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《法医学杂志》2020,(3)
目的筛选并构建与目前STR数据库兼容的SNP-STR遗传标记复合扩增体系,调查其在四川汉族群体中的遗传多态性,并探讨其在混合DNA样本分析中的应用价值。方法以现有商业试剂盒中使用的STR遗传标记为基础,筛选与STR遗传标记相邻的SNP位点并组成SNP-STR遗传标记。运用SNP等位基因设计特异性引物,构建基于等位基因特异性扩增的SNP-STR遗传标记复合扩增体系。调查该体系在四川汉族群体的遗传多态性,并评价不同位点数目的体系对两个体混合DNA样本的检测效能。结果筛选并构建了由13个SNP-STR遗传标记构成的等位基因特异性复合扩增体系。在四川汉族群体中,各位点杂合度为0.76~0.88,累积个体识别率达0.999 999 999 999 999 968。在对两个体混合DNA的分析中:单位点扩增时,混合样本的混合比例达到1 000∶1时依然可以检测到少量成分所特有的分型;多位点复合扩增时,混合比例最大可达500∶1;随着体系中位点数量的增加,对混合DNA中少量成分的检测效能降低。结论SNP-STR遗传标记较STR具有更高的多态性,其构成的复合扩增体系对混合样本的分析效能优于传统的STR复合扩增体系。 相似文献
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目的建立17个STR基因座多重PCR快速扩增体系。方法采用人血样本提取DNA并定量,用于多重快速扩增体系分型准确性检测;采用标准品9948,设定稀释度,检测体系灵敏度;采用定量男女DNA样本按11种比例混合,检测体系对混合样本的分型能力;在标准品中加入干扰物质血红素和腐植酸,检测体系的抗干扰能力;对5种非人样本进行检测,评价体系的特异性;对实际案例进行检验,评价体系实际应用价值。结果采用本文体系,在65min内,用0.5~2ng DNA模板量能获得较好的扩增效果,分型结果准确稳定,扩增均衡;种属特异性好;血红素≤50μmol/L,腐植酸≤25ng/μL时可不受干扰准确分型;男女混合样本中单一样本量不低于1/10即可进准确进行判断;对实际案例常见生物检材的检验结果良好。结论本文17个STR基因座快速多重扩增体系可显著缩短扩增时间,技术性能符合实际检案要求,可在实践中选用。 相似文献
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目的应用线粒体DNA 16S rRNA基因PCR测序方法进行动物组织种属鉴定。方法未知动物内脏样本8份,已知马鹿、北山羊、绵羊和鹅喉羚肌肉样本各1份作为对照。采用用常规酚-氯仿法提取模板DNA,分别用哺乳动物通用引物和4种已知对照特异性引物扩增16S rRNA基因片段,产物用2.0%琼脂糖电泳检测,并进行序列测定及与基因库已有的序列同源性比对。结果 8份未知样本经哺乳动物16S rRNA通用引物扩增,均检测出阳性条带;用鹅喉羚特异性引物扩增,均检测出阳性特异性条带;用其他3种特异性引物扩增,均未检出阳性条带;未知样本扩增的基因片段经测序及同源性比对,与鹅喉羚的同源性为96%~100%。结论本文未知动物样本均为鹅喉羚内脏组织。本文方法可在动物检材种属鉴定中选用。 相似文献
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目的 建立复合扩增A10、C4基因座的体系 ,研究其在法医学检验中的应用价值。方法 生物学样本用Chelex - 10 0的方法提取DNA ,荧光标记的特异性引物复合扩增A10、C4基因座 ,用ABI 310 0遗传分析仪对扩增产物进行检测分型。结果 A10、C4基因座各检出 6个等位基因 ,GD值分别为 0 .6 86 ,0 .84 6 .共检出 2 3种单倍型 ,其单倍型的个体识别率为 0 .9184。扩增女性DNA ,均无特异性扩增产物 ;调查 30个二代家系 ,均未观察到突变基因的存在。结论 A10、C4复合扩增体系多态性较高 ,对法医学中男女混合检材的个人识别及父系亲缘关系鉴定有较高的应用价值。 相似文献
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目的建立扩增片段<135bp,包括D5S818,D8S1179,D16S539 3个miniSTR基因座复合扩增系统。方法采用不同荧光染料标记引物,通过PCR扩增,利用ABI 3100遗传分析仪进行片段长度分析,对100份无关个体血样,10个家系样本以及30份高度降解检材进行检测。结果本系统DNA分型结果与AmpFLSTR Identifiler试剂盒完全一致,且灵敏度高于AmpFLSTR Identifiler试剂盒。结论本系统可以应用于个人识别和亲权鉴定,为降解DNA样本分型提供了新的方法。 相似文献
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目的 建立一种用于种属鉴定的线粒体DNA16SrRNA基因和细胞色素b基因荧光标记复合扩增检测体系。方法 利用引物设计软件Primer 5.0对mtDNA序列的16SrRNA基因和细胞色素b基因各设计一对引物,建立复合扩增体系,分别扩增人和牛、猪、狗、鸡、草鱼5种常见动物,用310遗传分析仪对产物进行分析。结果 人和5种动物DNA扩增产物均出现两个峰。Cytb通用引物的扩增产物为人与动物的共有峰,为358bp;16SrRNA基因的扩增产物为人与动物间存在位置差异的特异峰,位于231~256bp之间。结论 该复合扩增体系可以明确区分人和5种动物样本,可用于种属鉴定。 相似文献
