心通口服液治疗急性心肌梗死的代谢组学研究

目的 应用非靶向代谢组学技术，筛选得到急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）模型大鼠与心痛口服液治疗后AMI模型大鼠的差异代谢物及代谢通路，探讨心通口服液治疗AMI的作用机制。方法 通过左冠状动脉前降支结扎手术建立AMI大鼠模型，对动物进行分组给药，评价心通口服液的治疗效果，运用超高效液相色谱—四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱对实验动物血清进行代谢组学分析，利用软件分析以及数据库检索筛选差异代谢物以及代谢通路。结果 大鼠心脏组织病理切片显示，模型组大鼠心肌细胞排列紊乱，心通口服液可明显逆转AMI对心肌细胞的损伤；代谢组学结果显示，心通口服液可以使胆碱、甜菜碱、硬脂酸、棕榈酸等16个代谢物发生改变，通过代谢通路富集分析发现心通口服液的治疗作用可能与不饱和脂肪酸的生物合成，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢以及花生四烯酸代谢等代谢通路有关。结论 心通口服液能够改善AMI大鼠心脏组织的病理变化，通过调控相关代谢通路及相关代谢产物的表达，达到平衡脂质代谢与氨基酸代谢的目的，达到对AMI的治疗作用。     

艾灸干预大鼠类风湿关节炎的尿液代谢组学研究

目的 基于代谢组学技术研究类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）模型大鼠尿液中内源性代谢物的变化,初步探索艾灸干预RA的作用机制。方法 将80只大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、雷公藤多苷片（Tripterygium wilfordii polyglycoside tablet, TPT）组和艾灸组,每组20只。采用右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂的方法复制RA大鼠模型。干预15 d后，采用气相色谱-质谱联用仪技术检测尿液代谢组学，利用主成分分析和偏最小二乘法判别分析对数据进行统计分析,观察大鼠尿液中内源性代谢物的变化。结果 与正常对照组比较，模型对照组的变化体现于色氨酸、对羟基肉桂酸、对羟基苯丙酸、氨基丁酸、甲基胞嘧啶、喹啉酸和脱氧核糖水平降低，油酸和胆固醇水平升高；与模型对照组比较，艾灸组的变化主要体现于氨基丁酸、甲基胞嘧啶、喹啉酸、脱氧核糖水平升高；而TPT组较模型对照组的变化主要体现于胆固醇水平降低，油酸、对羟基肉桂酸和羟基苯丙酸水平升高；与艾灸组大鼠比较，TPT组的变化主要体现于胆固醇、甲基胞嘧啶、喹啉酸、氨基丁酸、脱氧核糖水平升高。结论 艾灸及TPT均可使RA模型大鼠尿液异常的氨基酸代谢、嘧啶代谢、脂质代谢等发生逆转，而艾灸治疗RA的特异性可能体现在氨基酸代谢调控方面。     

肝豆灵对铜负荷致肝损伤大鼠肝脏代谢产物的影响

目的 从代谢组学角度探讨肝豆灵对铜负荷大鼠肝损伤的干预机制。 方法 将21只大鼠随机分为正常组、模型组和肝豆灵组，每组7只。正常组大鼠接受普通饲料喂养，其余两组大鼠均接受高铜饲料喂养以复制铜负荷模型，共计12周。从第7周开始，肝豆灵组以肝豆灵灌胃，正常组和模型组予以等容量生理盐水灌胃，直至模型复制结束。以超高效液相色谱/四级杆-飞行时间质谱技术，结合主成分分析和偏最小二乘判别分析方法分析大鼠肝组织代谢物的变化。结果 模型组中溶血磷脂酰胆碱、油酸酰胺含量降低，色氨酸、苯丙氨酸、硬脂酰胺、牛磺酸鹅脱氧胆酸、甘氨胆酸、牛磺胆酸含量升高。肝豆灵组溶血磷脂酰胆碱、油酸酰胺含量升高，色氨酸、苯丙氨酸、硬脂酰胺、牛磺酸鹅脱氧胆酸、甘氨胆酸、牛磺胆酸的含量降低。〖JP〗 结论 肝豆灵对铜负荷大鼠肝损伤具有一定的干预作用，其机制可能与调节胆汁酸代谢、氨基酸代谢、脂代谢途径有关。     

