wiazrd clean up在混合斑DNA检验中的应用

目的 建立一种快速、简单、有效的混合斑DNA检验方法。方法 在100例检案中，利用wizard clean up直接对于精子消化液进行纯化浓缩。采用profiler plus试剂盒进行复合扩增，产物经ABI310基因分析仪检测。结果 从混合斑中成功获得精斑10个STR位点的DNA分型。结论 wizard clean up处理混合斑，能有效去除女性成份，得到精斑DNA进行分型。     

wizard clean up在混合斑DNA检验中的应用

目的建立一种快速、简单、有效的混合斑DNA检验方法。方法在100例检案中,利用wizardcleanup直接对精子消化液进行纯化浓缩。采用profilerplus试剂盒进行复合扩增,产物经ABI310基因分析仪检测。结果从混合斑中成功获得精斑10个STR位点的DNA分型。结论wizardcleanup处理混合斑,能有效去除女性成份,得到精斑DNA进行分型。     

DNA指纹图在法医学鉴定中应用的研究(Ⅲ)——应用“Myo”DNA探针进行混合斑中精液的个体认定

本文利用蛋白酶K、SDS对精液和阴道液、精液和血液的混合斑进行前处理,除去女性阴道脱落上皮细胞和血液细胞成份获得精子。提取精子DNA,用“Myo”小卫星DNA探针杂交进行DNA指纹检验,获得了高度多态性的精子DNA指纹图谱,与同一个体血液DNA指纹图谱比较完全一致,实现了混合斑中精液来源的个体认定。在对20多起强奸案例混合斑的实际应用中,成功地认定了强奸罪犯。     

混合斑中男、女性成份基因型的独立检测2例

混合斑是性犯罪案件中最常见的检材，通常也是性犯罪案件的关键证据。在做混合斑的 DNA检验时，大多数情况下要在提取 DNA的过程中尽量分离出女性细胞成分，以求获得精子的独立基因型，便于认定罪犯 [1,2]。但在某些特定条件下，混合斑中女性成分的基因型可能成为定案的关键证据。以下报道作者承办的 2个案例。 1案例 　　案例 1：某市一犯罪嫌疑人以高薪招工面试为名，将某女（ 17岁）诱骗到自己的居所强奸数次，威胁被害人不许报案，并许以高薪。由于矛盾心理等因素，受害人 4天后才报案，犯罪嫌疑人拒不承认，并声称不认识受害人。这…     

应用抗人精液单克隆抗体检验混合斑中精液成份的ABH血型物质

用本文报道的方法检测了123份混合斑检材（新鲜混合斑60份，陈旧混合斑63份），对保存在一年内的混合斑中精液成份中的血型物质检出率可达100％。     

混合斑中精子细胞分离实验条件探讨

在性犯罪案DNA检验中,含有精液和女性成分的混合斑检材,一般先采用两步裂解法分离精子与女性成分,然后再分别进行DNA检验。但在实践中发现,含有大量女性成分而精子较少的混合斑进行首次裂解需较长时间或需进行多次裂解,因不能得到足够的精子量使分型失败。为此本文通过调整试验条件,以期提高实验成功率。     

混合斑中女性成分鉴定2例

在强奸案件的检验鉴定中,一般只需对载体上(包括受害人阴拭、内裤、及现场提取的物品等)精斑中男性DNA成分与犯罪嫌疑人的血样进行比对,即可做出认定或排除的结论。但在某些特殊情况下,混合斑中女性成分的检验在案件鉴定中也起到很重要的作用。现报道两例如下。1案例材料案例1:     

精液和阴道液混合斑中异常B型物质的检验

精液和阴道分泌液混合斑ABO血型的检验多采用中和法与热解离法同时检验，通过两种方法互相印证，有利于正确判定混合斑中的精斑血型。在检验O型或A型阴道分泌液与A型精液的混合斑时，偶而出现异常的B型物质，这一现象在国外已有报道[1、2]。本人在检案中见到三例，现将检验情况报道如下：材料与方法一、混合斑检林本室1984～1993年检验的已确证血型为O型或A型精液和阴道分泌液混合斑擦拭纱布43例。其中O型女子与A型男子的混合斑13例，A型女子与A型男子的混合斑15例，A型女子与O型男子的混合斑9例，O型女子与O型男子的混合斑6例。二、…     

Clean—Up System在混合斑DNA提取中的应用

强奸案生物物证鉴定中经常遇到混合斑检材的DNA检验，作者在日常检验中用Clean-Up System（promega公司产品）替代混合斑差异裂解后的有机法提取步骤，效果良好，报道如下。     

限制性组合分析法推定男女混合斑中个体分型初探

正混合斑是指包含两名或两名以上个体的混合生物检材,在多数情况下,此类检材的DNA分型往往表现为两人或多人的混合分型,使结果分析较为复杂[1]。本文尝试采用2005年国际法医遗传学会(ISFG)推荐的关于混合斑结果分析中的计算方法对混合斑案件中单一个体DNA分型结果进行分析。1材料与方法1.1样本及检验样本由公安部物证鉴定中心提供强奸案件中床单上混合斑检材1份,为日常检案积累,根据案情调查证实该检材系混合斑。DNA检验采用Chelex法提取上述检材DNA,经DNATyperTM15 plus试剂盒扩增后在ABI 3130遗     

应用EZ-tape胶带分离提取混合斑精细胞

在强奸案件中的DNA检验往往需要将混合斑中男性精子与女性阴道上皮细胞彻底分离.常规方法是剪取载体及其上面附着的混合斑迹一起进行差异裂解分离出精子细胞与女性阴道上皮细胞.在实践中,由于载体的介入可能会带来不利因素,加大了混合斑分离的难度,往往得不到男性精斑的DNA分型或者得到的是混合DNA分型.本研究根据混合斑的形成特点,利用EZ-tape胶带既不破坏载体又可多次粘取载体表面混合斑迹的特性,巧妙地克服了载体带来的诸多不利因素,提高了男性精子的检出率.     