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线粒体16SrRNA和Cytb基因复合扩增进行种属鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立一种用于种属鉴定的线粒体DNA16SrRNA基因和细胞色素b基因荧光标记复合扩增检测体系。方法利用引物设计软件Primer5.0对mtDNA序列的16SrRNA基因和细胞色素b基因各设计一对引物,建立复合扩增体系,分别扩增人和牛、猪、狗、鸡、草鱼5种常见动物,用310遗传分析仪对产物进行分析。结果人和5种动物DNA扩增产物均出现两个峰,Cytb通用引物的扩增产物为人与动物的共有峰,为358bp;16SrRNA基因的扩增产物为人与动物间存在位置差异的特异峰,位于231~256bp之间。结论该复合扩增体系可以明确区分人和5种动物样本,可用于种属鉴定。 相似文献
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目的将压力循环技术(PCT)用于指甲DNA提取,并对方法学进行评价。方法收集10份人指甲样本,剪碎约为1mm×1mm大小,采用10%漂白粉水,10%SDS,10%漂白粉水,无菌水清洗样本。10份样本各分成两组,1组用压力循环技术处理,另1组不作处理,提取DNA经复合扩增并进行STR分型检测,用于评价压力循环技术的作用。取5份指甲样本用血浸泡,5份用去离子水浸泡,之后采用上述清洗方法各清洗1-3次,收集各次清洗用的无菌水提取DNA,经STR分型检测,用于评价清洗对去除外源性DNA的效果。结果 10份经压力循环技术处理的样本中有7例比相应未经处理样本DNA提取量更高,但两组进行统计学处理,差异不具有统计学意义(P〉0.05);两组样本中提取DNA含量在0.026 ng以上的样本均得到完整的STR分型,与相应口腔拭子样本对照准确无误。血污染和非血污染样本清洗二次以上,均可避免外源性DNA的污染。结论使用压力循环技术并配合本文清洗方法,可有效提高人指甲DNA的提取效率,并避免外源性生物DNA的干扰,保证DNA分型结果的准确。 相似文献
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DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用 总被引:6,自引:4,他引:2
目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。 相似文献
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用Chelex100法及有机溶剂提取法联合提取DNA扩增STR基因座的比较研究 总被引:13,自引:4,他引:9
为了比较不同方法提取DNA扩增STR基因座的成功率 ,本文用Chelex10 0法及Chelex10 0法联合有机溶剂提取法分别提取性犯罪案件 6份血斑及 6份混合斑中精子DNA ,并用PE公司ProfilerPlus系统复合扩增 ,ABI 310型基因分型仪检测。结果表明 ,常规采用Chelex10 0法提取血斑及精斑等生物检材DNA作STR基因座检验失败或所检测的位点较少时 ,应对Chelex10 0法提取的DNA上清液再用有机溶剂提取法提取 ,可极大提高DNA检验成功率。采用本文建立的Chelex10 0法联合有机溶剂提取法 ,提高了PCR扩增阳性率 ,对实际检案很有帮助 ;在PCR扩增前应常规进行DNA定量检验 ,否则对于重要检材应进行梯度扩增。 相似文献
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目的探索陈旧性骨骼DNA的提取方法。方法收集4~15年陈旧骨骼样本,去除表面污染物,经脱钙、裂解提取各样本DNA,使用QIAquickPCR Purification试剂盒进行纯化,检测DNA纯度和浓度,应用Power PlexFusion荧光标记复合扩增系统进行扩增,AB-3500型遗传分析仪检测STR分型。结果 15例陈旧性骨骼经提取、纯化,提取的DNA模板浓度较高,在42.9~176.4ng/μL之间,A260/A280值较稳定,在1.06~1.40之间;所有样本均获得完整STR分型。结论该方法简便快速,提取效果好,能够适用于法医学实际检案。 相似文献
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口腔拭子DNA检验的实时定量研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的寻求提高口腔拭子的DNA检验效率的方法。方法对来源于不同个体或同一个体不同擦拭次数的口腔拭子用Chelex-100或磁珠法提取的DNA用实时定量PCR技术进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果在建立的Identifiler系统8μl扩增体系中,3个月内的口腔拭子用Chelex-100法提取的DNA模板1μl量较3μl量扩增效果好,磁珠法提取的DNA模板用量大小对复合扩增检测影响较小。结论用棉签擦拭颊粘膜5次制备口腔拭子,取其头部的约1/4用200μlChelex-100法提取DNA,然后用1μl模板进行复合扩增,是提高口腔拭子的DNA检验效率的简便可行的方法,但陈旧口腔拭子用磁珠法提取更能保证复合扩增分型成功。 相似文献