基于AMPK通路探究电针结合有氧运动对肥胖大鼠的作用机制

目的 观察电针结合有氧运动对肥胖大鼠的影响,并初步探究其作用机制。方法 从45只SD大鼠中随机挑选8只作为空白组,其余大鼠用高脂饲料喂养8周建立肥胖大鼠模型,剔除模型复制失败的5只大鼠,将模型复制成功的大鼠分为模型组、电针组、运动组、电针联合运动组,每组8只;除空白组和模型组外,电针组采用电针、运动组采用运动、电针联合运动组采用电针联合运动措施干预8周。监测各组大鼠体质量,采用苏木精—伊红染色观察大鼠肝脏组织形态变化,采用ELISA法检测大鼠血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6、三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate,ATP）水平,Western blot法检测大鼠肝组织磷酸化肝激酶B1（phosphorylated liver kinase B1,p-LKB1）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated adenylate-activated protein kinase,p-AMPK）、乙酰辅酶A羧化酶（acetyl CoA carboxylase,ACC）蛋白表达水平。结果 与模型组比较,电针结合运动组可以显著降低大鼠体质量,血清TC、TG、HDL-C、IL-1β、IL-6水平,肝组织ACC蛋白表达水平（P＜0.05）;显著增加血清HDL-C、ATP水平,肝组织p-LKB1、p-AMPK蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 电针联合运动可改善肥胖大鼠脂质能量代谢,减少炎症反应,其机制可能与激活AMPK信号通路有关。     

多剂量复方苦参注射液对吉西他滨在大鼠体内药物代谢动力学参数的影响

目的 探讨多剂量复方苦参注射液与盐酸吉西他滨联合使用后对吉西他滨在大鼠体内药物代谢动力学参数的影响。方法 选取24只健康雄性SD大鼠，随机分为对照组和实验组（复方苦参高、中、低3个剂量组），实验组大鼠连续10 d尾静脉给予不同剂量的复方苦参注射液，对照组大鼠连续10 d尾静脉给予等量的生理盐水，于最后一天给药5 min后注射吉西他滨，分别于13个时间点眼底静脉丛采血，通过高效液相色谱法测定血样中吉西他滨的浓度，并采用DAS 2.0软件处理，得出吉西他滨药物代谢动力学参数。结果 各组大鼠体内吉西他滨药物代谢动力学过程符合二室模型拟合；与对照组比较，复方苦参高剂量组可以增加吉西他滨的药-时曲线下面积（P<0.05），并延长平均滞留时间（P<0.05）。结论 多剂量复方苦参注射液对大鼠体内吉西他滨的药物代谢动力学行为有明显影响，在临床上应根据病情需要联合使用复方苦参注射液与吉西他滨。     

参黄合剂对大鼠瘘管创面血管内皮细胞信号通路的影响

目的 观察参黄合剂对大鼠瘘管创面组织中血管内皮细胞信号通路FLK-1/KDR、PIP2、PIP3蛋白及其mRNA的影响。方法 将180只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、空白模型组、模型对照组、生理盐水组、高锰酸钾组、参黄合剂组，每组30只。采用弹簧纱条埋置于大鼠颈背部并加混合菌液的方法复制体表瘘管模型。术后l、7、14 d，分别采用Western blot法、RT-PCR法检测各组大鼠创面组织中FLK-1/KDR、PIP2、PIP3蛋白及其mRNA表达水平。结果 除空白对照组外，其余5组大鼠创面FLK-1/KDR、PIP2、PIP3蛋白及其mRNA表达水平均随术后时间的延长而明显升高；术后14 d，其余5组上述指标（除高锰酸钾组PIP2 mRNA外）表达水平显著高于术后1 d（P＜0.05）。术后1、7、14 d，高锰酸钾组和参黄合剂组FLK-1/KDR、PIP2、PIP3蛋白及其mRNA表达水平均高于空白对照组、模型对照组和生理盐水组；术后7、14 d，参黄合剂组FLK-1/KDR、PIP2、PIP3蛋白及其mRNA表达水平均显著高于空白对照组、模型对照组和生理盐水组（P＜0.05），部分指标表达水平显著高于高锰酸钾组（P＜0.05）。结论 参黄合剂对大鼠瘘管创面组织中血管内皮细胞信号通路相关因子的表达具有促进作用，从而促进血管新生，加速创面愈合。     