改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑精子DNA

目的采用改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑中精子DNA,并评价其应用价值。方法收集52例经常规差异裂解法检验含有女性分型的混合斑检材,采用改良差异裂解法结合硅珠法提取精子细胞DNA,IdentifilerTM试剂盒进行PCR扩增检验。并将常规差异裂解法结果作为对照。结果52例混合斑检材中,采用改良差异裂解法结合硅珠法检出单一男性精子成分有38例,男性分型检出率达到98．08％。结论改良差异裂解法结合硅珠法适合提取混合斑中精子DNA。     

FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验

目的建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法。方法收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEPX SpectrumOrangeTMY SpectrumGreenTM试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光捕获显微分离系统分离男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒结合低体积扩增技术分别对男女成分进行STR扩增。结果荧光原位杂交后,可清晰分辨混合斑中的男女细胞。捕获20个精子细胞可以得到完整的STR分型,检出率为80%。随着精子数目增多,检出率提高而等位基因丢失率降低。30个精子检出率最高,为95%。结论激光捕获显微分离联用FISH技术可用于混合斑中男女细胞DNA的分离检验。     

DNA IQ^TM系统在混合斑精子DNA检验中的应用

笔者在强奸案件混合斑精子的DNA检验中,以差异裂解法第一步消化去除女性细胞得到精子沉淀后,采用DNA IQTM系统直接提取混合斑中精子DNA,在200余份检材的检验中获得较满意结果。现将方法报告如下:1材料与方法1.1材料取自本实验室日常检案积累的混合斑样本216份。主要仪器和试剂采用9700PCR扩增仪(美国ABI公司)、ABI3100型遗传分析仪(美国ABI公司)、DNA IQTM系统(Promega公司)、AmpF1STRIdentifiler试剂盒((美国ABI公司)。1.2方法1.2.1 DNA提取参照差异裂解法,经过套管离心去除女性细胞后,得到沉淀精子,加入100~200ulDNA …     

PCR-RFLP法检验混合斑中精斑ABO血型及基因型

运用PCR-RFLP检验方法,对21份精斑样品、5份混合斑检材进行了检验,结果表明该方法能够很好地检测混合斑中精斑的ABO血型及基因型,有效地解决了非分泌型精斑的ABO血型及基因型,拓宽了混合斑中精斑的检验范围.     

精-血混合斑检出单一STR分型3例

两人或两人以上个体的体液、分泌液混合形成的斑痕称为混合斑。包括精-阴混合斑、精-血混合斑、精-精混合斑及血-血混合斑等。精-血混合斑因与血斑在肉眼观察上无明显差别,有时会被办案单位作为血斑送检,检验人员如果不予注意,可能漏检。笔者在日常检案中遇到3例精-血混合斑,均被办案单位作为血迹要求检验,实验室检出单一STR分型,因与案件情况不符,     

检验女性成份排除涉嫌性犯罪1例

性犯罪检案中,混有犯罪分子精液和女性阴道分泌液的混合斑是目前最常见的检材之一。实验室一般采用二步消化的方法处理后,单独对精子基因型作出检验,对第一步消化后所得到的上清液不予单独检验。     

混合精斑染色涂片的STR-PCR检验

在查证性犯罪的案件中，为了确证混合斑是否含有精液，要制作涂片进行染色镜检有无精子。对于已经染色的混合斑（精液和阴道液混合物）涂片进行PCR分析，获得精子或／和阴道细胞DNA的遗传信息。对于认定犯罪分子，有时对涉及女性无名尸体或尸体已不存在的受害人进行个人识别认定，具有重要的参考意义。作者对在混合斑检验中确证精液存在的酸性复红美蓝染色涂片和苏木素伊红染色涂片进行了STR－HUMTH01位点的检测，现报告如下。材料与方法1．样品制备取1对夫妇的精液和阴道液混合物，搅匀，制备涂片．经酸性复红美蓝染色法和苏木素伊红…     

泥土中精斑的DNA检验

泥土混合物检材在案件检验中经常遇到,去除泥土对DNA检验的影响,得到理想的检验结论是检验者关心的共同问题,作者成功对1例遗留在泥土中的精液混合斑进行DNA检验。我们设计了以下检验过程,对提取过程和纯化过程进行了简化,得到了理想的检验结论。1案例资料取含有精液混合斑的泥土适量检材两份,分别装入两个1.5ml的离心管中,编为1、2号,采用PK消化去除女性细胞后。1号管采用5%chelex-100结合PK、DTT提取DNA。2号管经有机法消化后采用酚氯仿提取DNA,在加入等体积氯仿混匀离心后,转移上层液至干净离心管中,进行纯化浓缩,得到纯化的DNA…     

强奸案中女性DNA物证分析的意义

强奸案是法医DNA检验工作中经常遇到的刑事案件,常规鉴定方法既是从被害人阴道拭子、内裤等相关物证载体上提取精斑DNA并分型,据此对犯罪嫌疑人进行排查,直至认定罪犯。笔者发现,大多数情况下对强奸案件相关物证检验时,精液与阴道分泌物的混合斑中女性物质DNA的检测及其数据库检索往往被忽视,而在实际检案中送检物证与被害人相关性的认定恰恰对案件的定性起着至关重要的作用。下面通过检案实例进一步阐述其重要性。1案件资料案例12002年11月10日接报:杨某之妻陈某诉11月8日上午被张某强奸。案例22004年9月10日,被害人杨某(女,11岁)自述…