角的变化规律，探讨生物电阻抗技术推断中晚期PMI的价值。方法利用四电极阻抗测量系统测量20只大鼠死后4种不同环境温度皮下肌肉组织电阻抗幅值和相位角，并用Excel及MATLAB对所得的离散阻抗数据进行处理。结果（1）所有死亡大鼠皮下肌肉组织的电阻抗幅值都呈现出相似的先升后降的变化趋势，且中、长期的下降部分有一定的线性变化趋势。电阻抗下降段斜率与温度的变化呈正相关关系，且在不同环境温度时，下降段斜率与PMI的相关性都较高，均大于0．97。因此，有可能利用这一线性关系推断中、晚期PMI。（2）所有死亡大鼠皮下肌肉组织的电阻抗相位角没有相似的变化规律，其变化杂乱无章。结论如果找出电阻抗幅值下降段起点、峰值、斜率这3者之间的确定关系，就可利用下降段的线性关系为推断中晚期PMI提供一定的判断依据。     

分子生物学指标用于推断机械性窒息死亡的研究进展

体表损伤轻微或无损伤的机械性窒息死亡是法医学鉴定的难点之一。由于缺少病理形态学特异性变化特征,较难与部分存在缺氧过程的其他致死原因相鉴别。近年来,将具有相关性、特异性分子生物学指标用于推断机械性窒息死亡,已成为研究热点。本文就上述专题中法医学最新研究文献进行复习综述,以期为机械性窒息死亡的研究提供新思路。     

mRNA和microRNA在机械性窒息死推断中的研究进展

机械性窒息死的推断是法医学鉴定的难点之一。利用实时荧光定量PCR（fluorogenic quantitative RT-PCR,RT-qPCR）技术检测RNA表达水平变化规律,并据之推测机械性窒息死亡的原因,近年来已成为研究热点。本文对mRNA和microRNA（miRNA或miR）在机械性窒息死推断的研究文献进行复习综述,并重点探讨miRNA在该类死因推断中的应用,以期为机械性窒息死推断提供新的思路。     

大鼠死后脑、心肌和肾组织β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系

目的研究SD大鼠脑、心肌和肾组织细胞内β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断寻找新的指标。方法大鼠处死后置于20℃的环境中,分别于死后不同时间点提取脑、心肌、肾的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测总RNA中β-actin mRNA的水平(Ct值),分析死后经过时间与Ct值的线性关系,并建立推断早期死亡时间的线性回归方程。结果随死亡时间的延长,3种组织内β-actin mRNA的水平均发生了显著的下降,心肌和肾组织中β-actin mRNA死后24h内的降解速率更显著,而脑组织中β-actin mRNA的降解速率变化不明显。各组织的Ct值变化与死亡时间之间存在一定的线性关系。结论大鼠死亡早期脑、心肌和肾组织内β-actin mRNA降解明显,可以通过其降解规律来推断早期死亡时间。     

大鼠骨骼肌新鲜度指标与早期死亡时间关系

目的计算不同时间大鼠骨骼肌新鲜度指标(K值、K₁值、K₀值、H值、P值、G值和IMP比例)变化规律,研究其与早期PMI的关系,筛选出最优评价指标,用于早期PMI推断。方法SD大鼠处死后,保存在20℃恒温条件下,于死后即刻(0h)、4h、8h、16h、24h、32h和48h提取大鼠双后腿骨骼肌,利用高效液相色谱仪测定ATP相关代谢产物(ATP,ADP,AMP,IMP,Ino,Hx),计算其肌肉组织的K值、K1值、K0值、H值、P值、G值和IMP比例,并建立与PMI关系的相关回归方程。结果随PMI推移,IMP比例呈现下降趋势,K值、K₁值、K₀值、P值、G值和H值逐渐增加。7种新鲜度指标均可用于早期PMI推断(R²=0.922-0.971,P<0.01),其中H值与PMI相关系数最高、曲线拟合关系最好(R²=0.971)。结论测定尸体肌肉组织新鲜度指标有望成为法医实践中PMI推断的有效方法,其H值为最优早期PMI推断指标。     