异甘草酸镁对CCl4致急性肝损伤大鼠肝组织CYP1A2、CYP2E1蛋白及其mRNA表达的影响

目的 观察异甘草酸镁对CCl4致急性肝损伤大鼠肝组织CYP1A2、CYP2E1蛋白及其mRNA表达的影响，从代谢酶方面探讨异甘草酸镁保肝作用的机制。方法 将大鼠分为正常对照组、模型组和给药组，每组6只。尾静脉注射给药，给药组给予20 mg/kg异甘草酸镁，正常组及模型组给予同容积生理盐水，连续14 d。模型组及给药组于给药第13天20：00点灌胃25% CCl4，剂量为1.6 mL/kg，制备大鼠急性肝损伤模型。各组大鼠于末次给药2 h后，从髂动脉放血处死，取肝组织进行苏木精-伊红染色，观察肝组织病理形态变化；采用RT-PCR及Western-blot检测各组大鼠肝组织中CYP1A2、CYP2E1 蛋白及mRNA表达水平。结果 肝组织病理学检查显示异甘草酸镁能改善肝组织损伤；模型组CYP1A2和CYP2E1蛋白及mRNA表达水平显著高于正常对照组（P<0.05），给药组CYP1A2和CYP2E1蛋白及mRNA表达水平较模型组显著降低（P<0.05）。结论 异甘草酸镁能够治疗肝损伤，其减毒机制可能与抑制CYP1A2、CYP2E1的表达有关。     

艾灸对腹泻型肠易激综合征模型大鼠血清白细胞介素-6水平和结肠组织β-防御素-2及其mRNA表达的影响

目的 探究艾灸天枢、上巨虚治疗腹泻型肠易激综合征（diarrhea predominant irritable bowel syndrome, D-IBS)的机制。方法 将30只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、艾灸组,每组10只。采用束缚加番泻叶煎剂灌胃的方法复制D-IBS模型。艾灸组大鼠每日艾灸双侧天枢、上巨虚20 min,连续7 d。采用ELISA法检测大鼠血清白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）水平,分别采用Western blot法、RT-PCR法检测大鼠结肠组织β-防御素-2（beta-defensin-2,BD-2）蛋白及其mRNA的相对表达水平。结果 艾灸能够显著降低D-IBS大鼠升高的血清IL-6水平和结肠组织BD-2蛋白及其mRNA表达水平（P＜0.05）。结论 艾灸天枢、上巨虚治疗D-IBS的机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。     

艾灸对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察艾灸三阴交、关元穴对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs)中Wnt/β-catenin信号通路的影响，探索艾灸影响骨代谢的内在机制。方法 将60只6月龄SD大鼠随机分为正常组（20只）和去卵巢组（40只），采用去卵巢法复制大鼠骨质疏松症模型，将去卵巢组再随机分为模型组、雌二醇组和艾灸组，每组10只。采用MTT法检测大鼠BMMSCs活性，酶联免疫吸附法检测大鼠BMMSCs中骨钙素（bone glaprotein,BGP）含量，实时荧光定量PCR法测定Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（low density lipoprotein receptor associated protein-5，LRP-5）、LRP-6、Dkk1、β-连环蛋白（β-catenin）和T细胞因子（T-cell factor, TCF）mRNA相对表达水平，Western blot法测定Wnt3a、Dkk1、β-catenin、TCF蛋白的表达水平。结果 在体外培养第12、16天时，艾灸可显著提高骨质疏松症大鼠降低的BMMSCs活性。艾灸可显著升高骨质疏松症大鼠BMMSCs中降低的BGP含量，显著上调BMMSCs中降低的LRP-5、LRP-6 mRNA的表达水平，显著上调降低的Wnt3a、β-catenin和TCF mRNA及其蛋白的表达水平，显著下调升高的Dkk1 mRNA及其蛋白的表达水平，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 艾灸三阴交、关元穴增加去卵巢大鼠BMMSCs活性，提高BGP含量，其机制与干预Wnt/β-catenin信号通路有关。     

