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DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用 总被引:6,自引:4,他引:2
目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。 相似文献
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目的比较有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法对陈旧骨骼和牙齿DNA的纯化效果。方法选择10份陈旧骨骼和12份牙齿样本,进行消化后分别采用有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法进行提取纯化,进行DNA定量后用SinofilerTM试剂盒进行检测。结果 2种方法纯化的骨骼、牙齿DNA的IPC CT值无显著差异。有机法+QIAquick纯化法纯化的骨骼、牙齿DNA平均浓度分别为0.180ng/μL±0.068ng/μL和0.132ng/μL±0.027ng/μL,所有样品均获得全部基因分型。DNA IQ磁珠法纯化的DNA平均浓度分别为0.038ng/μL±0.028ng/μL和0.036ng/μL±0.007ng/μL,有5份骨骼和6份牙齿样本仅获得部分基因分型或未能分型。结论有机法+QIAquick纯化法对陈旧骨骼、牙齿DNA的纯化效果优于DNA IQ磁珠法。 相似文献
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本文对3种DNA提取方法在高度腐败检材DNA提取中的应用进行了比较,供法医学实践参考。1材料与方法1.1材料3份检材均为尸体肋软骨,其中1号为死后在水里浸泡18天解剖,酒精固定2年的检材,2号检材为死后15天解剖,酒精固定1年的检材,3号检材为死后10天解剖,后酒精固定1月的检材。1.2 DNA提取Chelex-100法[1]3份检材各500mg剪粹,分别加入200μl 5%Chelex-100,10μl PK(10mg/m l),10μlDTT(39mmol/m l二硫苏糖醇),37℃水浴过夜,100℃加热10m in,剧烈震荡,10 000 r/m in离心10m in,上清备用。有机法[2]3份检材各500mg剪粹,分别加入400μl TES… 相似文献
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运用PCR-RFLP检验方法,对21份精斑样品、5份混合斑检材进行了检验,结果表明该方法能够很好地检测混合斑中精斑的ABO血型及基因型,有效地解决了非分泌型精斑的ABO血型及基因型,拓宽了混合斑中精斑的检验范围. 相似文献
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目的 研究GoldeneyeTM 20A-M试剂盒在DNA数据库建设中的应用.方法 针对血滤纸特性,优化不同条件血痕样品的取样量、扩增循环次数,缩短PCR扩增时间,以建立适合批量样品直接快速扩增检验的方法,并将其应用于1 200份数据库样品的检验中.结果 确定了批量样本检验的最适取样量和扩增循环次数,建立了快速扩增反应程序,1 200份样品的直接快速扩增检验成功率为98.4%,批量检验92份样品(1板)从取样到电泳完成只需6h.结论 GoldeneyeTM 20A-M试剂盒的应用,免去DNA提取过程,方法简单、快速、获得信息量大,适用于DNA数据库建设的需要. 相似文献
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用Chelex100法及有机溶剂提取法联合提取DNA扩增STR基因座的比较研究 总被引:13,自引:4,他引:9
为了比较不同方法提取DNA扩增STR基因座的成功率 ,本文用Chelex10 0法及Chelex10 0法联合有机溶剂提取法分别提取性犯罪案件 6份血斑及 6份混合斑中精子DNA ,并用PE公司ProfilerPlus系统复合扩增 ,ABI 310型基因分型仪检测。结果表明 ,常规采用Chelex10 0法提取血斑及精斑等生物检材DNA作STR基因座检验失败或所检测的位点较少时 ,应对Chelex10 0法提取的DNA上清液再用有机溶剂提取法提取 ,可极大提高DNA检验成功率。采用本文建立的Chelex10 0法联合有机溶剂提取法 ,提高了PCR扩增阳性率 ,对实际检案很有帮助 ;在PCR扩增前应常规进行DNA定量检验 ,否则对于重要检材应进行梯度扩增。 相似文献
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目的采用Identifiler Direct PCR试剂盒直接扩增法进行棉签擦拭血痕、肋软骨和烟蒂唾液斑DNA分型检验,并评价其应用价值。方法收集棉签擦拭血痕、烟蒂各20份,肋软骨10份,采用Identifiler Direct PCR试剂盒进行直接扩增及分型检验,以相同检材采用磁珠法/Chelex-100法提取模板DNA后扩增检验结果作为对照,对两组所得结果进行比较分析。结果棉签擦拭血痕和肋软骨一次检测完整分型率均为100%,分型结果与对照组一致;烟蒂上唾液斑有2份检材第一次未能完整分型,调整方法再次检验后获分型成功。结论实际检案中的棉签血痕、肋软骨和烟上唾液斑,采用直接扩增法检测,方法简单、快速、稳定、检材用量小,可在实际检案中选择使用。 相似文献
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Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究 总被引:3,自引:1,他引:2
目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA,应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为:37份滤纸、纱布血痕0.042~5.28ng/μl,16份口腔拭子1.15—4.21ng/μl,18份烟头0.016~1.46ng/μl,10份肋软骨0.531—14.40ng/μl,8份肌肉5.75—24.80ng/μl,7份指甲0.788—11.50ng/μl,17份精斑0.79~99.50ng/μl。在建立的8μl扩增体系中,根据上述结果,调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0.5—3ng之间,大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0.5—3ng之间可得到有效STR扩增,浓度为0.5ng/μl以上的DNA样品,用小体积模板(1μl)比大体积(3μl)模板扩增效果好。 相似文献
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目的改进滤纸血痕DNA提取方法,建立更简便、廉价,适合当前DNA建库需要的提取方法。方法将752份滤纸血痕分成四组,分别按照四种不同的Chelex-100法进行DNA提取并进行比较研究;63份新鲜血痕分别按照两种方法提取并进行对比研究。结果对于陈旧滤纸血痕,四种提取方法的检测成功率无显著差异(P>0.05);对于新鲜血痕,两种提取方法的检测成功率有显著差异(P<0.05)。结论对于建库陈旧滤纸血痕样本的DNA提取可采用不加纯水处理,直接加入Chelex-100的方法进行。 相似文献
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近日,《中华人民共和国旅游法(草案)》已上报全国人大财经委,相关人士预计将于2012年底问世.文章以《中华人民共和国旅游法(草案)2011年11月10日稿为蓝本,在对该草案进行简要分析的基础上,提出笔者的浅薄之见,以求为《中华人民共和国旅游法》的正式出台贡献出法律人的一份微薄之力. 相似文献
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应用DNA工作站进行批量血斑STR分型的研究 总被引:4,自引:4,他引:4
目的建立对大批量血斑样品PCR-STR基因分型检测的自动化新方法。方法应用自动化DNA工作站改良优化Chelex-100法和DNAIQ磁珠法的实验条件,建立两种批量血斑的自动化DNA提取方法;筛选确定PCR-STR反应体系的构建和PCR-STR产物测序电泳分析前处理程序。结果1104份血斑样品经Chelex-100法批量提取、Profiler Plus试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座,定量PCR测定模板浓度均值为0.43ng/ml,荧光检测信号在200~800RFU之间;对其中114份血斑样品用DNAIQ磁珠法批量提取、同试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座,定量PCR测定模板浓度均值为0.7ng/ml,荧光检测信号在1000~2000RFU之间;对其中50份血斑进行自动和手动Chel-ex-100检验法比较,成功率分别为100%和98%,且前者等位基因峰高信号更均衡。结论本文建立的自动化DNA工作站批量检测方法,在成功率、稳定性、均一性等方面具有优势。 相似文献
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Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子(头套)中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。 相似文献