不同死因大鼠死后不同时间红细胞溶血速度比较

目的观察不同死亡原因大鼠尸体血液中红细胞溶血速度的变化规律,为死亡原因的法医学推断提供新思路。方法 40只SD大鼠随机分为4组,分别以断髓、置于99%CO的空间、高坠、勒颈方式处死后,取各组大鼠右心室血液,于死后即刻（0h）、8h、16h、24h、32h、40h、48h、56h、64h、72h,采用显微镜数码图像法进行全血红细胞计数（CBC）,并对组内和组间数据进行统计学比较分析。结果 4组血液红细胞数量在死后即刻至72h期间,均随时间的延长因溶血而减少。其中0~16h,各组溶血速度无明显差异（P〉0.05）;16~48h,速度加快,溶血速度以CO中毒组（88.50±25.99）%最快,其次为高坠（69.33±29.52）%和断髓组（48.78±3.17）%,机械性窒息组（41.90±9.61）%最慢,组间比较具有显著性差异（P〈0.05）;56h后,溶血速度再次减慢,至72h机械性窒息组仍有少量红细胞存在。结论 4组不同死因大鼠死后不同时间红细胞计数均减少,各组间差异具有统计学意义,其变化特征可为死亡原因的推断提供新的思路。     

大鼠多器官能量物质变化与死亡时间的联系

目的检测大鼠死后不同器官能量物质的改变情况,探讨死后能量物质的变化规律。方法用高效液相色谱检测死亡发生24h内不同时间点大鼠腓肠肌、心肌、肝脏组织中ATP、ADP和AMP的含量。结果发现腓肠肌中ATP随死亡时间的延长迅速下降,到死后8h基本检测不到或微量检测出;心肌、肝脏中组织中ATP含量受死亡方式影响大。ADP在整个检测时间点均能检测到,AMP的含量变化无规律。结论通过高效液相对磷酸腺苷的检测,显示24h内大鼠腓肠肌、心肌和肝脏组织中的ATP含量变化与死亡时间的联系,可为法医学死亡时间推断提供一种新的、客观的参考依据。     

大鼠多器官能量物质变化与死亡时间的联系

目的检测大鼠死后不同器官能量物质的改变情况,探讨死后能量物质的变化规律.方法用高效液相色谱检测死亡发生24h内不同时间点大鼠腓肠肌、心肌、肝脏组织中ATP、ADP和AMP的含量.结果发现腓肠肌中ATP随死亡时间的延长迅速下降,到死后8h基本检测不到或微量检测出;心肌、肝脏中组织中ATP含量受死亡方式影响大.ADP在整个检测时间点均能检测到,AMP的含量变化无规律.结论通过高效液相对磷酸腺苷的检测,显示24h内大鼠腓肠肌、心肌和肝脏组织中的ATP含量变化与死亡时间的联系,可为法医学死亡时间推断提供一种新的、客观的参考依据.     

大鼠多器官能量物质变化与死亡时间的联系

目的检测大鼠死后不同器官能量物质的改变情况,探讨死后能量物质的变化规律.方法用高效液相色谱检测死亡发生24h内不同时间点大鼠腓肠肌、心肌、肝脏组织中ATP、ADP和AMP的含量.结果发现腓肠肌中ATP随死亡时间的延长迅速下降,到死后8h基本检测不到或微量检测出;心肌、肝脏中组织中ATP含量受死亡方式影响大.ADP在整个检测时间点均能检测到,AMP的含量变化无规律.结论通过高效液相对磷酸腺苷的检测,显示24h内大鼠腓肠肌、心肌和肝脏组织中的ATP含量变化与死亡时间的联系,可为法医学死亡时间推断提供一种新的、客观的参考依据.     

Compound muscle action potential analysis in different death models: significance for the estimation of early postmortem interval

In this experimental study, we investigated the varieties of excitability of gastrocnemius muscle via sciatic nerve as per different death models (asphyxia, abundant-bleeding and gradual-bleeding) on rats and the significance for the estimation of postmortem interval was evaluated. For this purpose, the rats were applied different stimulus intensities (5, 20, 40 mA) with 0.1 ms duration, before, during and every 5 min after death, using rectangular impulses, and the mean amplitude, onset latency and area values for each compound muscle action potential (CMAP) were elicited. It was detected that amplitude and area increased and onset latencies prolonged in the first postmortem 15 min. From the 15 min, CMAP area and amplitude showed an ever-increasing decrease and the prolongation of onset latencies became apparent. The decrease rate of area and amplitude was found to be statistically significantly different in asphyxia and abundant-bleeding models compared with in gradual-bleeding model, at 30 min measurements. However, there was not any significant difference in onset latency increase rates of three groups. Separately, any significant correlation between the agony and excitability periods among the groups could not be detected. The fact that the increase rate of onset latency did not show a significant difference as per death models indicated that onset latency ratios would be more appropriate criteria in determination of postmortem interval, regardless the reason of death.     