肝豆灵抑制Notch信号通路干预铜负荷致肝纤维化大鼠肝脏上皮-间质转化

目的 探讨肝豆灵抑制Notch信号通路干预铜负荷大鼠肝纤维化上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的作用机制。方法 将雄性SD大鼠40只随机分为正常组，模型组，肝豆灵小、中、大剂量组，除正常组给予正常饲料外，其他各组喂饲硫酸铜饮食复制铜负荷大鼠肝纤维化模型。检测血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、透明质酸（hyaluronic acid，HA）水平及肝组织羟脯氨酸（hydroxyproline，Hyp）含量；分别采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察肝组织病理损伤及胶原沉积状况；采用RT-PCR检测肝组织转化生长因子-β1（transforming growth factor beta 1, TGF-β1）、Jagged1、Notch1、Notch3、Snail mRNA，采用Western blot检测Hes1、E-cadherin蛋白表达水平，采用免疫组织化学法检测α-SMA表达水平。结果 与正常组比较，模型组血清ALT、AST、ALP、HA水平及肝组织Hyp、胶原纤维含量均显著升高（P<0.05），肝组织TGF-β1、Jagged1、Notch1、Notch3、Snail mRNA表达水平以及肝组织Hes1、α-SMA蛋白表达水平显著升高（P<0.05），E-cadherin蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，肝豆灵中、大剂量组E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P<0.05），其余上述指标均显著降低（P＜0.05）。结论 肝豆灵通过抑制Notch信号通路，干预EMT环节，减少肌成纤维细胞转化生成及活化增殖，降低胶原纤维沉积而抗肝纤维化。     

桑叶提取物对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响

目的 采用“Cocktail”混合探针药物法，探究桑叶水提物（aqueous extract of mulberry leaves，AML）、桑叶醇提物（ethanol extract of mulberry leaves，EML）对大鼠体内细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）酶活性的影响，从代谢酶的角度预测它可能引起的药物相互作用，为临床合理用药提供参考。方法 选用非那西丁、安非他酮、双氯酚酸钠作为大鼠体内3种CYP450酶（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9）的探针药物。雄性SD大鼠连续灌胃桑叶提取物14 d，第14天灌胃后30 min尾静脉注射混合探针药物，根据不同时间点采血。采用超高效液相色谱- 串联质谱测定各组血药浓度，用DAS 2.0和SPSS 21.0软件拟合药物代谢动力学参数并进行统计学分析。结果 连续灌胃桑叶提取物14 d后，与9.0 g/L氯化钠注射液相比，AML组中非那西丁、双氯酚酸钠代谢减慢，安非他酮则不明显；与羧甲基纤维素钠组相比，EML组中安非他酮、双氯酚酸钠代谢减慢，非那西丁则不明显。结论 AML对大鼠体内CYP1A2、CYP2C9可能存在一定的抑制作用，对CYP2B6可能无显著性影响；EML对大鼠体内CYP2B6、CYP2C9可能存在一定的抑制作用，对CYP1A2可能无显著性影响。     