蛋白质降解与死亡时间推断的初步研究

目的观察大鼠肝脏肌动蛋白、微管蛋白在死后不同时间的降解情况,为死亡时间的推断寻找客观依据。方法大鼠麻醉致死后置于21℃温度控制系统模拟死后18d的改变,在不同时间点剪取肝脏组织抽提蛋白质,利用westernblot技术检测肌动蛋白、微管蛋白的降解变化并对产物进行半定量分析。结果大鼠肝脏肌动蛋白在死后8d尚可检测,死亡10d后检测不到;在死后2d,α微管蛋白已检测不到,但可检测到β微管蛋白,死亡4d后,β微管蛋白也检测不到。结论肌动蛋白、微管蛋白的死后降解存在差异,其在肝脏组织保存时间的不同可作为死亡时间推断的参数。     

不同死亡方式大鼠心肌组织中ATP、ADP和AMP含量比较

目的比较不同死亡方式对大鼠心肌组织能量物质变化的影响,为判断不同死亡方式及死亡时间提供依据。方法180只大鼠随机分为三组,以不同方式(失血、窒息、断颈)处死,高效液相色谱法检测死后0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、18和24h大鼠心肌组织中的ATP、ADP、AMP含量。结果三组不同死亡方式大鼠心肌组织的ATP、ADP、AMP的含量在大部分时间点做组间比较有明显差异(P<0.05);每组不同死亡方式的大鼠心肌组织中ATP、AMP的含量随时间的变化有明显的差异(P<0.01),而各组中的ADP在死亡一定时间后无明显差异。结论不同死亡方式的大鼠心肌组织中能量物质死后变化可以用作对死亡方式及某种方式不同死亡时间做出判断的依据。     

利用尸体软组织生物力学性状时序性变化推断死亡时间

目的探讨尸体软组织生物力学性状时序性变化规律及其推断死亡时间的可行性。方法将实验大鼠用颈椎脱臼法处死,放置25℃恒温培养箱内即刻、6、12、18、24、30、36、42、48、60、72、96、120、144、168、192h,定时、定位、定向、定形切取大鼠胸部正中皮肤、腹壁肌肉、胸主动脉、结肠和小肠的生物力学试件,用电子万能材料试验机检测各试件的极限载荷、应变、应力生物力学参数。结果除主动脉外,尸体皮肤、肌肉、小肠、结肠的各项软组织生物力学参数均呈明显的死后时序性下降趋势。各参数下降趋势具有显著性差异的＂窗口期＂分别为：极限载荷：死后18h内皮肤、小肠呈下降趋势;24h内肌肉、结肠呈下降趋势;96～168h肌肉呈下降趋势;72～192h结肠呈下降趋势。应变：各组织在24h内均呈下降趋势,其结肠72～192h缓慢下降趋势。应力：皮肤18h内呈下降趋势,肌肉、小肠24h内呈下降趋势,结肠36h内呈下降趋势。结论大鼠尸体软组织各生物力学性状在不同的＂窗口期＂存在时序性变化规律,综合各指标可用于推断相应＂窗口期＂内的死亡时间。     

大鼠骨骼肌钝挫伤分级模型的建立

目的建立一个控制性、重复性好,并可分级的骨骼肌挫伤动物模型。方法采用自行设计的机械式撞击装置,以撞击速度（velocity,v）和形变（deformation,DF）作为外力参数,并保持较恒定的撞击时间,使击锤打击瞬间速度不同,造成轻、中、重不同程度的大鼠腓肠肌挫伤。结果在肉眼、HE染色观察下．39只大鼠腓肠肌出现可分级的病理学改变。在低撞击水平（v：2m／s,DF：5．5mm）,轻度挫伤组病理改变局限于大鼠腓肠肌肌外膜和腓肠肌表层部位;在中度撞击水平（v：2．5m／s,DF：6．5mm）,中度挫伤组病理改变可见于大鼠腓肠肌肌外膜和大部分腓肠肌;在高撞击水平（v：3m／s,DF：7,5mm）,重度挫伤组病理改变除中度挫伤组累及部位外,还伤及比目鱼肌。结论该模型制作出常见的钝力性骨骼肌挫伤,以撞击速度和形变作为外力参数,成功建立了机械骨骼肌挫伤分级模型,致伤程度较一致,是骨骼肌挫伤研究较合适的动物模型,为深入研究钝力性骨骼肌挫伤奠定了基础．     

Determination of Adenosine Phosphates in Rat Gastrocnemius at Various Postmortem Intervals Using High Performance Liquid Chromatography

Abstract: Although the change in adenosine phosphate levels in muscles may contribute to the development of rigor mortis, the relationship between their levels and the onset and development of rigor mortis has not been well elucidated. In the current study, levels of the adenosine phosphates including adenosine triphosphate (ATP), adenosine diphosphate (ADP), and adenosine monophosphate (AMP) in gastrocnemius at various postmortem intervals of 180 rats from different death modes were detected by high performance liquid chromatography. The results showed that the levels of ATP and ADP significantly decreased along with the postmortem period of rats from different death mode whereas the AMP level remained the same. In addition, it was found that changes in the ATP levels in muscles after death correlated well with the development of rigor mortis. Therefore, the ATP level could serve as a reference parameter for the deduction of rigor mortis in forensic science.     

不同环境条件下大鼠死后皮肤大体和组织学改变

目的研究观察大鼠在不同环境条件下死后不同时间其皮肤大体、组织学的改变,为推测较长的死后间隔时间建立实验动物依据。方法观察雌性SD大鼠在不同环境条件下的死后变化,并间隔一定死后时间取皮、染色和镜下观察。结果死后发生骨、软组织分离,A组约需35d,B组需13d。皮肤有形细胞成分和附属器完全分解破坏,A组约20d,B组7d。胶原纤维在A组死后40d（B组12d）仍有部分保留完整。结论环境温度差异是造成A、B两组发生死后改变时程不同的主要因素,利用皮肤大体、组织学改变可望较系统和准确的推测晚期死亡时间。     

大鼠肾细胞DNA含量与死亡时间关系的图像分析

运用计算机图像分析技术,对大鼠死后肾细胞DNA的变化进行观测,以寻找一种客观、量化的推断早期死亡时间的标准.实验选择15只大鼠,处死后,在24小时内每隔1小时取肾组织进行细胞学涂片,福尔马林液固定,Feulgen染色,自动图象分析仪测量,所得数据进行统计学分析处理.实验结果证明大鼠的早期死亡时间与肾细胞核DNA降解速率呈线性关系,其中积分光密度、平均灰度、异形指数提示此方法有可能作为辅助手段,使死亡时间推断更为精确.     

Analysis of gastrocnemius compound muscle action potential in rat after death: significance for the estimation of early postmortem interval

The estimation of postmortem interval is of great importance in forensic medicine. Changes in the properties of excitable tissue provide another possible means by which the time of death can be estimated. This paper reports the monitorization of the compound action potentials recorded from gastrocnemius muscle by means of sciatic nerve stimulation in rats before and after death. The sciatic nerve was stimulated using rectangular impulses of 0.1ms duration and intensities ranged between 1 and 100mA while the rat was alive. Subsequently, the rat was killed by cervical dislocation. The similar measurement procedure was performed at the moment of death and every 5min after sequentially. There was a progressive decline in amplitude values that began 10min after death. The decrease in the amplitude of the compound muscle action potentials (CMAP) was most prominent especially when elicited with lower stimulus intensities. The mean area of the CMAPs also began to decrease beginning from 15min after death. Fifteen minutes after death, the motor latencies began to prolong. Thirty-five minutes after death, the decline in amplitude and area of mean CMAP was most prominent as the mean motor latency. At the 40th minute, most of the CMAPs were unelicitable. During the early postmortem interval, these amplitude, area and motor latency alterations decrease in the amplitude and area, prolongation of motor latency seems to be well correlated with each other and this was statistically significant. These findings are discussed as possible basis of a forensic method for postmortem interval estimation.