当归芍药散对慢性心力衰竭大鼠机体水液代谢障碍的作用及其机制

目的 探讨当归芍药散对慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）大鼠机体水液代谢障碍的影响及作用机制。方法 将72只大鼠随机分为正常组，模型组，芪苈强心胶囊组，当归芍药散低、中、高剂量组，每组12只，最终正常组，模型组，芪苈强心胶囊组，当归芍药散低、中、高剂量组纳入实验的大鼠数分别为8、6、8、7、8、8只。采用少量多次腹腔注射阿霉素复制CHF大鼠模型。给药4周后，采用心脏彩色多普勒超声仪测定各组大鼠左心室射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）、左心室短轴缩短率（left ventricular fractional shortening，LVFS）；HE染色观察心肾组织损伤情况；全自动生化分析仪检测心功能和肾功能指标［肌酸激酶（creatine kinase，CK）、肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme，CK-MB）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、血清肌酐（serum creatinine，SCr）、尿素氮（urea nitrogen，BUN）］，同时测定24 h尿量、腹水质量以及脏器指数等水液代谢指标；ELISA法测定大鼠血清N端脑钠肽前体（N-terminal pro-brain natriuretic peptide，NT-proBNP）水平以及一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）活性及一氧化氮（nitric oxide，NO）、环磷酸鸟苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）含量；免疫组织化学法检测大鼠心肌组织中水通道蛋白（aquaporin，AQP）1、AQP4和肾组织中AQP2表达水平；Western blot法检测大鼠心肌组织中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、AQP1、AQP4和肾组织中iNOS、AQP2表达水平。结果 当归芍药散可改善CHF大鼠心肾功能，减少血清NT-proBNP、NO水平（P＜0.05）；调节CHF大鼠24 h尿量、腹水等水液代谢指标以及脏器指数，改善心肌组织病理变化；降低心脏组织iNOS、AQP1、AQP4及肾组织中iNOS、AQP2表达水平（P＜0.05）。结论 当归芍药散能够改善CHF引起的水液代谢障碍，保护CHF大鼠的心肾功能，其作用机制可能与抑制NO的过度分泌，下调AQP1、AQP4、AQP2蛋白的表达水平有关。     

针灸督脉防治原发性骨质疏松大鼠的实验研究

目的：建立原发性骨质疏松大鼠模型，探讨针灸督脉早期干预对原发性骨质疏松大鼠骨代谢和激素水平的影响及可能作用机制。方法：选用Wistar大鼠以去卵巢法复制大鼠骨质疏松模型，随机分为假手术组、模型组、针灸督脉组和西药组。针灸督脉组于模型复制后3d开始，观察骨代谢相关指标及激素水平改变特点。结果：模型组血清钙、磷、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、骨密度(BMD)、雌二醇(E2)、降钙素(CT)水平均下降，而碱性磷酸酶(ALP)、甲状旁腺素(PTH)则升高。针灸督脉经3个疗程后对上述指标具有正常化调整作用。结论：针灸督脉早期干预下丘脑-垂体-巨隙轴可以防治原发性骨质疏松症。     

通督调神针灸法对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达的影响

目的 探究通督调神针灸法对局灶性脑缺血再灌注模型（middle cerebral artery occlusion model/reperfusion model,MCAO/R）大鼠脑保护及血管新生的作用。方法 将150只SD大鼠随机分为假手术组、通督调神针灸组、常规针刺组、通心络药物组和模型对照组,每组30只。通督调神针灸组取百会穴艾灸,大椎穴刺络放血;常规针刺组选取风池、曲池、合谷、足三里、三阴交针刺治疗;通心络药物组予以通心络胶囊,每日每次1.0 g/kg灌胃。假手术组、模型对照组不予治疗;其余各组每日治疗1次,共28 d。治疗第7、14、21、28天处死大鼠立即取脑,脑组织石蜡包埋后切片,免疫组织化学法检测缺血皮质区CD34、CD133阳性表达,采用ELISA法检测VEGFR-2的表达。结果 MCAO/R大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达量在第7天较高,随后逐渐降低;通督调神针灸法、常规针刺及通心络药物均可不同程度促进MCAO/R模型大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达（P<0.05）,且通督调神针灸法促进MCAO/R模型大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达水平高于常规针刺及通心络药物（P<0.05）。结论 通督调神针灸法能有效促进MCAO/R大鼠缺血皮质区CD34、CD133及血清VEGFR-2表达。     

复方槐花口服液治疗轻度混合痔临床观察

目的 观察复方槐花口服液治疗轻度混合痔的临床疗效。方法 将符合纳入标准的轻度混合痔患者150例按随机数字表法分为复方槐花口服液治疗组、痔疮片及地奥司明片对照组，每组50例，观察3组患者出血、疼痛、肛门肿物脱出评分及临床疗效。结果 与治疗前比较，3组患者治疗后出血、疼痛评分均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；复方槐花口服液组治疗前后出血、疼痛评分差值显著大于痔疮片组和地奥司明片组（P＜0.05）；3组患者治疗前后肛门肿物脱出评分比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。3组患者临床疗效分布比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 复方槐花口服液对轻度混合痔具有良好的临床疗效。